刺山柑水提物对溃疡性结肠炎小鼠的粪便菌群及其代谢物的影响

本研究使用3%葡聚糖硫酸钠连续7 d供应小鼠自由饮用诱导溃疡性结肠炎小鼠模型,采用水提醇沉法制备了刺山柑(Capparis spinosa Linn.)水提物,探讨了其对溃疡性结肠炎小鼠体重、脏体比、疾病活动指数和粪便菌群及其代谢物的影响。结果显示,400 mg/kg刺山柑水提物灌胃给药溃疡性结肠炎小鼠7 d后,显著改善了溃疡性结肠炎小鼠的体重减轻,降低了疾病活动指数评分。此外,400 mg/kg刺山柑水提物灌胃给药能够增加溃疡性结肠炎小鼠的粪便菌群多样性和益生菌。代谢物分析结果显示,刺山柑水提物增强了溃疡性结肠炎小鼠乙醛酸和二羧酸的代谢、碳水化合物的代谢与吸收以及脂肪酸的代谢。刺山柑水提物能够通过调节粪便菌群与代谢状况干预溃疡性结肠炎。

美洲大蠊粪便提取物对大鼠离体心脏功能的影响研究

[目的]探究美洲大蠊粪便提取物(PAF)对大鼠离体心脏功能的影响。[方法]采用Langendorff灌流装置构建SD大鼠离体心脏灌流模型,检测各组左室收缩压(LVSP)、左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、心率(HR)等血流动力学指标的变化。[结果] PAF可显著提升正常大鼠离体心脏的LVSP和±dp/dtmax,且呈剂量依赖性,其中0.5 mg/mL的高剂量作用效果最为显著,但PAF对HR并未表现出明显的影响。[结论] PAF升高LVSP,增大±dp/dtmax,对大鼠离体心脏有正性肌力作用,能够增强心肌收缩力。PAF对心率未表现出明显影响,有利于降低心脏耗氧量,可能是其能够发挥心脏保护作用的重要原因。

桑叶提取物对断奶仔猪粪便中主要微生物数量和臭气物质生成的影响

本试验旨在研究饲粮中添加桑叶提取物(MLE)对断奶仔猪粪便中主要微生物数量和臭气物质生成的影响。试验选取48头健康且初始体重[(8.287±0.141)kg]相近的“杜×长×大”三元杂交去势断奶仔猪,按体重随机分为2组,每组6个重复,每个重复4头猪。对照组饲喂基础饲粮,MLE组饲喂基础饲粮+0.1%的MLE。试验期28 d。试验期最后3 d(第26~28天),采集断奶仔猪的新鲜粪便,检测其主要微生物数量和臭气物质含量。结果表明,与对照组相比:1)MLE组粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量显著提高(P<0.05),粪便中大肠杆菌数量显著降低(P<0.05);2)MLE组粪便中乳酸、丁酸、戊酸以及总挥发性脂肪酸含量显著提高(P<0.05),粪便中乙酸、丙酸含量有升高的趋势(0.05≤P<0.10),粪便pH则有降低的趋势(0.05≤P<0.10);3)MLE组粪便中氨态氮(NH3-N)含量有降低的趋势(P=0.056);4)MLE组粪便中对甲酚含量显著降低(P<0.05),粪便中吲哚和粪臭素含量有降低的趋势(0.05≤P<0.10);5)MLE组粪便中尸胺、腐胺、组胺、色胺、酪胺和总生物胺含量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮添加0.1%的MLE能够增加断奶仔猪粪便中碳水合物降解菌乳酸杆菌和双歧杆菌的数量,减少含氮化合物降解菌大肠杆菌的数量,从而提高粪便中乳酸及挥发性脂肪酸等有益代谢物的含量,减少NH3-N、生物胺、吲哚和粪臭素等臭气物质的生成和排放。

粪便微生物粗提液修复溃疡性结肠炎的研究

研究了粪便微生物粗提液对溃疡性结肠炎修复作用的影响。将64只健康小鼠随机分为4组,即完全空白组(n=20)、肠炎空白组(n=20)、SASP(柳氮硫胺吡啶)组(n=12)和FMT(粪便微生物移植)组(n=12),处理组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠盐(DSS)溶液8 d,建立溃疡性结肠炎(UC)模型,并于建模第8 d,解剖完全空白组、肠炎空白组小鼠各8只,以验证UC模型是否建立成功。造模后,SASP组、FMT组同时分别给予柳氮硫胺吡啶片及鼠源粪便微生物提取液干预治疗4周,灌胃频率2 d/次,然后进行为期两周的后续观察,期间观察各组小鼠表观状态、体重变化,结肠组织长度变化,结肠组织病理学改变,并测定各组血清IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度变化。结果表明:与肠炎空白组小鼠相比,粪便微生物移植疗法使小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(p<0.05),并使结肠长度及体重显著增加,结肠组织更加完整。因此证实,粪便微生物提取液对溃疡性结肠炎具有较好的治疗作用,具有应用于临床医学的潜力。

基于PCR-DGGE的小鼠肠道菌群基因组提取方法的建立

通过比较4种小鼠粪便细菌总DNA提取方法对基于PCR-DGGE检测的肠道菌群多样性分析的影响,旨在建立适于PCR-DGGE的小鼠肠道微生物宏基因组提取的稳定、经济、快捷的方法。采用SDS裂解法、某国产市售粪便DNA提取试剂盒、改进的化学裂解法、改进的溶菌酶法4种方法提取小鼠粪便细菌总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、细菌16S rRNA V3区PCR扩增结合DGGE对提取结果进行比较分析。SDS裂解法和国产市售试剂盒2种方法提取粪便细菌总DNA均未得到理想结果,另2种方法均能够检测到粪便中20种左右的细菌。改进的化学裂解法和改进的溶菌酶提取法的建立为基于PCR-DGGE进行肠道菌群结构的定量及定性分析提供了可靠的前提基础和实验保障。

粪便基因组DNA提取方法比较及在沙门菌定量PCR检测中的应用

目的建立并优化1种可用于临床微生物检测的粪便微生物基因组DNA提取方法并应用于沙门菌定量PCR快速检测。方法分别利用土壤微生物基因组DNA提取试剂盒法、微生物基因组DNA提取试剂盒法和本实验室改进酚/氯仿抽提法提取腹泻患者粪便基因组DNA,根据沙门氏菌16srDNA、dT等基因或DNA功能区序列设计PCR引物,进行多基因定量PCR检测。结果3种方法提取的基因组DNA均可进行有效的定量PCR扩增,采用所建立的多重PCR方法可特异鉴别粪便沙门氏菌。结论本研究改进的粪便基因组DNA提取方法及临床微生物的定量PCR检测可在较短的时间内实现对大量临床样品快速诊断,有一定应用前景。

低毒力菌株小鼠细菌性腹膜炎模型的建立

目的 将无菌鼠粪提取物（sterile rat fecal extracts，SRFE）应用于低毒力菌株小鼠急性细菌性腹膜炎模型的构建并评价其应用效果。方法用SRFE和／或5％高活性干酵母液将菌液稀释至感染动物所需终浓度，每只小鼠腹腔注射0．5ml菌液，比较添加前后最低致死剂量的变化；比较SRFE浓度改变及与5％高活性干酵母液配伍体积比改变时小鼠死亡率的变化。结果添加20％SRFE后，细菌的最低致死剂量降低了78％-90％。增加SRFE的浓度，可提高小鼠死亡率。单用SRFE的效果并不理想，仍需与5％高活性干酵母液配伍使用。SRFE和5％高活性干酵母液不同体积比（2：1或3：1）时的小鼠死亡率无显著性差异（P〉0．05）。结论在建立低毒力菌株小鼠急性细菌性腹膜炎模型时SRFE的添加可有效降低细菌的最低致死剂量。

大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取方法的比较

目的比较两种肠内容物前处理和两种提取方法对清洁级SD大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取效率。方法分别选用PBS多次离心漂洗、液氮破细胞两种前处理方法和酚/氯仿抽提、试剂盒过柱法两种提取方法进行组合分析,对4份肠内容物和16份含金黄色葡萄球菌肠内容物进行随机提取。结果大鼠肠内容物细菌基因组DNA含量和纯度测定结果显示,与PBS反复离心相比,液氮研磨前处理能显著提高大鼠肠内容物基因组DNA。荧光定量PCR表明,液氮研磨前处理较PBS反复离心能更好地收集细菌基因组DNA,其Ct值最低。结论研究结果表明,采用液氮研磨试剂盒法在大鼠肠内容物DNA提取中是较为优良的方法,该方法为建立实验动物中微生物的定量PCR检测方法打下了基础。

结直肠癌患者粪便细菌DNA提取方法的比较研究

目的比较结直肠癌患者粪便细菌DNA提取方法的优缺点及获得DNA的质与量,有利于结直肠癌患者肠道相关分子微生态的研究。方法采用传统法,化学裂解法和TIA Namp bacteria DNA Kit试剂盒法,提取粪便中细菌DNA,比较其作为模板,用于细菌16S rRNA基因PCR扩增后凝胶电泳的优缺点及用核酸蛋白检测仪Biophotmeter测定提取DNA的质与量。结果传统法提取DNA的量及纯度均较低(22.37±2.45,3.24±0.22),化学裂解法和试剂盒方法提取的量及纯度均较高,(分别为33.87±2.06,2.18±0.44;38.60±9.00,1.70±0.09);传统法与化学裂解法、试剂盒法相比差异有统计学意义(P<0.05),化学裂解法与试剂盒法相比差异无统计学意义(P>0.05),但以试剂盒法为佳。结论3种方法各具优缺点,不同的DNA提取方法会影响结直肠癌患者肠道相关分子微生态的研究结果。与传统法和化学裂解法比较,试剂盒提取法的效率更高,能够检测到更多种类的细菌,更合适肠道相关分子微生态的研究。

两种不同方法提取人粪便进行DNA检测的有效性研究

目的分析两种不同方法提取人粪便进行DNA检测的效果。方法收集108例研究者的粪便,采用粪便DNA提取试剂盒及酚-氯仿法提取DNA,比较两种方法提取DNA的效果。结果采用酚-氯仿的方法及试剂盒提取的DNA浓度分别为(232.51±41.24)ng/μl、(67.35±13.17)ng/μl(P<0.01);试剂盒提取粪便DNA在纯度(OD260/280)、溶液澄清度及电泳结果等方面,均高(优)于酚-氯仿提取的DNA(P<0.01)。酚-氯仿及试剂盒首次提取的DNA能进行PCR扩增的阳性率分别为5%(1/20)和91.67%(99/108)(P<0.01)。另有9例采用试剂盒未能提取足够的DNA量,加大粪便量后,再次提取的DNA能够满足实验要求。结论试剂盒提取的DNA质量较高,能满足DNA甲基化检测的条件。酚-氯仿的提取方法有待进一步研究才可能获得质量较高的DNA。

德国小蠊粪便提取物与粘蟑板联合应用效果研究

目的测定德国小蠊若虫粪便乙醇提取物与粘蟑板联合应用的粘捕效果。方法德国小蠊若虫粪便聚集信息素用乙醇提取后与粘蟑板联合应用,通过实验室和现场实验确定其粘捕效果。结果 在实验室实验中,相对于粘蟑板单独应用,德国小蠊若虫粪便乙醇提取物与粘蟑板联合应用对若虫和成虫的捕获率分别提高了1.8倍和2.5倍,诱捕竞争力分别提高了5.1倍和5.4倍。同样在现场实验中,相对于粘蟑板单独应用,德国小蠊若虫粪便乙醇提取物与粘蟑板联合应用,其捕获率显著提高了2.1倍。结论德国小蠊若虫粪便乙醇提取物与粘蟑板联合应用,能显著提高粘蟑板的捕获率,是一种有效的防治德国小蠊的方法。

粪便DNA突变检测在快速筛选大肠癌中的应用

大肠癌是发病率和死亡率都很高的常见疾病,对高危人群进行大规模的普查筛选,可以降低大肠癌的发生率和死亡率。粪便DNA突变检测是新近发展的可用作大肠癌普查的技术,与常规结肠镜检测和大便隐血实验相比,具有特异性高、灵敏度高和易于被患者接受等优点。文章阐述了粪便DNA突变检测的相关基因、肿瘤特异性DNA提取方法和检测方法等,并对其在快速筛选大肠癌中的应用进行了展望。

粪便标本中细菌DNA提取方法的比较

目的比较粪便标本中细菌DNA三种提取方法的优缺点。方法采用传统法,溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)提取法和试剂盒法提取粪便标本中细菌DNA,比较其作为模板用于PCR扩增细菌16SrDNA的优缺点。结果三种方法制备的细菌DNA均能成功用作后续PCR扩增的模板。传统法经济可靠,但提取的DNA量及纯度均较低。利用CTAB法进行提取可有效去除粪便中的色素和多糖成分,但操作要求较高,难以标准化。试剂盒法提取方便,操作简单,质量稳定,易标准化,且价格适中,是临床值得推荐的提取方法。结论三种方法各具优缺点,应根据实验室条件和实验要求进行选择。

牛粪便微生物总DNA提取方法的优化

采用试剂盒提取法、冻融-CTAB法、CTAB-SDSⅠ法与CTAB-SDSⅡ法四种方法提取牛粪便总DNA,并从纯度、颜色与提取量等方面进行评价分析.实验表明,CTAB-SDSⅡ法提取的总DNA颜色透明、DNA纯度(A260/A280)为1.930±0.433、DNA提取量(μg/g)为19.870±0.433.因此,CTAB-SDSⅡ法是一种比较适合牛粪便微生物总DNA的提取方法.

圈养华北豹粪便样品中雌二醇提取方法的研究

本研究以圈养华北豹粪便样品中雌二醇的提取方法为研究对象。本实验中比较了甲醇加热法、乙醇加热法和乙醇蒸馏水,3种粪样中提取雌二醇的技术方法,利用放射免疫分析法测定雌二醇的含量。结果显示,甲醇加热法、乙醇加热法和乙醇蒸馏水法3种方法分别提取浓度为(2815.47±597.47)pg/mL、(7660.25±1546.11)pg/mL和(1937.83±531.71)pg/mL。其中乙醇加热法是这3种方法中提取含量可达(7660.25±1546.11)pg/mL,通过统计学分析发现,乙醇加热法与其他2种方法差异显著。实验证明:利用乙醇加热法提取圈养华北豹粪便雌二醇是一种比较理想的方法。

银杏叶提取物（EGB）对局灶性脑缺血大鼠脑片HIF-1 VEGF表达及新生血管的影响

目的探讨银杏叶提取物（EGB）对大鼠局灶性脑缺血／再灌注中脑组织内血管内皮细胞生长因子（VEGF）及血管通透因子（HIF-1）表达的影响。方法采用Zea Longa线栓法制备大鼠局灶性脑缺血／再灌注模型（即MCAO模型），54只大鼠随机分为三组，即对照组（n=6）、EGB组（n=24）及缺血／再灌注组（n=24），分别在缺血／再灌注4、6、24、72h取材。应用免疫组化法（SABC法），利用计算机图像分析系统软件，计数脑梗死后不同时间点阳性细胞的数量。检测VEGF及HIF—1蛋白的表达变化情况。结果对照组：脑组织VEGF和HIF表达均较低；EGB组：VEGF及HIF阳性细胞密度均相对较高；缺血／再灌注组：VEGF在4h开始升高，24h达到高峰，72h下降到接近正常水平，HIF-1在缺血后4h开始降低，8h开始升高，24h达到高峰，72h下降到接近正常水平。结论EGB对于缺血性脑损伤有保护作用。

银杏叶提取物对局灶性脑缺血再灌注后GFAP表达的影响

目的研究银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba,EGB)对局灶性脑缺血再灌注后星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法大脑中动脉插线法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。75只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、EGB治疗组。缺血2h再灌注48h后,采用免疫组织化学法检测脑组织内GFAP蛋白的表达。结果缺血再灌注后可诱导脑组织GFAP表达增强,EGB可抑制缺血再灌注后GFAP的表达(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注后,可诱导脑组织GFAP表达增强,EGB可抑制脑缺血后星形胶质细胞GFAP的高表达,提示EGB可能对缺血诱导的星形胶质细胞活化具有抑制作用,这可能是EGB抗脑缺血损伤保护神经元作用的机制之一。

植物提取物在断奶仔猪饲粮中的应用效果研究

试验旨在研究植物提取物在仔猪生产中的应用效果。选用（10.30±1.13）kg大白断奶仔猪240头,随机分为4组,每组4个重复,每个重复15头猪,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加植物提取物A（PE-A）500 mg/kg、植物提取物B（PE-B）500 mg/kg和植物提取物C（PE-C）250 mg/kg,试验期28 d。结果表明：1）PE-A组第1-14天料重比比对照组显著降低5.65%。2）与对照组相比,PE-A组仔猪血清Ig M、Ig G、T淋巴细胞转化率和血清总蛋白分别提高1.15%（P〉0.05）、1.38%（P〉0.05）、17.07%（P〈0.01）、6.46%（P〈0.01）,尿素氮水平降低16.36%（P〈0.01）。3）PEA组肠道中大肠杆菌数量较对照组降低8.29%（P〈0.01）,PE-B和PE-C组比对照组分别降低4.65%（P〈0.05）、3.39%（P〈0.05）;PE-A、PE-B、PE-C组肠道中乳酸杆菌数量分别比对照组提高5.65%（P〈0.01）、3.53%（P〈0.05）和3.11%（P〈0.05）;PE-A、PE-B、PE-C组双歧杆菌菌落数分别比对照组提高5.76%（P〈0.01）、4.75%（P〈0.05）和3.89%（P〈0.05）。4）PE-A显著提高干物质、粗蛋白质、粗脂肪、磷和钙的表观消化率（P〈0.05）,分别提高2.91%、5.41%、5.62%、5.92%、6.08%。综上所述,在仔猪饲粮中添加PE可以有效提高仔猪的生长性能、血液生理生化指标水平、饲料消化利用率,改善肠道微生物平衡。综合试验各项指标,仔猪饲粮中添加PE-A效果较好。

禽畜粪便对巨噬细胞吞噬功能影响的研究

本文采用巨噬细胞吞噬率(免疫荧光快速测定法)为检测指标,结合人血单核细胞体外实验和小鼠腹腔巨噬细胞整体染毒实验,从免疫毒理学角度探讨了奶牛、猪和鸡粪水溶性提取物的危害。结果表明,三种动物均能抑制人血单核细胞的吞噬功能。并有明显的剂量-反应关系。三种粪便对单核细胞的抑制能力极为相似。经10天猪粪水溶性提取物连续灌胃染毒的小鼠腹腔巨噬细胞实验也获得与体外实验相似的结果。

绵羊粪便中植物基因组DNA的提取及其PCR检测

本试验采集了16只圈养绵羊的新鲜粪便,利用试剂盒法(酚-氯仿法)对粪便基因组DNA进行了提取。电泳检测结果表明:从绵羊粪便中获得的DNA纯度较高,完整性好。以提取的基因组DNA为模板,利用文献报道的2对通用引物(r D5-ITS2/rb1-ITS2和rbc LZ1/rbc L19b)以及自行设计的羊草ITS特异性引物(ITS-LC)、碱茅ITS特异性引物(ITS-PD)和芦苇rbc L特异性引物(rbc L-PA)进行PCR扩增。琼脂糖凝胶电泳分析结果表明,5对引物均能获得成功扩增,并得到目的条带。进一步对羊草、碱茅和芦苇进行序列测定,并将测序结果通过Gen Bank数据库进行Blast比对。结果表明:DNA相似性分别为95%、94%和98%,可以证明扩增产物分别属于羊草、碱茅和芦苇的某个片段。