基于联合策略提高FAD依赖的葡萄糖脱氢酶的酵母表达

为了提高了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的表达量,本研究通过G418浓度梯度筛选,构建含有不同分子伴侣基因拷贝数共表达毕赤酵母重组菌株实现高效表达,优化摇瓶发酵条件。经G418浓度梯度筛选,得到1株高产重组菌,在此基础上分别构建了HAC1、Ero1、PDI三种分子伴侣1-4拷贝共表达重组菌株,RT-qPCR检测结果符合预期。试管水平酶活表明3拷贝PDI、3拷贝HAC1和2拷贝Ero1分别比1拷贝提高83%、77%和51%。总体比较而言,共表达3拷贝PDI的重组菌株酶活最高,比对照提高198%,优化摇瓶发酵条件表明培养基初始pH 7.0,摇瓶装液量50 mL,甲醇添加量1%,诱导温度28℃时,效果最佳。通过抗生素浓度筛选、增加分子伴侣的基因拷贝数策略可以提高FAD-GDH在毕赤酵母中的发酵产量。

玉米秸秆稀酸水解与水解液发酵的实验研究

研究了玉米秸秆的稀酸水解性能,考察了底物浓度、反应温度、反应时间、硫酸浓度和秸秆粒径对水解得率和木糖得率的影响。在硫酸浓度为1.0%、水解温度126℃、水解时间1 h、底物浓度为50~80 g/L情况下,玉米秸秆的水解得率为21.7%~24.6%,木糖得率为68.0%~77.1%。所得水解液主要成分为木糖和葡萄糖,经处理后可直接用于微生物的发酵培养。

稀糖分罐发酵对L-色氨酸发酵的影响

为了解决现有L-色氨酸发酵工艺中浓糖补料和中途排料造成的乙酸积累过多和资源浪费等问题,该研究提出一种稀糖分罐发酵的新工艺。利用30L发酵罐考察稀糖分罐发酵对L-色氨酸发酵的影响,在发酵中期(发酵时间为20h左右)将部分发酵液移至另一灭好菌的空罐继续进行发酵,并将浓糖替换为稀糖补料。在稀糖分罐发酵工艺条件下,菌体生物量、L-色氨酸产量、糖酸转化率分别为44.31g/L、43.82g/L、20%,较普通工艺分别提高了5.4%、9.9%和12.36%;乙酸积累量较普通工艺下降65.5%。避免了料液的浪费,提高了L-色氨酸产量和糖酸转化率,降低了乙酸积累量,在工业生产方面有一定实用性和推广价值。