副溶血性弧菌外膜蛋白VP1008和弧菌铁蛋白受体的重组表达及抗体交叉反应

目的:副溶血性弧菌特异性表面抗原对副溶血性弧菌免疫检测具有重要意义,目前外膜孔蛋白VP1008(39.3 kDa)和弧菌铁蛋白受体(78.7 kDa)的免疫原性仍不清楚。方法:从基因组DNA扩增了目的基因,分别构建了含目的基因的pET-28a(+)重组质粒,转入大肠杆菌BL21并经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达两种重组蛋白。采用镍柱纯化的重组蛋白分别免疫了BALB/c小鼠,并通过酶联免疫吸附反应(ELISA)和免疫印迹研究了小鼠多抗与不同株副溶血性弧菌、其它弧菌等菌株的交叉反应。结果:重组蛋白VP1008和弧菌铁蛋白受体均以包涵体形式表达,小鼠多抗与免疫的重组蛋白的效价>1000 K,与7株副溶血性弧菌的效价在4.5~13.5 K,与10株弧菌基本无交叉反应,与肠杆菌的交叉反应和纯化过程中大肠杆菌蛋白的微量残留有关;多抗均与副溶血性弧菌全菌蛋白在目标位置出现反应条带,其中VP1008多抗效价和免疫原性相对较好。结论:外膜蛋白VP1008小鼠多抗对副溶血性弧菌识别性、免疫原性较好,为建立新的副溶血性弧菌免疫检测方法奠定了基础。