茵栀黄注射液对胆汁淤积性肝炎大鼠氧化应激反应及FXR基因表达的影响

【目的】探讨茵栀黄注射液对胆汁淤积性肝炎的改善作用及可能的机制。【方法】采用α-异硫氰酸萘酯(ANIT)灌胃法复制胆汁淤积性肝炎大鼠模型。将28只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、茵栀黄注射液组(YI组)、熊去氧胆酸组(UDCA组),每组7只。造模结束后,采用全自动生化仪检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TB)水平,采用比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性变化,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察肝组织病理改变,采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)法检测肝组织法尼酯X受体(FXR)m RNA的表达。【结果】与正常对照组比较,模型组大鼠出现明显的肝脏病理损害,血清ALT、AST、ALP、TB水平,肝组织MDA活性、FXR m RNA表达水平均显著升高,肝组织SOD活性下降(P<0.05)。与模型组比较,YI组大鼠肝脏病理损害明显减轻,血清ALT、AST、ALP、TB水平及肝组织MDA活性均显著下降,FXR m RNA表达水平及肝组织SOD活性上升(P<0.05)。【结论】茵栀黄注射液能显著改善肝内胆汁淤积性肝炎大鼠肝损伤,其机制可能与抑制氧化应激反应、促进FXR基因表达有关。

法尼酯X受体基因敲除加重顺铂所致急性肾损伤

目的:法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)是配体激活转录因子核受体超家族成员,属于胆汁酸受体。FXR在肾组织中表达,可通过调节糖脂代谢、抑制炎症反应、拮抗氧化应激及肾纤维化等机制减轻肾损伤。但FXR是否参与肾脏疾病中的自噬尚不明确。本研究旨在探讨FXR在顺铂所致急性肾损伤中的作用,并探讨其机制是否与调控自噬相关。方法:选取12周雄性野生型(wild type,WT)或FXR基因敲除(knockout ofFXR,FXR-KO)小鼠各12只,随机分为WT组、WT+顺铂组、FXR-KO组、FXR-KO+顺铂组,每组6只,WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组予腹腔注射顺铂(20 mg/kg),WT组和FXR-KO组予腹腔注射等体积的顺铂溶剂。72 h后处死小鼠,留取血液和肾组织标本。采用免疫比浊法检测血清BUN和SCr水平,HE染色后在光学显微镜下观察肾组织病理改变,采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测LC3、p62的蛋白质表达水平,在电子显微镜下观察受损线粒体清除和溶酶体底物聚集的情况,采用TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡的情况。结果:WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,小鼠SCr和BUN均明显升高(P<0.01或P<0.001),且FXR-KO+顺铂组小鼠SCr和BUN明显高于WT+顺铂组(均P<0.05)。在光学显微镜下可见WT组和FXR-KO组小鼠肾组织无明显病理改变,WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠均存在肾小管上皮细胞空泡样或颗粒样变性,细胞扁平,管腔扩张,刷状缘脱落,甚至出现基底膜裸露,管型形成。WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,小鼠肾小管损伤评分均明显升高(均P<0.001),且FXR-KO+顺铂组评分明显高于WT+顺铂组(P<0.05)。在透射电镜下可见WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠小管上皮细胞线粒体肿胀变圆、空泡化、嵴断裂或消失,溶酶体呈不均匀、高密度团块状,且以FXR-KO+顺铂组改变更为明显。蛋白质印迹法结果显示:WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,小鼠肾皮质LC3-II/LC3-I比值下降,p62表达增加(P<0.05或P<0.01);且相较于FXR-KO组,FXR-KO+顺铂组小鼠LC3-II/LC3-I比值下降,p62表达增加更为明显(均P<0.05)。免疫组织化学结果显示:WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠肾皮质总LC3和p62表达均明显增加,且以FXR-KO+顺铂组增加更为显著。TUNEL结果显示:WT组和FXR-KO组小鼠染色阴性或仅见数个小管上皮细胞凋亡,WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组凋亡细胞数量均增多;WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,肾小管上皮细胞凋亡率明显增加(均P<0.001),且FXR-KO+顺铂组凋亡率明显高于WT+顺铂组(P<0.05)。结论:FXR基因敲除加重顺铂所致急性肾损伤,其机制可能与抑制自噬和促进凋亡有关。

Role of farnesoid X receptor in establishment of ontogeny of phase-I drug metabolizing enzyme genes in mouse liver

The expression of phase-I drug metabolizing enzymes in liver changes dramatically during postnatal liver maturation.Farnesoid X receptor(FXR) is critical for bile acid and lipid homeostasis in liver.However,the role of FXR in regulating ontogeny of phase-I drug metabolizing genes is not clear.Hence,we applied RNA-sequencing to quantify the developmental expression of phase-I genes in both Fxr-null and control(C57BL/6) mouse livers during development.Liver samples of male C57BL/6 and Fxr-null mice at6 different ages from prenatal to adult were used.The Fxr-null showed an overall effect to diminish the "day-1 surge" of phase-I gene expression,including cytochrome P450 s at neonatal ages.Among the 185 phase-I genes from 12 different families,136 were expressed,and differential expression during development occurred in genes from all 12 phase-I families,including hydrolysis: carboxylesterase(Ces),paraoxonase(Pon),and epoxide hydrolase(Ephx); reduction: aldoketo reductase(Akr),quinone oxidoreductase(Nqo),and dihydropyrimidine dehydrogenase(Dpyd); and oxidation: alcohol dehydrogenase(Adh),aldehyde dehydrogenase(Aldh),flavin monooxygenases(Fmo),molybdenum hydroxylase(Aox and Xdh),cytochrome P450(P450),and cytochrome P450 oxidoreductase(Por).The data also suggested new phase-I genes potentially targeted by FXR.These results revealed an important role of FXR in regulation of ontogeny of phase-I genes.

法尼醇类受体基因在胆囊中的表达

目的:探讨法尼醇类受体基因(FXR)的表达与胆囊的关系。方法:采用含17000cDNA克隆的基因微矩阵,与2例正常胆囊之cDNA杂交,发现FXR基因信号后,进一步进行RT-PCR和测序验证。结果:基因芯片能够检测出FXR在正常胆囊中的表达,其平均灰度值为16.80。在进一步的RT-PCR实验中,扩增出FXR的特异性片段,为352碱基。该PCR片段经测序后,其结果在GENEBANK数据库经BLAST比对,证实其同源性与FXR一致。结论:FXR在胆囊中表达,提示该基因可能还有新的未知功能。

MDR3、FXR基因在肝内胆汁淤积的遗传学研究进展

肝内胆汁淤积的发病机制复杂,目前仍不十分清楚。有研究认为遗传因素扮演着重要的角色,进行性家族性肝内胆汁淤积已证实由基因突变引起,胆汁的分泌过程由多个胆汁相关性基因调控。而法尼醇受体基因(FXR)对胆汁分泌的间接调控及其所形成的复杂网络,使其成为近几年胆汁淤积方面的研究热点之一。

原发性肝癌中法尼酯衍生物X受体基因调控机制的研究进展

目的总结法尼酯衍生物X受体(farnesoid X receptor,FXR)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)调控机制中的研究进展及其在临床中可能的应用价值。方法对目前国内外有关FXR在HCC发生、发展中的作用机制研究的相关文献进行综述。结果在HCC的发生、发展中,通过炎症相关通路及表观遗传沉默可下调FXR的表达,并且FXR在HCC中下调、治疗靶点、肿瘤耐药等调节机制中发挥着重要的作用。结论FXR在HCC的发生、发展中具有调控作用,深入研究FXR在HCC发生、发展的作用机制可使FXR有望成为其治疗的潜在靶点。

核受体参与调控细胞自噬的研究进展

核受体是一种转录调节因子,参与细胞生长、分化、凋亡、物质代谢及肿瘤形成等几乎所有的生物学过程,并可受与其结合的小分子调控。自噬是一种特殊的程序性细胞死亡方式,是高度保守的代谢过程,一旦发生自噬缺陷或自噬过量都会引起相应疾病的发生发展。近年来,众多研究表明核受体与自噬相关。因此,本文主要综述核受体参与调控细胞自噬的研究进展,着重介绍几种核受体参与细胞自噬调控的机制研究,以期了解核受体参于调节细胞自噬的分子基础,为治疗相应疾病提供可能的思路及治疗策略。