大鼠脑挫伤后神经细胞DNA片段化和含量变化与损伤时间的关系

目的观察大鼠脑挫伤后神经细胞DNA片段化和DNA含量的时序变化规律。方法建立自由落体打击大鼠脑挫伤动物模型,采用TUNEL和Feulgen′sDNA染色方法,结合图像分析技术进行研究。结果大鼠脑挫伤后随着损伤时间延长DNA片段化程度逐渐增强,而DNA含量逐渐降低。结论采用TUNEL和Feulgen′sDNA染色法观察伤后DNA片段化和DNA含量变化,可以应用于脑损伤时间推断的研究,探索推断损伤时间的新方法。

对几种百合科植物基因组大小的评价

利用孚尔根显微分光光度法测定了洋葱（ＡｌｌｉｕｍｃｅｐａＬ．）、头（Ａ．ｃｈｉｎｅｓｅＧ．Ｄｏｎ，）、分葱（Ａ．ａｓｃａｌｏｎｉｕｍＬ．）和黄花（ＨｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓｃｉｔｒｉｎａＢａｒｏｎｉ）４种百合科植物根尖的细胞核ＤＮＡ含量，并根据各自的核型得出了每个物种的基因组大小。它们分别为：洋葱１８．１６×１０９ｂｐ、头１２．８４×１０９ｂｐ、分葱１０．４４×ｌ０９ｂｐ和黄花７．４８×１０９ｂｐ。由此认为，基因组是生物体维持其生存所需的全套基因。它反映了生物物种全部的、特定的遗传信息。与胞核ＤＮＡ含量相比较，基因组大小更适合作为生物研究的特征参数。这不仅对细胞学、分类学和遗传学，而且对分子生物学亦有一定的意义。

食管黏膜脱落细胞DNA倍体检测在食管癌诊断中的价值

目的探讨胃镜直视下食管病灶脱落黏膜细胞的DNA倍体分析对食管良恶性疾病的诊断价值。方法采用Feulgen染色及图像分析技术,对胃镜直视下刷取的食管病灶黏膜细胞进行DNA含量及倍体分析,以黏膜病理组织镜下诊断结果为"金标准",分析食管病灶黏膜细胞DNA倍体分析对食管良恶性疾病的诊断价值。结果对病理诊断为食管癌43例,良性病变61例分析发现,食管癌中有34例DNA倍体异常,良性病变中有4例DNA倍体异常,其诊断食管癌灵敏度为79.07%,特异度为93.44%,阳性预测值为89.47%,阴性预测值为86.36%,阳性似然比为12.05,Youden指数为72.51%。食管癌患者的黏膜脱落细胞DNA的倍体阳性率明显高于食管良性疾病患者;在食管癌患者中,分化程度越低DNA倍体的含量越高,DNA倍体的含量与食管癌的分化程度有一定关系。结论食管黏膜脱落细胞DNA倍体对食管癌的诊断有一定价值,为大规模开展食管脱落细胞进行分子普查奠定了基础。

显微吸收光度法测定细胞核DNA含量

用显微吸收光度计扫描法测定500个Feulgen染色的睾丸生精上皮细胞核DNA相对含量,数据经计算机处理后表明所测各倍体细胞的DNA含量比和它们实际含量比相符合。如采用内插生物标准来进行显微吸收光度法测试细胞核DNA相对含量,可成为一种方便有效的细胞分析技术。文中讨论了扫描法测量时影响测量值的一些因素。

三种Feulgen染色方法的比较

目的探索一种快速的Feulgen染色方法,并尝试其在细胞核DNA含量分析中的应用。方法选取十只健康小白鼠的肝细胞涂片,每只小白鼠的肝细胞涂片分成三组,采用快速Feulgen染色法、改良Feulgen染色法、传统Feulgen染色法对这三组分别染色,用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞涂片内单个完整肝细胞核的DNA含量,比较各组染色效果和肝细胞核DNA含量的测量结果。结果应用快速Feulgen染色法,获得了满意的效果,细胞核染色深,结构清晰,背景着色淡,而所需染色时间仅为15分钟;同一种方法染色的不同小鼠肝细胞涂片,相同DNA含量倍体肝细胞核的DNA含量均值的变异系数(CV)<10%,CV(快速)<CV(改良)<CV(传统);不同方法染色的同一小鼠肝细胞涂片,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异,IOD(快速)>IOD(改良)>IOD(传统);各组2、4、8倍体肝细胞核DNA含量间的比值均接近2或4;结论此种快速Feulgen染色方法优于其他两种方法,可应用于图像分析系统对细胞核DNA含量与倍体的测量和分析。

莲幼胚子叶细胞造淀粉体DNA的动态变化

莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)幼胚子叶细胞造淀粉体和分离的造粉质体上均呈现强烈的 Feulgen 反应物质。经 DNA 酶处理后,在子叶细胞造淀粉体上呈 Feulgen 负反应。将分离的造粉质体用特异性的 DNA 荧光染料 DAPI 染色,造粉质体显示蓝色的荧光。实验证明,莲幼胚子叶细胞随着发育时期的增长,造粉质体 DNA 的含量逐渐增加,显示出有规律的动态变化过程。在电镜下观察,造粉质体 DNA 区域外无膜结构存在,故具有原核生物的特征。这种质体 DNA 的纤维丝直径大约为25。

Lyon’s Feulgen标准化染色方法与传统Feulgen法的比较研究

目的:Lyon’s Feulgen标准法与传统Feulgen法的比较。方法:用相同组织切片经Lyon’s Feulgen标准法与传统Feul- gen方法同时染色,观察阳性强度,比较两法的重复性。结果:相同组织切片经Lyon’s Feulgen标准法染色阳性产物明显强于传统Feulgen法,重复性更好。结论:Lyon’s Feulgen标准法优于传统法。

植物DNA的Feulgen染色法研究

通过染色法显示DNA是高校生物类专业常做实验之一,Feulgen染色是显示DNA的传统染色方法。在教学实践中由于取材不同,DNA的染色效果表现出较大差异。本研究以洋葱、玉米、蚕豆、豌豆为材料,对其不同组织进行Feulgen染色,通过比较染色效果及操作方法的难易,选择出最适合用Feulgen染色法显示DNA的实验材料。结果表明:(1)从观察结果来看,洋葱内表皮和洋葱根尖的染色效果最好;(2)从实验的操作过程来看,洋葱内表皮的取材及操作方法是最简单的一种。所以洋葱内表皮最适合用于实验教学中Feulgen染色法显示DNA。

两种染色方法在细胞核DNA含量检测中的应用及比较

目的 探讨改良、快速两种Feulgen染色方法达到最佳染色效果的水解时间段，为科研和临床的应用提供方法学指导。方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织，制成肝细胞涂片，分别在室温和60℃温度下水解不同时间，应用改良和快速两种方法染色，TIGER图像分析仪检测和分析单个肝细胞核的DNA含量。结果 （1）不同大鼠肝细胞涂片在同一水解温度、时间作用下，相同DNA倍体含量肝细胞的DNA含量大致相同，CV值均小于10％；（2）二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均接近2或4；（3）同一大鼠相同水解温度不同水解时间，同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下，IOD（5-7min）〉IOD（9-15min）〉IOD（1min,20min），室温水解温度下，IOD（50min）〉IOD（20-30min,70-90min）〉IOD（5-1min,100min）。结论 HCL水解肝细胞涂片时间过长或过短均不能理想的染色，快速法和改良法Feulgen染色达较佳染色效果的时间段分别为：快速法5—7min，改良法20-90min。

大鼠脑挫伤DNA含量变化与损伤时间的关系

目的观察大鼠脑挫伤后DNA含量的时序变化规律。方法建立自由落体打击大鼠脑挫伤动物模型，采用Feulgen’s DNA染色方法，结合图像分析技术。结果损伤侧大脑皮质浅层和海马区平均积分光密度（IOD）变化呈：24h内迅速下降，24—96h有缓慢上升趋势；伤后24h内上述两区域平均积分光密度均与损伤时间呈线性关系，R^2分别为0．668和0．615。可导出直线回归方程。结论采用Feulgen’s DNA染色法结合图像分析技术观察伤后DNA含量变化，可以应用于脑损伤时间推断的研究，探索推断脑损伤时间的新方法。

睾丸生精细胞涂片:在评估图像分析仪光度测量线性中的应用

目的 评估TIGER细胞图像分析仪测量细胞图像光度的线性.方法 选取十只健康成年小白鼠的睾丸组织,制成细胞悬液,涂片,快速Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪测量涂片内三种单个完整生精细胞核的DNA含量并比较它们的比值关系,分析其平均吸光度（AOD）的最大、最小值范围.结果 三种生精细胞核的DNA含量呈1、2、4的比例,其AOD值范围为0.73～1.64.结论 TIGER细胞图像分析仪在其平均吸光度值为0.73～1.64的范围内测得的组织、细胞图像光度呈线性.

不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响

目的探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到最佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的最大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化; 另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体。结果（1）肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有最大吸收波峰; （2）紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加; （3）同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下,IOD（5-7 min）〉IOD（9-15 min）〉IOD（1 min,20 min）,室温水解温度下,IOD（50 min）〉IOD（20-30 min,70-90 min）〉IOD（5-10min,100 min）。结论HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加; HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为：快速法5-7 min,改良法20-90 min。

蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应

目的熟悉并掌握孚尔根反应的原理及实验操作方法,观察DNA细胞的形态和结构。方法取蟾蜍血细胞涂片,60℃1NHCL水解后,用Schiff试剂染细胞核,亮绿复染细胞质。结果显微镜下观察到细胞核被染成紫红色,细胞质为绿色。结论 DNA细胞的核质红绿染色鲜明且清晰美观,让学生对生物学研究有了初步的认识。

改良Feulgen染色法检测标本细胞DNA的效果评估

目的探讨改良Feulgen染色法临床检测细胞DNA中的效果。方法收集宫颈癌普查检测样本300例(份),每例标本进行液基制片各3份,随机分成3组:标准组,实验组1,实验组2。另取标准片30片,随机分成3组:标准组,实验组1,实验组2,采用经典Feulgen染色法及改良Feulgen染色法分别对宫颈癌普查检测标本和标准片进行染色,分别测量二倍体细胞核变异系数(CV)、积分光密度(IOD)及DNA指数(DI),测量结果进行统计学分析。结果实验组宫颈检测样本二倍体细胞核IOD、DI、CV值与标准组比较,差异无统计学意义(P>0.1);改良Feulgen染色法显示细胞核染色深,结构清晰,背景着色淡;经典Feulgen染色法流程需要4 h,改良Feulgen染色法只需要30 min。结论改良Feulgen染色法与经典Feulgen染色法对检测细胞DNA结果高度一致,且改良Feulgen染色法效果良好,用时短,可以用于临床标本细胞DNA检测。

对水洗碱性品红的染料性状、Schiff试剂质量和Feulgen反应色调的观察

水冼碱性品红是水洗普通碱性品红的产物。其染料性状、Schiff试剂质量和Eculgen反应色调不仅优于未水洗的普通碱性品红,而且在染料性状上接近于、在Schiff试剂质量上优于、以及在Feulgen反应色调上相同于美国生物染料标准委员会鉴定的“特制”碱性品红。通过水洗碱性品红建立的Feulgen反应标准色调尤便于显微光度法测定细胞核内Feulgen-DNA 的含量。

腹水脱落细胞DNA倍体对良恶性腹水的诊断价值研究

目的探讨腹水脱落细胞的DNA倍体分析对腹水良恶性质的诊断价值。方法采用Feulgen染色及图像分析仪技术(ICM)测定DNA的含量及倍体,以腹水脱落细胞学病理检查、胃肠镜下活检组织病理或手术组织病理发现肿瘤细胞或组织为金标准,对临床良性腹水54例、恶性腹水63例进行诊断价值分析。结果恶性疾病组腹水脱落细胞DNA倍体异性型阳性率为84.13%,明显高于良性疾病组腹水的14.81%;DNA倍体分析对癌性腹水诊断灵敏度为84.13%,特异度为85.19%,漏诊率为15.87%,误诊率为14.81%,阳性预测值为86.89%,阴性预测值为82.14%;与恶性腹水脱落细胞病理学检测相比,脱落细胞DNA倍体检测的灵敏度高,漏诊率低。结论腹水脱落细胞DNA倍体对腹水良恶性的诊断有一定价值,具有一定的临床推广价值。

不同温度及染色方法对细胞DNA倍体诊断的影响

目的通过介绍3种Feulgen染色法,以经典的标准Feulgen染色法作为对照,评估温度及染色方法对细胞DNA倍体诊断的影响。方法根据细胞病理学TBS诊断标准,将收集的标本划分为未见上皮内病变/恶性肿瘤(NILM)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)两组,采用标准Feulgen染色法(25℃)、改良Feulgen染色法(40℃)、快速Feulgen染色法(55℃)对这两组涂片分别染色,用MotiCytometer全自动细胞图像分析系统测定各倍体[二倍体(2c)、四倍体(4c)、多倍体(> 4c)]细胞核积分光密度(IOD)及其变异系数(CV)值,绘制酸解曲线图,并对测量结果进行统计分析。结果 3种染色法细胞核染色深,核轮廓清晰,胞浆及玻片背景干净。标准Feulgen染色法最佳水解时间为40~70 min。改良Feulgen染色法最佳水解时间为15~30 min。快速Feulgen染色法反应迅速,平台期短,在0.5~3.0 min IOD差异存在显著统计学意义(F=12.40,P <0.01),而1.0~2.0 min IOD差异无统计学意义(F=0.34,P> 0.05),故1.0~2.0 min可作为最佳水解时间。3种染色法2c细胞核IOD最大值分别为127、128、127,差异无统计学意义(F=0.00,P> 0.05),4c及> 4c细胞3种染色法反应最大值差异均无统计学意义(P> 0.05)。同一温度下正常细胞、病变细胞最佳反应时间一致。结论不同温度下的Feulgen染色方法各具优劣,病理诊断工作者在选择染色温度时,应综合考虑水解、染色之间的关系,根据实验室的需求选用适宜的染色方法。

硒拮抗氟引起肺脏、脾脏损伤中肥大细胞变化的观察

采用Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只分别饮用含氟化钠１５０ｍｇ／Ｌ和含氟化钠１５０ｍｇ／Ｌ加不同剂量亚硒酸钠水。二个月后断头处死，取肺，脾作肥大细胞（ＭＣ），糖元ＰＡＳ反应，ＤＮＡ（Ｆｅｕｌｇｅｎ）反应观察。结果：肺，脾氟化钠（１５０ｍｇ／Ｌ）组肥大细胞与正常组比较，无明显变化。糖元ＰＡＳ反应，ＤＮＡ（Ｆｅｕｌｇｅｎ）反应减弱；氟化钠（１５０ｍｇ／Ｌ）加亚硒酸钠（２．０ｍｇ／Ｌ）组，肥大细胞显著增加，糖元ＰＡＳ反应，ＤＮＡ（Ｆｅｕｌｇｅｎ）反应程度增强。提示：硒在保护氟引起肺，脾损伤过程中，可能对肺、脾的肥大细胞增生和活化起促进作用。

Effect of Apatite Nanoparticles on DNA and AgNOR of Bel-7402 Hepatocellular Carcinoma

The effect of apatite ranoparticles on proliferation potential and biological behaviour of the human hepatocellular carcinoma in vitro were investigated. After the treatment of Bel- 7402 hepatoceUalar carcinoma cells with apatite nanoparticles at a concentration of 5 × 10^-4 mmol/ L for 4days, Feulgen and AgNOR stain were conducted and the .specimens were observed by microscope. The DNA and AgNOR were quantified with image analysis techniques. It was found that there was a signiftcant decrease of the DNA content （ 58.62 ± 6.52 ） in the nanoparticles treated group compared to the control （ 78.21 ± 4.17 ）. It was further found that there was a decrease in the number of AgNOR granules in the nanoparticle treated group （7.41 ± 1.02） compared to the control group （ 9.95 ± 0.28 ）. The experimental results showed thnt apatite nanoparticles could decrease the DNA reproductive activity and the rRNA sRNA synthesis in Bel- 7402 hepatocellalar carcinoma cells.

毫米波辐射后小鼠肝H_（22）腹水型癌细胞AgNOR的形态定量研究

以毫米波治疗仪照射腹腔已接种Ｈ２２肝癌细胞小鼠腹部，２０ｍｉｎ／ｄ，连续１５ｄ。发现毫米波辐射组（ＧⅡ，６．９０±０．２８）、环磷酰胺组（ＧⅢ，６．５４±０．６９）和毫米波照射加环磷酰胺组（ＧⅣ，５．７３±０．２２）小鼠的癌细胞核仁组织区均有不同程度的嗜银蛋白颗粒减少和癌细胞坏死，其数量明显低于对照组（ＧⅠ，９．８５±０．７４）。Ｆｅｕｌｇｅｎ染色的标本经ＬｅｉｔｚＭＰＶ－３显微分光光度计测定分析ＤＮＡ，也发现６Ⅱ组（５８．７１±３．１２）、ＧⅢ组（５２．３５±５．９３）和ＧⅣ组（３４．８５±１．１７）的癌细胞ＤＮＡ显著低于ＧⅠ组（７３．８７±４．９６）。结果表明，毫米波辐射可能降低Ｈ２２腹水型癌细胞ｒＤＮＡ转录活动和蛋白合成。