基于心肌重塑和心功能标志物NT-proBNP、H-FABP水平探讨黄芪注射液治疗慢性心力衰竭的作用

【目的】基于心肌重塑和心功能标志物N端脑钠肽前体(NT-proBNP)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)水平探讨黄芪注射液治疗慢性心力衰竭的作用。【方法】将80例心气虚型慢性心力衰竭患者随机分为对照组和研究组,每组各40例。对照组给予西医常规治疗,研究组在对照组的基础上给予黄芪注射液治疗,疗程为1周。观察2组患者治疗前后Lee氏心衰计分、中医证候积分、明尼苏达心力衰竭生活质量调查问卷(MLHFQ)评分及6 min步行距离的变化情况,检测2组患者治疗前后左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)和左室舒张末期内径(LVEDD)等心功能指标以及血清NT-proBNP、H-FABP的水平变化,并评估2组患者的临床疗效。【结果】(1)疗效方面,治疗1周后,研究组的总有效率为90.00%(36/40),对照组为62.50%(25/40),组间比较(χ^(2)检验),研究组的疗效明显优于对照组(P<0.01)。(2)结局指标方面,治疗后,2组患者的Lee氏心衰计分、中医证候积分及MLHFQ评分均较治疗前明显下降(P<0.01),且研究组的下降幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(3)6 min步行距离方面,治疗后,2组患者的6 min步行距离均较治疗前明显增加(P<0.05或P<0.01),且研究组的增加幅度明显优于对照组(P<0.05)。(4)实验室指标方面,治疗后,2组患者的血清NT-proBNP、H-FABP水平均较治疗前明显下降(P<0.01),且研究组的下降幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)心功能指标方面,治疗后,2组患者的LVEF、SV水平均较治疗前明显升高(P<0.01),且研究组的升高幅度均明显优于对照组(P<0.01);而2组患者的LVEDD治疗前后及治疗后组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】在西医常规治疗基础上联合黄芪注射液治疗心气虚型慢性心力衰竭患者疗效确切,能有效缓解患者临床症状,改善患者心功能,提高患者生活质量。

尿Fetuin-A和尿L-FABP对早期糖尿病肾病的诊断价值研究

目的探讨尿胎球蛋白A(Fetuin-A)和尿肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)对2型糖尿病患者早期糖尿病肾病(DKD)的诊断价值。方法选取2018年1月—2021年6月在广西医科大学第一附属医院住院的2型糖尿病患者162例,根据尿微量白蛋白/尿肌酐(Scr)比值(UACR)水平分为正常白蛋白尿(NA)组,微量蛋白尿(MA)组,临床蛋白尿(CA)组,随机选取50例健康体检者为正常对照(NC)组。检测受试者的尿Fetuin-A/尿Scr比值和尿L-FABP/尿Scr比值,以Pearson相关分析和受试者工作特征曲线(ROC曲线)作分析评价。结果与NA组、NC组相比,CA组和MA组的尿Fetuin-A/尿Scr及尿L-FABP/尿Scr水平明显增高(P<0.001),各组尿Fetuin-A/尿Scr及尿L-FABP/尿Scr水平随UACR的增高而增高;尿Fetuin-A/尿Scr及尿L-FABP/尿Scr与估算肾小球滤过率(eGFR)水平呈负相关(r分别为-0.67和-0.72,均P<0.05);尿Fetuin A/尿Scr和尿L-FABP/尿Scr以及两者联合检测的ROC曲线下面积分别为0.842、0.867、0.931。结论尿Fetuin A和尿L-FABP可作为早期DKD的诊断标志物,2个指标的联合检测能进一步提高诊断早期DKD的效能。

基于I-FABP的鲫肠道通透性检测方法的建立

肠道通透性与肠道稳态及个体健康状况直接相关,目前尚缺乏鱼类肠道通透性的定量评价方法及试剂。血清中肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)是肠道通透性的重要血清生物学指标,可用于肠道通透性的定量评价。为建立鲫(Carassius auratus)血清I-FABP的定量检测方法,克隆了鲫I-FABP基因,经原核表达和纯化,并利用重组蛋白分别免疫新西兰白兔(New Zealand white rabbit)及小鼠(Mus musculus),制备了兔源及鼠源多克隆抗体,其效价均为1∶80000。以纯化的兔源多克隆抗体作为包被蛋白,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的鼠源多克隆抗体作为酶标抗体,通过优化各反应条件建立了基于鲫I-FABP的双抗体夹心酶联免疫检测方法(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)。标准曲线的线性回归方程为y=0.0035x+0.0367,拟合度较高R2为0.9991,临界值为0.0906。批内及批间变异系数分别为1.17%~5.50%及0.16%~4.78%,具有较好的重复性。以该方法对54份样品进行检测,与商业化试剂盒对比,符合率为100%。构建的DAS-ELISA检测方法可用于鲫肠道通透性的定量评估。鉴于鱼类I-FABP的保守性,该方法或可用于其他鱼类肠道通透性的定量评价。

左卡尼汀对急性心肌梗死急诊PCI患者血清H-FABP及6MWT的影响

目的探讨急性心肌梗死（AMI）急诊PCI术后应用左卡尼汀，对血清心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）及近期预后的影响。方法选择AMI行急诊PCI患者102例，随机分为治疗组54例和对照组48例，实验组在急诊PCI中加用左卡尼汀3．0g＋0．9％生理盐水250mL静脉滴注，以后每日1次，连续7d以上。对照组行急诊PCI治疗及常规药物治疗。比较两组血浆H-FABP、CK-MB、cTnI水平和住院期间LVEF值，随访90d后六分钟步行试验（6MWT）距离。结果实验组术后血浆H-FABP、CK-MB、cTnI水平较对照组明显降低，LVEF高于对照组（P〈0．05），随访90d后实验组6MWT距离明显高于对照组（P〈0．05）。结论AMI急诊PCI患者补充左卡尼汀对缺血心肌细胞有保护作用，可明显改善患者的心功能。

如皋鸡EX-FABP基因遗传多态性及其与肌内脂肪含量的相关分析

以60周龄和自繁后的12周龄的如皋鸡作为试验材料,采用PCR-SSCP技术对细胞外脂肪酸结合蛋白(EX-FABP)基因进行单核苷酸多态性及遗传特异性分析。结果检测到2个SNP突变,分别为4271 G/A、4281 G/A突变,有3种基因型。最小二乘差异显著性检验结果表明,在60周龄时,AA型含量最高,显著高于AB型(P<0.05);12周龄时,AB型含量最高,BB型最低;60周龄的肌内脂肪含量显著低于12周龄时的含量(P<0.05)。

兴凯湖翘嘴鲌H-FABP基因的克隆及组织表达分析

为研究H-FABP基因在兴凯湖野生和养殖翘嘴鲌Culter alburnus各相同组织中表达的差异,根据Gen Bank中已知鲤科鱼类的H-FABP基因序列进行引物设计,采用RT-PCR和RACE方法克隆出兴凯湖翘嘴鲌心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的全CDS区序列(402 bp)、3'UTR区序列(242 bp)和5'UTR区序列(134 bp)共778 bp的c DNA序列。将其提交到Gen Bank中,获得基因登陆号为KJ629286,通过Blast比对发现,兴凯湖翘嘴鲌H-FABP基因的CDS区与鲤Cyprinus carpio和齐口裂腹鱼Schizothorax prenanti的同源性高达91%;氨基酸同源性比对显示,兴凯湖翘嘴鲌H-FABP氨基酸序列与虹鳟Oncorhynchus mykiss的同源性为76%,与斑马鱼Danio rerio的同源性为85%;分析野生翘嘴鲌7个组织(鳃、心脏、肠、肝胰脏、肌肉、肾脏、脾脏)以及养殖翘嘴鲌除心脏之外的6个相同组织H-FABP基因的表达情况,结果显示,H-FABP基因在野生组和养殖组肝胰脏中表达量均为最高,与其他组织的表达量有显著性差异(P<0.05),H-FABP基因在野生组和养殖组各相同组织中的表达量无显著性差异(P>0.05)。研究表明,兴凯湖翘嘴鲌H-FABP基因序列高度保守,与鲤形目鱼类的同源性更高。

重组质粒pGEX-6P-1/Sj-FABPc的构建及在大肠杆菌中的表达

目的 构建基因工程菌株 ,获得重组蛋白 Sj- FABPc(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )。方法 用 PCR法从日本血吸虫 c DNA文库中扩增 Sj- FABPc基因片段 ,再将该片段重组于 p GEM- T中并进行 DNA测序鉴定 ,经酶切后将目的片段构建成重组质粒 p GEX- 6 P- 1/ Sj- FABPc,转化于大肠杆菌 BL2 1 ,IPTG诱导表达。用 Glutathione Sepharose TM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化 ,Pre Scission TMProtease酶对融合蛋白进行解离 ,获得纯化的 14k Da Sj- FABPc。SDS- PAGE和 West-ern Blot方法对表达产物进行鉴定。结果 获得 p GEX- 6 P- 1/ Sj- FABPc菌株 ,分离纯化出 14k Da Sj-FABPc,表达量为 10 .5 2 m g/ L。Western Blot显示 ,表达蛋白能被日本血吸虫免疫兔血清识别。结论 重组蛋白 Sj- FABPc可高效表达并有良好的抗原性。

丹参酮ⅡA对缺血再灌注损伤大鼠心律失常及IMA、H-FABP水平的影响

目的研究丹参酮ⅡA对缺血再灌注损伤大鼠心肌组织和心律失常情况的保护作用及其对心肌组织缺血修饰白蛋白(IMA)和心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的影响。方法取Wistar大鼠40只,随机分成5组,每组8只,即假手术组、模型组和丹参酮ⅡA高、中、低剂量组(20,10,5mg·kg-1·d-1),假手术组和模型组给予等容量生理盐水,丹参酮ⅡA各剂量组给予相应药物,均为灌胃给药,喂养7d,末次给药2h后进行手术。除假手术组在手术时只穿线不进行冠脉结扎和再灌注之外,其余各组采用冠脉结扎再松开的办法制备大鼠缺血再灌注损伤模型。记录Ⅱ导联心电图,并对大鼠心律失常进行评分;常规HE染色观察心肌组织的病理改变;ELISA法检测心肌组织IMA、H-FABP的表达。结果大鼠心肌缺血再灌注损伤后,心肌组织病理损伤心律失常发生明显,心肌IMA含量显著增加,H-FABP含量显著降低。丹参酮ⅡA干预后,心律失常评分显著降低,心肌组织病理改变减轻,心肌组织I-MA含量显著降低、H-FABP水平明显升高,丹参酮ⅡA高、中剂量组心肌组织IMA含量,与模型组比较,具有显著性差异(P<0.05);丹参酮ⅡA高剂量组H-FABP含量显著增加,与模型组比较,具有显著性差异(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对缺血再灌注损伤大鼠心肌组织和心律失常情况具有良好的保护作用,可抑制缺血再灌注损伤后大鼠心肌组织IMA的升高和H-FABP水平的降低。

细粒棘球蚴内蒙株FABP基因cDNA的克隆与核酸疫苗的构建

根据GenBank中细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白(FABP)基因cDNA序列设计引物,并在起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴(内蒙株)的原头蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因。回收其纯化的产物克隆到pMD19-T载体后进行序列分析。克隆到的FABP基因cDNA序列长402bp,开放阅读框(ORF)编码133个氨基酸。FABP基因cDNA亚克隆到pcDNA3.1(+)中,构建核酸疫苗pcDNA3.1-FABP-NM,经测序验证,结果正确。

牦牛脂肪型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)多态性分析

脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)属脂肪酸结合蛋白家族(FABPs)成员,参与调节哺乳动物细胞内脂肪浓度,进而影响肌肉内脂肪含量(IMF),因此A-FABP可作为影响IMF的候选基因。本研究采用PCR-SSCP技术检测甘南牦牛、青海牦牛、天祝白牦牛(Bos grunniens)A-FABP基因部分第3内含子、第4外显子及部分3'-UTR区单核苷酸多态性(SNPs),分析检测区域分子遗传特征。结果表明,3类群牦牛引物扩增区域发现5种等位基因A-E;同普通牛A-FABP基因序列比对发现6处SNPs,其中第4外显子区存在c.4222A>G的同义突变;3'-UTR区c.*94T>A只存在于牦牛群体,是其区别于普通牛的遗传特征之一。各等位基因在群体间分布差异较大,其中天祝白牦牛只发现3种等位基因,而青海牦牛发现4种等位基因,这可能与牦牛类群的地域分布及选育程度有关。3类群牦牛A-FABP基因检测位点表现为中度多态(PIC为0.29～0.36),有效等位基因数较高,可作为潜在的牦牛肉质性状分子标记位点。

脑血管病患者血清H-FABP,NSE,S-100B含量的临床意义

目的 观察脑血管病患者血清H-FABP,NSE,S-100B蛋白含量变化及其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测44例急性脑梗死患者、25例短暂性脑缺血患者、45例非脑血管病对照组的血清H-FABP,NSE,S-100B蛋白含量.结果 急性脑梗死组患者血清H-FABP（9.83±5.98 ng/ml）,NSE（14.65±11.27 ng/ml）,S-100B蛋白（0.90±1.34 ng/ml）含量较对照组有不同程度的升高（P〈0.05）,三个指标间存在较好的相关性,H-FABP是诊断急性脑梗死最敏感的指标.结论 血清H-FABP,NSE,S-100B蛋白含量可观察疗效、判断预后,对早期脑梗死与短暂性脑缺血发作也有鉴别诊断价值.

急性脑梗死患者血清H—FABP的动态变化及临床意义

目的观察急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）患者血清心型脂肪酸结合蛋白（heart—type fatty acid—bind-ing protein，H—FABP）含量的动态变化，探讨其与脑梗死体积、神经功能缺损程度等方面的相关性。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测47例ACI患者、40例正常健康对照组的血清H—FABP含量。结果ACI组血清H-FABP含量在24h内（9．74±5．71ng／ml）显著高于正常对照组（1．15±0．76ng／ml），3d（13．61±7．03ng／ml）时达峰值，7d（6．23±3．60ng／ml）开始下降，3W后（1．85±1．13ng／ml）降至正常；病情严重组显著高于轻、中型组（P〈0．01）；大病灶组显著高于中、小病灶组（P〈0．01）。结论血清H—FABP含量较好地反映了急性脑梗死的脑损伤程度，可用来判断脑梗死急性期脑损伤程度及观察疗效和预后判断。

秦川牛H-FABP基因第1外显子SNP及其与部分肉用性状相关性的研究

【目的】分析秦川牛心脏脂肪酸结合蛋白基因（H-FABP）第1外显子的遗传变异与部分肉用性能指标的相关性。【方法】随机选择相同饲养条件下的146头18-20月龄秦川牛阉牛，采用PCR-SSCP结合测序技术，对秦川牛H-FABP基因第1外显子的遗传变异进行检测；运用SPSS统计程序中的GLM模型，分析其与部分肉用性能指标的关系。【结果】秦川牛H-FABP基因第1外显子130 bp处具有PCR-SSCP可检测到的SNP位点：Y=T→C。对该SNP位点具有不同基因型的个体进行分型并与88头秦川牛的肉用性状指标进行GLM分析，表明AB型个体的后腿围、背膘厚、大理石花纹等性状极显著高于AA型个体（P〈0.01），AB型个体的胴体胸深和嫩度显著高于AA型个体（P〈0.05），AB型个体的背膘厚极显著高于BB型个体（P〈0.01）；另外，BB型个体的后腿围、大理石花纹等性状极显著高于AA型个体（P〈0.01）。【结论】秦川牛H-FABP基因第1外显子上存在SNP位点且与肉用性状有较强的关联性，说明H-FABP基因可作为秦川牛部分肉用性状的候选基因。

血清I-FABP在诊断脓毒症大鼠急性肠功能障碍中的作用及谷氨酰胺对其表达的影响

目的探讨血清脂肪酸结合蛋白(intestinalfatty acid binding protein,I-FABP)在脓毒症鼠肠功能障碍评估中的作用及谷氨酰胺对其表达水平的影响。方法以健康SD大鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立脓毒症模型,随机分为3组,对照组不建模,仅给予百普素喂养,模型组建模后给予百普素喂养,谷氨酰胺组建模后同时给予百普素和谷氨酰胺喂养。评估血清I-FABP浓度与肠粘膜损伤指数的相关性及比较3组大鼠血清I-FABP含量。结果血清I-FABP浓度与肠粘膜损伤指数呈正相关(P<0.05);与对照组相比,模型组和谷氨酰胺组血清I-FABP浓度均明显增高(P<0.05);而谷氨酰胺组中血清I-FABP浓度显著低于模型组(P<0.05)。结论血清I-FABP可作为脓毒症肠功能障碍评估的无创性指标;谷氨酰胺能改善脓毒症鼠的肠粘膜的损伤程度。

陆川猪H-FABP基因克隆与序列分析

为了研究心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因与陆川猪肌内脂肪沉积的相关性,寻找猪脂肪沉积的主要候选基因,试验对陆川猪H-FABP基因进行了克隆与序列分析,参照Gen Bank已经公布的猪H-FABP基因序列(EF619344)设计引物,扩增克隆了陆川猪H-FABP基因的编码区序列,并应用DNAStar、Prot Scale等生物软件对其进行了序列分析和蛋白质二级结构预测。结果表明:陆川猪H-FABP基因编码区全长402 bp,编码133个氨基酸,碱基序列在235位点由A突变为G,并引起相应氨基酸由精氨酸转变为甘氨酸。其与野猪的亲缘关系最近,碱基同源性为99.3%;与人类、绵羊和家牛的碱基同源性也在90%以上。陆川猪H-FABP成熟肽包含有25.56%的α螺旋、12.03%的β转角、25.56%的无规卷曲和36.84%的延长线。说明H-FABP基因可作为研究陆川猪脂肪沉积的候选基因之一。

绵羊H-FABP基因不同组织表达差异研究

为了检测心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因在绵羊不同组织的表达差异,试验采用实时荧光定量PCR法检测绵羊H-FABP基因在不同组织中的表达情况。结果表明:H-FABP基因在不同的组织中表达量不同,由高到低依次为腿部半腱肌、背最长肌、心脏、肾脏、脾脏、十二指肠、肝脏、肺脏。

日本血吸虫(中国大陆株)FABPc重组抗原高效融合表达、纯化及免疫学活性鉴定

目的 构建Sj-FABPc表达克隆 ,获得大量纯化rSj-FABPc重组 (日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )抗原 ,了解其作为候选疫苗抗原的潜能。方法 以PCR法从Sj-cDNA库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体pGEX - 6P - 1进行融合表达 ,经GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析柱和PreScissionTMProtease酶切后纯化出rSj-FABPc ,Westernblot鉴定其抗原性 ,以rSj-FABPc免疫小鼠 ,制备特异性抗血清 ,并用ELISA法检测重组抗原的免疫活性。结果 纯化的rSj-FABPc能被血吸虫成虫免疫兔血清和急、慢性血吸虫病人血清所识别 ,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答 ,抗体滴度为 1∶12 80 0。结论 rSj-FABPc具有良好的抗原性 。

日本血吸虫中国大陆株重组脂肪酸结合蛋白(Sj-FABPc)的特性和抗原表位的分析

目的 了解重组的日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白 (r Sj- FABPc)的特性及预测其抗原表位。方法 以PCR方法从 Sj- c DNA文库中扩增 Sj- FABPc基因片段 ,并亚克隆于载体 p GEM- T,对其核苷酸序列进行测定。以 GOL DKEY○R软件和 Swiss- Model数据库分析 Sj- FABPc的核苷酸序列和其编码的蛋白质特性 ,预测重组抗原的表位。结果 核酸序列分析证明 ,克隆基因确为 Sj- FABPc,并由此推导出 Sj- FABPc理论氨基酸顺序 ,以该序列的分析表明 ,重组 Sj- FABPc抗原具有 3个抗原表位区和三个可能的脂肪酸结合表位。结论 Sj- FABPc抗原表位可能与脂肪酸结合表位的主要片段为同一肽段。

九龙牦牛H-FABP与ADD1基因的表达谱研究

为了研究心脏型脂肪酸结合蛋白（Heart fatty acid—binding protein，H—FABP）与脂肪细胞决定和分化因子1（Adipocyte determination and differentiation factor-1，ADD1）在九龙牦牛肉质形成中的作用，试验以九龙牦牛为研究对象，利用半定量RT—PCR检测其在九龙牦牛不同组织和不同发育阶段的表达差异，获得其组织表达和时序表达谱。结果表明：检测到H—FABP基因在九龙牦牛的心脏、脾脏、背最长肌和脂肪组织中表达，在肝脏和肾脏中未表达；ADDl基因仅在九龙牦牛的背最长肌和脂肪中表达，在心脏、肝脏、脾脏和肾脏中均未表达。时序表达谱分析结果显示，H—FABP与ADD1基因在0．5岁牦牛背最长肌中的表达丰度显著高于3．5～5．5岁和9岁以上的牦牛（P〈0．05），3．5—5．5岁牦牛背最长肌中的表达丰度显著高于9岁以上的牦牛。

莆田黑猪A-FABP基因的群体遗传结构分析

为了研究莆田黑猪脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因的群体遗传结构,试验采用PCRRFLP技术对112头莆田黑猪A-FABP基因的多态性进行检测。结果表明:在A-FABP基因BsmⅠ酶切位点检测到多态性,由2个等位基因控制,定义为B和b,存在3种基因型,即BB、Bb和bb,BB基因型出现的频率较高,基因型频率为0.696 4,B为优势等位基因,基因频率为0.803 6。群体遗传分析结果表明,A-FABP-BsmⅠ位点属于中度多态。卡方检验结果表明,A-FABP-BsmⅠ位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。