金属离子对Trichoderma longibrachiatum UN32石斛碱型生物碱产量的影响

石斛碱是传统植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的特征药用活性成分,结构上属于石斛型生物碱(dendrobine-type total alkaloids,DTTAs)。石斛碱的积累受周期和环境的影响,仅从植物中获取难以满足需求。该研究的对象Trichoderma longibrachiatum UN32是实验室前期通过复合诱变获得的产DTTAs的正突变株。为提高UN32的生物碱产量,使产物表达水平趋于稳定,该研究从UN32发酵培养基中无机盐的添加量出发,利用响应面法确定金属离子的最优配比。根据Plackett-Burman法设计筛选出对响应结果影响程度最显著的3个因素分别为Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+),其最佳添加时间和添加浓度分别是Cu^(2+)0.5 mmol/L(第6天)、Fe^(2+)0.4 mmol/L(第6天)和Zn^(2+)0.7 mmol/L(第3天)。响应面统计的结果显示,当模型响应值生物碱量达最大值时,Cu^(2+)、Zn^(2+)和Fe^(2+)的浓度分别为0.54、0.69、0.39 mmol/L,此时生物碱产量达到(317.36±6.48)μg,比初始培养基提高了72.68%。综上,金属离子及其不同组合对菌株UN32生物碱的积累具有促进作用,该方法具有较好的开发价值和应用前景。

连翘半日花烷型二萜和生物碱类化合物及其抗病毒活性

研究连翘抗炎、抗病毒活性部位中的化学成分及其抗病毒活性。通过综合运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及高效制备色谱等方法对连翘中的化合物进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据对化合物的结构进行鉴定,采用MTT法对得到的部分化合物进行抗病毒活性研究。结果表明,从连翘体积分数95%乙醇提取物的氯仿部位和乙酸乙酯部位分离得到9个半日花烷型二萜和6个生物碱类化合物。9个半日花烷型二萜分别为:19-hydroxy-ent-labda-8(17),13 E-dien-15-oic acid(1);ent-labda-8(17),13 Z-dien-15,19-dioic acid(2);ent-labda-8(17),13 E-dien-15,19-dioic acid(3);3β-hydroxy-8(17),13 E-labdadien-15-oic acid(4);enantio-labda-8(20),13 E-dien-15,18-dioic acid(5);Forsyshiyanin A(6);Forsyshiyanin B(7);18-hydroxy-7-oxolabda-8(9),13 E-diene-15-oic acid(8);3-hydroxy-8(17),13 E-labdadien-15-oic acid(9)。6个生物碱类化合物分别为:Forsyshiyanine A(10);(7 R)-6,7-dihydro-7-methyl-5H-cyclopenta[c]pyridine(11);Forsyshiyanine B(12);(-)-bicuculline(13);(-)-egenine(14);(-)-7′-O-methylegenine(15)。其中化合物10、12为首次从连翘中发现,也是首次从连翘属植物中发现。MTT结果显示,化合物1、2、10、12对于H1N1流感病毒及呼吸道合胞病毒的增长具有抑制作用。

不同灭菌工艺对生川乌中乌头类双酯型生物碱成分及产品质量影响研究

目的:在保证生川乌药效的前提下,筛选最优灭菌工艺。方法:分别采用热压灭菌、干热灭菌、钴-60辐照灭菌三种方法进行灭菌处理,采用HPLC法考察灭菌后乌头类双酯型生物碱含量变化情况,同步考察药材及其产品微生物数量是否符合标准,以综合评估大生产适用工艺。结果:3种灭菌方法均能使产品符合成品质量标准,综合考虑灭菌后样品微生物数量、指标成分含量、效率等因素,干热灭菌工艺是最优工艺。结论:在干热灭菌条件下,产品微生物限度符合要求,乌头类双酯型生物碱转移率较优,生产效率可接受,可作为工业生产最优工艺。

单酯型生物碱类对CHF大鼠心肌细胞的保护作用及机制

目的 分析单酯型生物碱类对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 将100只大鼠随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组20只。C、D、E组在慢性心力衰竭模型建模成功后给予附子浓缩液灌胃,剂量分别为2.79、5.57、11.14 g/kg。灌胃6周后检测各组大鼠病理组织学变化、超声心动图指标、心肌细胞凋亡率,心肌组织促凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)表达量,心肌细胞自噬蛋白、BNP、AI、PO_(2)、IL-6、TNF-α水平及PI3K/AKT通路蛋白表达量。结果 B~E组超声心动图指标室间隔收缩末期厚度(IVSs)、室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左心室后壁收缩末期厚度(LVPWs)、左心室后壁舒张末期厚度(LVPWd)。心肌细胞凋亡率,Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平,心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ,BNP及AI水平均高于A组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量均低于A组(P<0.05);C~E组IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率及Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平、自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平低于B组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量高于B组(P<0.05);随着附子浓缩液剂量的增加,IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率、Bax、Caspase-8表达,IL-6、TNF-α水平、心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平降低,LVEF及Bcl-2表达、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量升高(P<0.05)。结论 单酯型生物碱类通过上调p-PI3K、p-AKT蛋白表达量,激活PI3K/AKT通路,缓解心力衰竭恶性进展,且呈剂量依赖性。

紫外-可见分光光度法测定舒筋消肿散中双酯型生物碱限量

目的建立舒筋消肿散中双酯型生物碱的限量测定方法。方法应用紫外-可见分光光度法,采用改良盐酸羟胺-高氯酸铁法显色,在520 nm波长处测定乌头碱对照液和供试品溶液的吸光度,计算供试品溶液中双酯型生物碱的含量。结果乌头碱对照液浓度在23.1~231.0μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,回归方程A=0.00705C+0.000134,r=0.999891。乌头碱平均回收率92.42%,RSD=1.20%(n=9)。测得10批舒筋消肿散中双酯型生物碱限量,以乌头碱计分别为:0.131%、0.065%、0.077%、0.117%、0.108%、0.081%、0.097%、0.122%、0.103%、0.092%。结论建立的测定方法简便、准确、灵敏、重现性良好,适用于舒筋消肿散中双酯型生物碱限量的测定。

桑枝总生物碱联合胰岛素泵对老年2型糖尿病患者血糖波动的影响

目的观察桑枝总生物碱(SZ-A)联合胰岛素泵对老年2型糖尿病患者血糖波动的影响。方法老年2型糖尿病患者60例,随机分为对照组和试验组各30例,对照组给予胰岛素泵注射赖脯胰岛素,试验组在对照组基础上给予桑枝总生物碱(0.05 g/次,每日3次,随餐服用),研究期间使用连续动态血糖监测系统(CGMS)连续监测血糖,比较两组入院次日及治疗1 w后的血糖平均水平(MBG)、血糖标准差(SDBG)、变异系数(CV)、平均血糖波动幅度(MAGE)、葡萄糖目标范围内时间(TIR)、葡萄糖管理指标(GMI);观察治疗过程中发生的疗效和不良反应情况。结果试验组住院时间、血糖达标时间、初次达标时胰岛素用量、停泵前胰岛素用量、总波动次数均短于/少于对照组(均P<0.05)。治疗1 w后,两组MBG、SDBG、CV、MAGE、GMI、日波动次数均较治疗前明显下降,且试验组明显低于对照组(均P<0.05);两组TIR较治疗前明显上升,且试验组明显高于对照组(P<0.05)。试验组高血糖事件、低血糖事件发生次数明显低于对照组(均P<0.05)。两组胃肠道不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论桑枝总生物碱联合胰岛素泵治疗老年T2DM患者,可明显改善血糖,有效降低血糖波动,减少胰岛素用量,缩短住院时间,且具有一定安全性。

桑枝总生物碱与阿卡波糖在痰浊瘀阻型餐后高血糖患者中的临床疗效比较

目的:比较桑枝总生物碱(SZ-A)和阿卡波糖(AC)在痰浊瘀阻型餐后高血糖患者中的临床效果及中医证候改善差异性。方法:将90例痰浊瘀阻型2型糖尿病患者。患者被随机分为对照组(接受AC治疗)和治疗组(接受SZ-A治疗),对照组30例,治疗组60例。研究期为12周,期间定期对患者进行随访,并观察药物的临床指标。结果:治疗后,治疗组的中医临床疗效为75%,显著优于对照组的40%。在血液指标方面,两组患者治疗后的血糖、胰岛素、胆固醇等指标均有明显改善。尤其在甘油三酯(TG)的改善程度上,SZ-A组明显优于AC组。此外,两组患者的体重指数(BMI)在治疗后都有所下降。结论:SZ-A和AC在降低痰浊瘀阻型餐后高血糖患者的血糖水平上具有同等效果,但SZ-A在改善中医证候积分、临床疗效、降低总胆固醇、炎症反应、以及减少胃肠道不良反应方面更优于AC。

桑枝总生物碱片联合达格列净在HbA1c≥9%的 T2DM患者中的应用研究

目的:探讨桑枝总生物碱片联合达格列净在糖化血红蛋白(HbA1c)≥9%的2型糖尿病(T2DM)患者中的应用效果。方法:选取2021年10月—2022年10月本院收治的80例T2DM患者,随机分为A组与B组,各40例。A组予以达格列净治疗,B组予以桑枝总生物碱片联合达格列净治疗。比较治疗前后血糖和血脂水平、胰岛细胞功能、蒙特利尔认知功能评估量表(MoCA)评分,以及治疗期间低血糖发生情况。结果:治疗后,B组血糖和血脂水平均低于A组,胰岛细胞功能指标优于A组,MoCA总分高于A组(P<0.05);治疗期间,两组低血糖发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:桑枝总生物碱片联合达格列净治疗应用于HbA1c≥9%的T2DM患者中,可以改善糖脂代谢水平,增强胰岛细胞功能和认知功能,且安全性好。

参附汤配伍人参对附子中单酯型生物碱类成分药代动力学的影响

目的:建立血浆中苯甲酰新乌头原碱(BMC)、苯甲酰乌头原碱(BAC)、苯甲酰次乌头原碱(BHC)的超高效液相色谱-串联质谱含量测定方法,研究参附汤中配伍人参对上述3种成分在大鼠体内药代动力学参数的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠随机分为附子组(2.5 g/m L)和参附汤组(5.0 g/m L),每组各6只。给予相应药物灌胃后,于5 min、10 min、20 min、30 min、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h和24 h经尾静脉采血。离心去上清,乙腈沉淀蛋白,经Waters Xbridge C18色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸水(A)∶乙腈(B)=18∶82。采用电喷雾离子源、多反应离子监测模式测定3种单酯型生物碱成分的血药浓度,Phoenix Win Nonlin 6.0软件计算药代动力学参数。结果:3种单酯型生物碱成分测定的日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)均小于9.60%,提取回收率为94.400%~107.000%,稳定性RSD均小于9.50%。与附子组比较,参附汤组BMC、BAC、BHC的达峰浓度和药时曲线下面积显著升高,表观清除率明显降低,且达峰时间均提前,BAC的表观分布容积降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:建立了一种灵敏度高、准确可靠测量参附汤配伍前后附子中单酯型生物碱类成分的方法,且参附汤配伍人参可改变附子中单酯型生物碱的药代动力学行为。

岩黄连总生物碱抑制M2型巨噬细胞抗小鼠肝癌实验研究

目的:探讨岩黄连总生物碱能否通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制M2型巨噬细胞发挥抗小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤生长的作用。方法:建立小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤模型,岩黄连总生物碱高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)给药10 d后,称量瘤体及脾脏、胸腺质量,计算脏器系数,HE染色观察肿瘤组织病理学改变,RT-qPCR检测瘤组织M2型巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达。体外培养RAW264.7细胞,用IL-4、IL-13(20 ng/mL)诱导细胞M2极化,岩黄连总生物碱高、中、低浓度(25、12.5、6.25μg/mL)干预24 h,流式细胞仪检测CD206阳性表达;RT-qPCR检测CD206、ARG-1、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞内PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果:动物实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中剂量H_(22)肝癌细胞实体瘤的生长受到抑制,脾脏系数与胸腺系数显著升高(P<0.05),HE染色切片中肿瘤细胞浸润数减少,区域坏死肿瘤组织中CD206 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中浓度组M2型巨噬细胞标志物CD206阳性表达及CD206、ARG-1、IL-10 mRNA和通路PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:岩黄连总生物碱可通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞M2型极化发挥抗小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤生长作用。

云南狗牙花中Ibogan型生物碱类成分的研究

目的:对夹竹桃科狗牙花属植物云南狗牙花Tabernaemontana yunnanensis Tsiang的Ibogan型生物碱类化学成分进行研究。方法:利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高速逆流色谱、HPLC等对云南狗牙花95%乙醇提取物进行化学成分的分离纯化,采用质谱、NMR等方法确定化合物结构。结果:从云南狗牙花中分离得到12个Ibogan型生物碱类化合物,分别鉴定为:3-(2-oxopropyl)voacangine(1)、voacangine-7-hydroxyindolenine(2)、(3S)-3-cyanoisovoacangine(3)、3-(2-oxopropyl)-coronaridine(4)、obovatine(5)、3-(β-hydroxyethyl)-coronaridine(6)、19-epi-heyneanine(7)、19-epi-isovoacristine(8)、3-oxo-voacangine(9)、ibogamine(10)、coronaridine pseudoindoxyl(11)、voacangine pseudoindoxyl(12)。结论:其中,化合物1、3~6、9、11和12为首次从该植物中分离得到,化合物11为首次从该属植物中分离得到。

人参再造丸中6种乌头类生物碱的含量测定方法研究

建立人参再造丸(浓缩丸)中6种乌头类生物碱含量的检测方法。采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)对人参再造丸(浓缩丸)中双酯型生物和单酯型生物碱的含量进行测定,梯度洗脱模式下,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,电喷雾离子源(正离子模式),监测模式为多反应监测。结果表明,6种生物碱均有良好的线性关系,精密度试验、稳定性试验、重复性试验中RSD均低于5%,平均回收率和RSD分别为97.27%~108.29%和1.99%~4.01%。所建立的方法能同时准确、快速地测定人参再造丸(浓缩丸)中6种乌头类生物碱成分的含量,专属性强、灵敏度高、重复性好,能为全面有效管控人参再造丸(浓缩丸)质量提供参考。

桑枝总生物碱联合高压氧治疗对老年2型糖尿病患者HOMA-IR及HOMA-β等指标的改善作用

目的探讨桑枝总生物碱联合高压氧治疗对改善老年2型糖尿病患者稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及稳态模型胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)等指标的作用。方法选择老年糖尿病患者为治疗对象,根据患者主观参与意愿分为对照组、高压氧组、生物碱组和联合组。对照组行常规治疗。高压氧组在对照组基础上增加高压氧治疗。生物碱组在对照组基础上口服桑枝总生物碱片治疗。联合组在对照组基础上联合高压氧疗法和桑枝总生物碱片治疗。治疗后,从患者血糖、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、稳态模型胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、C-肽(C-P)、不良反应发生率、治疗效果等方面进行比较。结果联合组空腹血糖(FBG)显著低于对照组、高压氧组和生物碱组(P<0.05)。生物碱组和联合组餐后2 h血糖(2 h BG)显著低于对照组和高压氧组(P<0.05)。生物碱组HOMA-IR低于对照组和高压氧组,联合组HOMA-IR低于对照组、高压氧组和生物碱组,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物碱组HOMA-β、C-P高于对照组和高压氧组,联合组HOMA-β、C-P高于对照组、高压氧组和生物碱组,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。4组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论桑枝总生物碱联合高压氧治疗可有效改善老年2型糖尿病患者HOMA-IR及HOMA-β等指标,提高治疗效果。

SPE-HPLC测定复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量

目的:建立复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量测定方法。方法:采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对复方羊角颗粒进行净化,高效液相色谱法测定,色谱柱:SVEA^(TM)C_(18)Opal(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶12),流动相B为0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(含0.05%冰醋酸),梯度洗脱;检测波长:235 nm;柱温:25℃;流速:1.0mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的线性范围分别为2.27~98.61(r=1.0000)、0.61~26.53(r=1.0000)、1.00~43.50μg·m L^(-1)(r=0.999 9);平均回收率及RSD分别为93.9%及2.4%、95.0%及2.6%、91.0%及3.0%。结论:本方法可为复方羊角颗粒的质量控制提供依据。

乌头碱类双酯型二萜生物碱水解反应的电喷雾质谱分析

阐明了乌头碱类双酯型二萜生物碱水解反应过程,确定水解反应的类型以及最佳水解条件。利用电喷雾离子阱质谱分析比较了生川乌提取液,制川乌提取液及其水解反应提取液中生物碱的差异。生川乌炮制后生物碱大多数由双酯型水解转化为单酯型,水解反应最容易发生的位置在C8位,水解反应的类型是烷氧键发生断裂的酯的碱性水解。

HPLC测定附子及其炮制品中3种双酯型生物碱的含量

目的：建立同时测定附子中3种双酯型生物碱——新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量的HPLC分析方法。方法：Zorbax Eclipse XDB C18柱，40mmol乙酸铵缓冲液-乙腈，梯度洗脱，流速1.0mL·min^-1，检测波长230nm。结果：3种双酯型生物碱新乌头碱、乌头碱、次乌头碱均达到了较好的分离，分别在0．0357-1.784μg（r=0．9999），0.0126-0．632μg（r=0．9997）和0．0334-1．672μg（r=0．9997）呈良好的线形关系。结论：该方法简便、快速、灵敏，可有效地用于附子的鉴别和内在质量控制。

黄连中5种小檗碱型生物碱在糖尿病大鼠体内的药动学

目的:研究灌胃黄连水提物后,其中所含的小檗碱、黄连碱、表小檗碱、药根碱及巴马汀等5种小檗碱型生物碱在糖尿病模型大鼠和正常大鼠体内的药动学行为。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠实验性糖尿病模型,与正常大鼠共同饲养6周后,灌胃给予黄连水提物,于给药后0.25,0.5,1.0,1.5,2,2.5,3,4,6,8,12和24h眼底静脉丛取血,分离血浆后以LC-MS方法同时测定血浆中小檗碱、黄连碱、表小檗碱、药根碱和巴马汀的浓度,以DAS软件拟合求算相关药动学参数。结果:小檗碱型生物碱在正常大鼠体内的生物利用度较差,但在糖尿病模型大鼠体内,5种生物碱的cmax提高了1.7～3.3倍,AUC0-24提高了1.5～3.5倍。结论:糖尿病可能对5种生物碱在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程中一个或多个环节产生影响,提高了其体内生物利用度,有利于其治疗作用的发挥。

高效液相色谱法测定黄连药材中小檗碱型生物碱的含量

目的：分离并测定黄连药材中小檗碱型生物碱的含量。方法：采用ODS柱(150mm×6．0mm)，以乙腈-50mmo1·L^-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH=3．0)(50：50)，内含25mmo1·L^-1 SDS为流动相，345nm检测。结果：在以上条件下，药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马亭和小檗碱5种生物碱可以完全分离，测定了8种不同黄连药材中4种生物碱的含量。结论：本法可用于黄连药材的研究，也可用于黄连等含小檗碱中药材及制剂的常规检验。

不同炮制方法对附子中乌头总碱和双酯型生物碱含量的影响

目的:探讨不同炮制方法对附子中有效成分含量的影响。方法:分别采用炒法、蒸法、胆水浸泡及混合溶液浸泡对附子进行炮制。采用UV和RP-HPLC方法分别测定附子四种加工品中总生物碱和新乌头碱、乌头碱、次乌头碱等双酯型生物碱的含量。结果表明:附子不同炮制品中生物碱的含量呈现明显的差异,蒸制品和炒制品含量可以达到中国药典规定酯型生物碱以乌头碱计,不得过0.15%的规定。结论:不同炮制方法对附子生物碱含量有显著影响。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Ⅲ型胶原表达的影响

目的观察刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)小鼠病理及Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)表达的影响。方法 BALB/c小鼠背部注射盐酸博莱霉素建立SSc模型,给予刺山柑总生物碱进行干预,HE染色观察小鼠皮肤及肺组织病理变化,ELISA法检测小鼠皮肤及肺组织COL-Ⅲ表达水平。结果高剂量刺山柑总生物碱可明显改善SSc小鼠皮肤和肺部炎症及纤维化,降低COL-Ⅲ表达水平(P<0.05)。结论刺山柑总生物碱对SSc组织纤维化有一定改善作用。