阿魏酸结合吡咯啉-5-羧酸还原酶1抑制乳腺癌细胞增殖

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一,严重威胁女性健康。天然产物因其结构多样、毒副作用低及作用机制独特等优势已然成为开发抗肿瘤药物的主要来源。以人乳腺癌细胞MCF-7和小鼠乳腺癌细胞4T1为研究对象,探索植物源多酚类物质阿魏酸(ferulic acid,FA)对乳腺癌细胞的影响。细胞存活实验和克隆形成实验表明,阿魏酸可以抑制MCF-7和4T1细胞的存活和增殖,且抑制效应具有浓度依赖性。通过Pull-down、银染和LC-MS-MS质谱鉴定分析发现,FA与蛋白质吡咯啉-5-羧酸还原酶1(pyrroline-5-carboxylate reductase 1,PYCR1)有直接相互作用。PYCR1体内能通过酶促反应催化脯氨酸代谢合成,发挥促进肿瘤生长和增殖的作用。使用Autodock Vina和PyMOL软件模拟分子对接,结果显示,FA与PYCR1的246位谷氨酸和251位精氨酸存在相互作用;通过酶活力检测证实,FA靶向结合PYCR1且以浓度依赖性的方式抑制其酶活性;通过分析人类肿瘤基因图谱(TCGA)发现,PYCR1在乳腺癌患者中的表达显著高于健康对照人群(P<0.0001),且高表达的PYCR1与临床不良预后高度相关。

木质素合成酶基因F5H的克隆及其鉴定

通过RT-PCR从正在分化的2年生欧美杨107号茎的次生木质部提取mRNA,扩增出一基因片段,与pGM-T载体连接,重组质粒经EcoRI酶切、特异性引物扩增、测序鉴定。结果表明,该基因片段长度为867bp,与EMBL核酸序列库中VanDoorsselaere等发表的白杨杂种F5H的cDNA序列(PAJ10324)相比,同源性高达99.19%,可以断定所扩增的DNA片段即为F5H基因片段。

毛白杨阿魏酸-5-羟基化酶对烟草木质素的影响

为了研究阿魏酸-5-羟基化酶(F5H)在木质素合成途径中的调控作用,采用CTAB法提取毛白杨RNA,反转录得到c DNA并克隆出毛白杨F5H基因,将其以正义、反义、干涉的基因形式,使用农杆菌侵染法导入烟草基因组中。将得到的转基因植株茎段进行解剖分析,并测定其木质素细胞壁化学组成。转基因植株的木质素、纤维素总量和木质部解剖分析结果与野生型相比均为未表现出明显差异,植株正常生长。F5H的过量表达和基因沉默均不影响植株木质化和生长,可以说明它是木质素合成途径可供选择的一个很好的调控点。

阿魏酸钠延缓大鼠5/6肾切除慢性肾功能衰竭的实验研究

目的研究阿魏酸钠(SF)治疗5/6肾大部切除大鼠慢性肾功能衰竭的作用及机制。方法实验大鼠随机分为假手术组、5/6肾切除组、阿魏酸钠注射组(150mg/kg)、阿魏酸钠灌胃组(150mg/kg)和科素亚灌胃组(20mg/kg)。造模后第4、8、12周,每组随机选取6只大鼠处死。观察大鼠24h尿蛋白定量、血肌酐水平、肾小球硬化、肾间质损害及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、内皮素1(ET-1)的表达。分析各指标间的相关关系。结果5/6肾切除大鼠血肌酐水平、24h尿蛋白、肾小球硬化指数(GSI)、肾小管间质及肾小球系膜区α-SMA表达、间质细胞增殖、ET-1表达等较假手术组明显升高(P<0.05)。SF治疗组血肌酐、24h尿蛋白水平、肾小球硬化程度、α-SMA、PCNA表达较5/6肾切除组明显降低(P<0.05),ET-1的表达均较5/6肾切除组明显减少(P<0.05)。GSI与α-SMA、PCNA、ET-1表达百分数呈正相关;血肌酐水平、24h尿蛋白定量与α-SMA、PCNA、ET-1的表达百分数和GSI呈正相关;ET-1表达与α-SMA、PCNA表达呈正相关。结论SF治疗慢性肾脏疾病的机制可能与降低慢性肾功能衰竭大鼠的血肌酐和尿蛋白水平、抑制残肾肌成纤维细胞生成和间质细胞增殖、抑制残肾ET-1的表达、延缓肾小球硬化及肾间质纤维化的进展有关。

桑树阿槐酸5-羟化酶基因的克隆及遗传转化

阿槐酸5-羟化酶(ferulic acid 5-hydroxylase,F5H)是催化S木质素合成的关键酶。为研究桑树F5H对S木质素合成的影响,从野生川桑中克隆得到一个阿槐酸5-羟化酶基因,命名为MnF5H(GenBank登录号:KC152637)。该基因ORF为1 515 bp,编码504个氨基酸,预测蛋白质分子质量56.77 kD,等电点6.45,具有细胞色素P450单加氧酶保守结构域。系统进化树中,MnF5H蛋白与来源于桑科构属的光叶楮的同源蛋白聚在一起,表明阿槐酸5-羟化酶在进化上具有保守性。通过荧光定量PCR检测到MnF5H基因在木质化的桑树根部高量表达,暗示该基因与木质素的形成密切相关。在烟草中超量表达MnF5H基因,经组织化学染色发现S木质素合成增加,G木质素合成减少,但木质素总含量基本不变。研究结果表明该基因在控制S木质素的合成中起关键作用。

3-[(3-甲氧基-4-乙酰氧基-5-溴)苯基]丙烯酸的合成

目的:合成3-[(3-甲氧基-4-乙酰氧基-5-溴)苯基]丙烯酸。方法:以香草醛为原料,经溴代、Knoevenagel反应、乙酰化得到目标化合物。结果与结论:目标化合物结构经元素分析、IR的验证,其未见文献报道。

1-(5′-溴阿魏酰基)-4-(2′-氯)苄基哌嗪盐酸盐的合成及表征

以5′-溴阿魏酸为原料,通过酚羟基的乙酰化保护、羧酸羟基氯代、酰化、脱乙酰基、成盐,制备出的标题化合物为新化合物,未见文献报道,其结构经IR、1HNMR、MS及元素分析确证。

木质素合成酶基因F5H的RT-PCR引物筛选

据EMBL核酸序列库中发表的白杨杂种F5H的cDNA序列,利用Primer 5.0软件设计3组扩增引物。通过PCR及RT-PCR扩增反应,筛选出一组比较合适的引物,确定该引物对的最适反应体系和程序参数。利用该引物对,从正在分化的2年生欧美杨107茎的次生木质部提取的mRNA中RT-PCR扩增出一个867bp的木质素合成特异表达的f5h基因片段。将其克隆到pGM-T载体上,构建了f5h在大肠杆菌中的表达载体,并对引物筛选进行讨论。

毛白杨木质素合成酶基因F5H克隆与生物信息学分析

克隆毛白杨阿魏酸-5-羟基化酶(F5H)基因全长序列,并通过生物信息学分析,为进一步研究F5H基因功能提供基础。利用RT-PCR方法成功从毛白杨741组培苗叶片中克隆了F5H基因,并对F5H基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分析,包括疏水性-亲水性、氨基酸翻译后修饰、亚细胞定位、跨膜结构域、蛋白质二级三级功能结构域等进行分析预测和推断。获得的基因长度为1 686 bp,编码区1542 bp,与已公布的毛果杨F5H m RNA序列(Gen Bank登录号为AJ010324)的编码区相似性达97.45%,并与其他植物的该基因序列具有同源性。F5H是亲水性较强的蛋白,整条肽链有1个跨膜结构域;通过亚细胞定位表明F5H主要位于质体中,并含有磷酸化位点有19个。F5H含有丰富的二级结构,卷曲占44.44%、折叠占7.02%、螺旋占48.54%,并预测了其三维结构。分析结果显示,植物的阿魏酸-5-羟基化酶是一个具有跨膜结构域的亲水性蛋白,在内质网等分泌途径中表达。

植物阿魏酸-5-羟化酶生物信息学分析

阿魏酸-5-羟化酶(F5H)是木质素生物合成的关键酶之一,它依赖于细胞色素P450催化阿魏酸在5位上发生羟基化反应。采用生物信息学的方法和工具对在GenBank上注册的拟南芥(Arabidopsis thaliana)、油菜(Brassica napus)、杨树(Populus trichocarpa)、番茄(Lycopersicon esculentum)、紫苜蓿(Medicago sativa)、喜树(Camptotheca acuminate)等植物的阿魏酸-5-羟化酶基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分析,包括组成成分、氨基酸翻译后修饰、跨膜拓扑结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级功能结构域等进行分析预测和推断。结果表明,植物F5H是一个具有跨膜结构域的亲水性蛋白,存在于内质网等分泌途径中,α-螺旋和不规则卷曲是其二级结构的主要结构元件,具有细胞色素P450家族特征性结构域及保守功能域。

苦荞FtF5H基因克隆及表达分析

阿魏酸-5-羟基化酶(Ferulate 5-hydroxylase)是调控S型木质素合成的关键酶,为研究其在苦荞木质素生物合成途径中的分子机制,该文从苦荞转录组数据中筛选获得一个F5H基因,命名为FtF5H(GenBank登录号:MW455111),采用生物信息学方法对苦荞F5H蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、亲疏水性、蛋白质二级结构、蛋白质三级结构、氨基酸结构、系统进化树等进行分析和预测,并运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析FtF5H基因在厚果壳苦荞与薄果壳苦荞的叶、花、茎、果壳中的差异表达。结果表明:(1)FtF5H基因序列包含1395 bp的完整cDNA开放阅读框,编码464个氨基酸。(2)FtF5H蛋白具有P450超家族结构,为亲水性稳定酸性蛋白,不具有跨膜结构域,且为非分泌性蛋白。(3)FtF5H蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,三级结构预测显示FtF5H蛋白与5ylw.1.A的相似度较高。(4)系统进化分析显示FtF5H属于CYP84A亚家族。(5)qRT-PCR显示FtF5H基因在两种苦荞中的不同部位均有表达,且在厚果壳苦荞果壳中的表达量是薄果壳的5倍,表达具有极显著差异。该研究为进一步研究苦荞木质素合成的分子调控机制奠定了基础,对苦荞新品种的培育具有重要意义。

高效液相色谱法测定蒙药嘎古拉-5散中阿魏酸的含量

目的:建立蒙药嘎古拉-5中阿魏酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(250mm x4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液(14:86);流速1.0m L·min^(-1);检测波长为316nm。结果:阿魏酸在1.584μg·m L^(-1)~15.84μg·m L^(-1)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,平均加样回收率98.89%,RSD为1.56%。结论:本方法简便准确,重复性好,可用于测定蒙药嘎古拉-5中阿魏酸的含量测定。

Correlation of serum ASPH and 5'-NT contents with angiogenesis and cancer cell proliferation in patients with liver cancer

Objective:To proliferation in patients with liver cancer.Methods: Patients with primary liver cancer who underwent surgical resection in Yulin Third Hospital between December 2013 and December 2016 were selected as the liver cancer group of the research, and healthy volunteers who received physical examination in Yulin Third Hospital over the same period were selected as the control group of the research. Serum was collected from both groups to test the contents of ASPH and 5'-NT as well as liver cancer cell proliferation molecules;liver cancer lesions and para-carcinoma lesions were collected from liver cancer group to detect the contents of angiogenesis molecules and cancer cell proliferation molecules.Results: Serum ASPH and 5'-NT contents in liver cancer group were significantly higher than those in control group;VEGF, VEGFR1, VEGFR2, HGF, EGFR, Bcl-2, Bcl-x and Bcl-w contents in liver cancer lesions were significantly higher than those in para-carcinoma lesions and positively correlated with serum ASPH and 5'-NT contents in patients with liver cancer while Bax and Bak contents in liver cancer lesions were significantly lower than those in para-carcinoma lesions and negatively correlated with serum ASPH and 5'-NT contents in patients with liver cancer;serum AFP, GP73, GPC3 and DKK1 contents in liver cancer group were significantly higher than those in control group and positively correlated with serum ASPH and 5'-NT contents in patients with liver cancer.Conclusion: Serum ASPH and 5'-NT contents increase significantly in patients with liver cancer and can accurately evaluate angiogenesis and cancer cell proliferation.

四物汤中四种成分的含量测定研究

目的建立四物汤中没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷、阿魏酸的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为ZorbaxSB-Aq;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(梯度洗脱);没食子酸、芍药苷的检测波长为230nm,5-羟甲基糠醛的检测波长为280nm,阿魏酸的检测波长为316nm;流速为1mL·min-1;柱温为40℃。结果没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷、阿魏酸的线性范围分别为0.0247～0.4944μg(r=0.9992)、0.01996～0.7984μg(r=0.9999)、0.1181～2.362μg(r=0.9997)、0.1262～0.5048μg(r=0.9996),加样回收率分别为100.22%(RSD=2.06%)、99.83%(RSD=2.70%)、101.37%(RSD=1.59%)、99.89%(RSD=2.29%)。结论四物汤中没食子酸与芍药苷来自白芍,5-羟甲基糠醛来自熟地黄与川芎,阿魏酸来自当归与川芎,为四物汤物质基础的研究提供了一定的参考。

RP-HPLC法同时测定四物汤中4种活性成分的含量

目的建立一种高效液相色谱法同时测定四物汤中5-羟甲基糠醛、川芎嗪、芍药苷、阿魏酸四种活性成分的含量。方法采用Phenomenex luna C18(250mm×4.6mm,5.0μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.05%甲酸水溶液(B),线性梯度洗脱(0~5min,A相5%;5~10min,A相5%→10%;10~20min,A相10%→20%;20~40min,A相20%→30%;40→46min,A相30%→5%);流速:1.0mL·min^(-1);检测波长:230nm和282nm。柱温:35℃。结果 5-羟甲基糠醛、川芎嗪、芍药苷、阿魏酸分别在0.0215~0.43mg·mL^(-1)、0.021~0.42mg·mL^(-1)、0.0195~0.39mg·mL^(-1)、0.023~0.46mg·mL^(-1)范围内呈良好线性关系。四物汤中5-羟甲基糠醛、川芎嗪、芍药苷、阿魏酸四种有效成分的含量分别为0.0681%、未检出、0.250%、0.0358%。结论该方法操作简便,结果准确可靠。

MCI-002对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及机制

目的研究3-甲氧基-4-O-(2’-亚甲基-3’5’6’-三甲基吡嗪基)阿魏酸钠(MC I-002)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及机制。方法应用大鼠局灶性脑缺血损伤模型,观察MC I-002对脑缺血大鼠神经行为、脑含水量、脑梗死率、病理组织学以及组织内超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、血栓烷B2(TXB2)和6-酮-前列腺素(6-Keto-PG I2)的影响。结果MCI-002可改善局灶性脑缺血大鼠的神经行为,降低脑含水量和脑梗死率,改善其病理组织学,显著升高6-keto-PGF1α/TXB2比值、提高SOD活力、降低MDA含量且呈剂量依赖性。结论MCI-002对大鼠局灶性脑缺血有很好的保护作用,其机制可能与调节PG I2/TXA2比值,改善能量代谢和抗氧化有关。

液质联用法测定川芎茶调丸中阿魏酸等6种成分的含量

目的:以液质联用法对川芎茶调丸中阿魏酸、欧前胡素、异欧前胡素、细辛脂素、升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷6种成分的含量进行测定。方法:采用液相色谱串联三重四级杆质谱进行测定。色谱柱:Agilent Poroshell 120 SB C_(18)(2.1 mm×100 mm,2.7μm);流动相:0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液(40∶60);流速:0.3 mL·min^(-1);电喷雾离子源(ESI),正负离子模式,采用多反应监测模式(MRM)测定。结果:上述6种成分在对应的浓度范围内呈良好的线性关系;加样回收率为98.14%～99.63%,RSD为0.55%～1.42%(n=6)。结论:本法快速、准确、可靠,可同时测定该丸中6种成分,为该制剂的质量控制提供理论依据。

油料油脂中特征性微量活性成分研究的若干新进展

介绍了油料与油脂中几种特征性微量活性成分的研究新进展,如plastochromanol-8、苯丙烯酰5-羟色胺、环亚油肽、木脂素、白藜芦醇、甾醇阿魏酸酯、羊毛甾醇、麦角甾醇等,主要介绍了其结构、性质、分布及在加工过程中的变化,为油脂产品的开发提供依据。

HPLC法测定补气生血口服液中三种组分的含量

目的建立以高效液相色谱测定补气生血口服液中黄芪甲苷、二苯乙烯苷和阿魏酸含量的方法。方法三组分均采用phenomenex C_（18）（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;黄芪甲苷测定的流动相为水-乙腈（60：40）;柱温：30℃;流速：1.0 mL/min;进样量：10μL;ELSD检测器;漂移管温度：105℃;气流速度：2.5 L/min。二苯乙烯苷与阿魏酸测定流动相为乙腈-水（20：80）;流速1.0 mL/min;检测波长：248 nm;柱温30℃。结果补气生血口服液中黄芪甲苷在0.22~5.72μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率为91.2%。在相同色谱条件下,二苯乙烯苷与阿魏酸分离度好,二苯乙烯苷在9.83~393.00μg/m L范围内、阿魏酸在1.015~50.756μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率分别为90.7%和92.8%。结论该方法简便、快捷、专属性强,为其质量控制与含量测定提供了重要参考。

HPLC同时测定都梁滴丸中的阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素

目的:建立一种同时测定都梁滴丸中的阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素含量的方法。方法:都梁滴丸以75%甲醇超声提取30 min后取上清液,采用Agilent Zorbax SB C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1;检测波长分别为254,320,330 nm。结果:4种成分的方法最低定量限为3～15 mg.kg-1,线性范围0.5～50 mg.L-1,相关系数(r2)≥0.999 5。高、中、低3个添加水平的平均加样回收率(n=5)为96.6%～102.5%,RSD 0.16%～2.07%。结论:该方法简便、快速适用于都梁滴丸中阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定。