anti-EGFR scFv-FTH1/AP1-FTH1纳米粒子的构建及其治疗哮喘小鼠的应用

采用基因工程方法分别将抗表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体(anti-EGFR scFv)和靶向白介素-4-受体(IL-4R)的AP1短肽分别修饰到铁蛋白重链亚基(FTH1)的N端,再通过蛋白表达、体外混合复性后成功制备了anti-EGFR scFv-FTH1/AP1-FTH1双靶向纳米粒子。结果表明:该纳米粒子能正确组装成铁蛋白的特征笼状结构,粒径为(13.2±1.3)nm。在哮喘小鼠模型中发现该纳米粒子能有效抑制哮喘多种症状,且在缓解气道高反应方面的效果优于单靶向anti-EGFR scFv-FTH1/FTH1纳米粒子。

砷诱导Jurkat T淋巴细胞铁蛋白重链的表达

目的了解三氧化二砷诱导人JuikatT淋巴细胞的差异表达基因,探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法在体外用三氧化二砷(5μmol/L,24h)处理人JurkatT淋巴细胞后,应用抑制性消减杂交技术(SSH)和基因克隆技术构建差异表达的cDNA文库,用PCR技术和测序技术鉴定阳性克隆。结果用SSH技术构建了由三氧化二砷诱导的人JurkatT淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库。经测序分析结果显示,铁蛋白重链在正向消减cDNA文库中有2个阳性克隆。结论三氧化二砷可诱导铁蛋白重链的表达,铁蛋白重链在淋巴细胞抗砷损伤机制中可能起着一定的作用。

铁蛋白纳米粒子的修饰及细胞内化特性的研究

通过基因工程的方法将人表皮生长因子(EGF)和TAT分别修饰于FTH1亚基的N端,采用原核表达系统可获得EGFR靶向修饰的铁蛋白重链亚基蛋白(EGF∷FTH1)和修饰有穿膜肽的铁蛋白重链亚基蛋白(TAT∷FTH1)。随后,将变性的EGF∷FTH1与TAT∷FTH1以一定比例混合进行复性得到TAT/EGF-FTH1双功能化的纳米粒子。荧光显微镜的结果表明,TAT的修饰能有效增强纳米粒子的内化效果。

基于铁蛋白的溶栓蛋白纳米粒子的构建及活性分析

将凝血酶激活的低分子量单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(T-uPA)修饰铁蛋白重链亚基(FTH1),构建基于铁蛋白的溶栓蛋白纳米粒子.通过基因工程、体外混合复性等技术,将T-uPA分别修饰FTH1的N和C端并进行对比,表明仅C端融合蛋白才可复性折叠并组装成FTH1/FTH1-T-uPA.通过实验分析,表明FTH1/FTH1-T-uPA基本为中空笼状且分散均匀,粒径为13.41 nm,水合粒径为24.2 nm,T-uPA可成功被凝血酶激活,具有优良的纤维蛋白溶解活性(约1200 IU/mg);在体外达到与商品化尿激酶相似的溶栓效果,且具有更好的安全性.本研究成功解决了T-uPA修饰铁蛋白的关键问题,为构建靶向型的铁蛋白纳米粒子载药系统提供了基础.