结核分枝杆菌重组fbpB编码蛋白的原核表达

目的:构建含有His标签的结核分枝杆菌fbpB基因原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Ag85B的表达蛋白。方法:制备结核分枝杆菌基因组DNA,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中PCR扩增fbpB基因;连接至表达载体pET28a上,经序列测定证实正确后转化大肠杆菌(E.coil)BL21,再经IPTG诱导表达His-Ag85B融合蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析重组蛋白,ELISA检测融合蛋白的抗原性。结果:扩增出了结核分枝杆菌fgbB基因,构建了具有正确基因序列的质粒载体pET28a-fgbB,转化E.coil BL21后经诱导产生了高水平的表达产物。蛋白纯化后可被结核病患者血清特异性识别。结论:构建了质粒载体,并诱导表达了His-Ag85B融合蛋白,为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础。