P19细胞向心肌细胞分化过程中FABP3基因表达的变化

目的观察脂肪酸结合蛋白（FABP3）基因在胚胎癌细胞（P19细胞）向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化，探讨FABP3基因与心肌细胞分化之间的关系。方法P19细胞经1％二甲基亚砜（DMSO）诱导至第15天，用肌钙蛋白I（cTnI）抗体行蛋白质斑迹法（Western blot）鉴定心肌细胞分化，并采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot技术检测FABP3基因mRNA和蛋白的表达水平。结果诱导的P19细胞于第8天出现自发性节律跳动，Western blot检测cTnI蛋白呈阳性。在P19细胞分化过程中，FABP3基因mRNA表达呈先下调（0～6d）后再逐渐上调（5～15d）的表达模式，每隔两个时间点均有显著差异（P〈0．05）；FABP3蛋白也呈现相同的表达模式，但其表达水平在0～4d间无显著差异（P〉0．05）。结论FABP3基因可能参与心肌细胞的分化。

ω-3鱼油脂肪乳对肝细胞氧化损伤的修复作用及其机制

目的观察ω-3鱼油脂肪乳对肝细胞氧化损伤的修复作用,并探讨其机制。方法体外培养人肝细胞系HL7702细胞。取对数生长期的HL7702细胞分成对照组、模型组和观察组,每组9孔。对照组仅加培养基常规培养;模型组、观察组在培养基中加入500μmol/L过氧化氢(H_2O_2),培养1 h后观察组加入0.5%ω-3鱼油脂肪乳;另设空白对照组,只加培养基,无细胞。各组继续培养4 h后收集细胞,油红O染色观察各组细胞内脂滴变化,CCK-8法测算各组细胞存活率,DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞内活性氧簇(ROS),比色法检测各组细胞培养上清液丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),COD-PAP单试剂比色法检测各组细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),硫代巴比妥酸法检测各组细胞内丙二醛(MDA),黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD),实时荧光定量PCR法检测各组细胞中过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)αmRNA,Western blotting法检测各组细胞中肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)相对表达量。结果光镜下可见脂滴染为橘红色。对照组组HL7702肝细胞排列紧密,仅见少许橘红色脂滴。模型组肝细胞可见大量橘红色脂滴并伴有脂滴融合现象。观察组肝细胞可见较多橘红色脂滴,但与模型组比较显著减少。对照组、模型组、观察组细胞存活率分别为67.25%±4.68%、71.72%±2.47%、100%。观察组细胞存活率高于模型组(P<0.05),但低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞内ROS增高(P<0.05),细胞培养上清液ALT、AST增高(P均<0.05),细胞内TG、TC、MDA增高(P均<0.05),细胞内SOD降低(P<0.05),PPARαmRNA降低(P<0.05),L-FABP相对表达量降低(P<0.05)。与模型组比较,观察组细胞内ROS降低(P<0.05),细胞培养上清液ALT、AST均降低(P均<0.05),细胞内TG、TC、MDA均降低(P均<0.05),细胞内SOD活性增高(P<0.05),PPARαmRNA增高(P<0.05),L-FABP相对表达量增高(P<0.05)。结论ω-3鱼油脂肪乳可修复人肝HL7702细胞氧化损伤,其机制可能与其上调LFABP/PPARα信号通路相关因子的表达、维持肝细胞脂质稳态有关。

FABP3过表达对斑马鱼ROS和线粒体ATP含量的影响

目的探讨脂肪酸结合蛋白3(FABP3)过表达对斑马鱼胚胎活性氧(ROS)及线粒体ATP含量的影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼作为空白对照(C组)。收集受精后24、48hpf斑马鱼胚胎,采用流式细胞术和化学发光法分别检测斑马鱼ROS和ATP含量。结果与C组相比,A组24hpf时斑马鱼ROS水平降低,ATP含量增加(P<0.05);而在48hpf时,两组间斑马鱼ROS水平和ATP含量无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼线粒体功能起保护作用。

补中益气汤加减对糖尿病心肌病大鼠心功能及心肌细胞FABP3,PPARγ蛋白表达的影响

目的:观察补中益气汤加减对2型糖尿病大鼠心功能及心型脂肪酸结合蛋白3(FABP3),过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)蛋白的影响,探讨其保护2型糖尿病心肌病的作用机制。方法:6周高糖高脂饮食后,给予链脲佐菌素(STZ)腹腔注射(50 mg·kg-1)建立糖尿病大鼠模型,再按血糖随机分为正常组,模型组,补中益气汤加减组(21 g·kg-1),盐酸二甲双胍组(2 g·kg-1)。连续给药6周后通过超声心动图检测各组大鼠心脏结构及功能情况,结合所测血糖及血脂水平,判断为糖尿病心肌病大鼠造模成功。取大鼠心脏组织采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌形态;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠心肌FABP3,PPARγ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的空腹血糖,总胆固醇(TC),甘油三脂(TG),胰岛素(INS)水平均显著增高(P <0. 01),心率减慢,舒张期、收缩期左室内径(LVIDd)增加,收缩期左室后壁厚度降低,A峰E峰流速比值(E/A),短轴缩短率(FS),射血分数(EF)均显著降低(P <0. 01),FABP3蛋白表达均显著升高,PPARγ蛋白表达水平均显著降低(P <0. 01);与模型组比较,补中益气汤加减组大鼠空腹血糖,TC,TG,INS水平均显著降低(P <0. 01),心肌病变显著改善(P <0. 01),FABP3蛋白表达显著降低,PPARγ蛋白表达显著增加(P <0. 01)。结论:补中益气汤加减可改善糖尿病心肌病大鼠糖脂代谢紊乱,改善糖尿病心肌病大鼠心功能的作用,可增加心肌细胞的PPARγ表达,同时降低FABP3蛋白的表达。

FABP3对P19细胞增殖的影响及其生物信息学分析

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因过表达对P19细胞分化、增殖的影响及FABP3基因的生物信息学特征。方法构建FABP3过表达载体及相应的空载体,转染P19细胞,经0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导分化为心肌细胞,定量PCR检测肌钙蛋白T(cTnT)和转录调控因子GATA4基因的表达,MTT法检测P19细胞增殖,应用在线数据库软件分析FABP3的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亚细胞定位等。结果与空载体相比,FABP3基因过表达能抑制cTnT、GATA4 mRNA表达及P19细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。生物信息学分析显示,FABP3基因mRNA全长1097 bp,开放阅读框长402 bp,编码133个氨基酸,相对分子质量为14 858 Da,蛋白主要位于胞浆。结论 FABP3基因过表达显著抑制心肌细胞分化、增殖,生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。

FABP3过表达对斑马鱼胚胎心脏发育及线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育形态及线粒体DNA拷贝数影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼胚胎作为空白对照(C组)。收集受精后12、24、48、72hpf斑马鱼胚胎,利用体式显微镜观察其发育情况,并统计其死亡率;RT-PCR技术检测胚胎线粒体DNA拷贝数。结果 A组斑马鱼心脏在12、24、48、72hpf各时间点发育大体形态、死亡率与C组比较均无明显差异。A组24hpf时斑马鱼线粒体DNA的拷贝数高于C组(P<0.05);而在48、72hpf时,两组间斑马鱼线粒体DNA拷贝数无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育的形态无明显影响,对线粒体功能起保护作用。

FABP3基因荧光载体构建及其蛋白的亚细胞定位

目的构建脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因的荧光表达载体FABP3-pEGFP-N2,并应用绿荧光融合蛋白技术检测FABP3蛋白的亚细胞定位。方法 RT-PCR法获得FABP3基因编码框,克隆到pEGFP-N2载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染P19细胞后,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞内FABP3蛋白定位。结果成功克隆FABP3基因片段,并将其重组到pEGFP-N2载体中。荧光显微镜和激光共聚焦显微镜显示,FABP3蛋白主要分布于P19细胞的胞浆和胞核中。结论成功构建了FABP3-pEGFP-N2真核表达载体,FABP3在P19细胞的胞浆和胞核中呈弥漫分布特点。

FCCP对FABP3基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响

目的探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)对脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响。方法构建FABP3表达沉默载体(A组)及相应的空载体(B组),包装病毒后感染P19细胞,建立稳定转染FABP3沉默的P19细胞株,采用实时定量PCR检测干扰效率。给予FCCP 2.5μmol/L(C组)、5μmol/L(D组)干预FABP3沉默的P19细胞,采用荧光素酶化学发光法检测细胞ATP含量,流式细胞术观察线粒体膜电位的变化。结果 B组FABP3基因表达量较A组下调(0.50±0.08vs.2.23±0.42)(P<0.05)。与A、B组相比,C、D组细胞ATP生成减少(2.47±0.58、1.05±0.13vs.0.09±0.03、0.12±0.02)(P<0.05),而细胞线粒体膜电位升高(358.36±12.23、389.66±12.13vs.437.35±9.27、473.21±19.65)(P<0.05)。结论FABP3基因在维持P19细胞线粒体功能中发挥重要作用。