大黄素对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠FGL2凝血酶原酶的影响

目的观察大黄素对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠肺组织FGL2凝血酶原酶的影响。方法采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸建立SAP肺损伤大鼠模型,分别以大黄素高(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、低剂量(10 mg/kg)进行干预,在造模3、6、12 h 3个时相点分批处死大鼠,采用qRT-PCR检测大鼠肺组织FGL2、TNF-αmRNA表达,免疫组化技术检测肺组织中FGL2蛋白表达,ELISA法检测肺组织TNF-α及TXB2、6-Keto-PGF1α水平。结果模型组大鼠3、6、12 h 3个时相点肺组织FGL2、TNF-αmRNA和蛋白表达,TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值较假手术组同一时相点明显增高(P<0.05或P<0.01),应用大黄素高、中、低剂量干预后,肺组织FGL2、TNF-αmRNA和蛋白表达,TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值较模型组同一时相点显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论重症急性胰腺炎肺损伤时大黄素可以通过下调FGL2凝血酶原酶减轻胰腺炎肺损伤程度,这可能是大黄素抗SAP肺损伤的重要作用机制。

fgl2凝血酶原酶临床应用基础研究进展

fgl2凝血酶原酶是新近发现的凝血因子,主要表达于外周血T淋巴细胞、活化的内皮细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞,其不依赖经典内、外源性凝血途径,可直接激活凝血酶原,启动凝血反应。近年来随着对fgl2凝血酶原酶日益关注,相关研究渗透到临床各专业,为阻断、延缓疾病的发生、发展和新药开发提供了靶向,为防治疾病带来新希望。该文将近几年fgl2凝血酶原酶在消化、呼吸、泌尿、心血管及风湿免疫系统等的临床应用基础研究做一综述,作为研究者进一步深入探索的启发和参考。

人fgl2凝血酶原酶cDNA的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

目的:克隆人fgl2凝血酶原酶cDNA,分析其序列组成,构建真核表达载体。方法:从外周血单个核细胞中提取总RNA后,应用RT-PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶cDNA,目的基因与pcDNA3真核表达载体连接,经酶切和测序鉴定,应用软件分析其序列。结果:克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA全长序列,所扩增的cD-NA序列与genebank中发布的序列一致,构建的pcDNA3-fgl2真核表达载体与所设计的完全一致。结论:成功地克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA,构建了其真核表达载体,为研究其生物学功能奠定了基础。

凝血因子fgl2凝血酶原酶研究现状

fgl2凝血酶原酶是一种直接激活凝血酶原的凝血因子。反式因子通过与小鼠fgl2凝血酶原酶基因启动子中正性调控结构域结合而对其表达进行调控,人fgl2凝血酶原酶基因的表达调控可能之相似。作为一种免疫-凝血的中介物,fgl2凝血酶原酶在病毒引起的肝损伤、自发性流产及移植排斥反应等病理过程中发挥重要的作用。

人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定

目的建立人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(fibrinogen-related domain,FRED)的原核表达系统,并鉴定表达蛋白的凝血活性。方法应用RT-PCR从外周血单个核细胞扩增fgl2凝血酶原酶FRED基因,克隆到原核表达载体pET22b(+),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,重组蛋白经SDS-PAGE电泳和免疫印迹鉴定并用His-Tag柱纯化,以促凝活性(procoagulant activity,PCA)检测鉴定其凝血功能。结果扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED基因,成功构建了重组pET-FRED原核表达质粒,表达的融合蛋白具有直接促凝血活性。结论建立了人fgl2凝血酶原酶FRED的高效原核表达系统,FRED可能为fgl2凝血酶原酶促凝血的活性区域。

人fgl2凝血酶原酶基因的真核表达及其凝血功能研究

目的将人fgl2凝血酶原酶基因进行真核表达,了解表达蛋白的分布特点,初步研究其凝血活性。方法将pcDNA3-fgl2重组质粒转化大肠埃希菌,利用脂质体转染至HL-60细胞;RT-PCR法检测其fgl2凝血酶原酶mRNA的表达,间接免疫荧光法标记fgl2凝血酶原酶蛋白,应用激光共聚焦显微镜观察其分布,流式细胞仪检测fgl2凝血酶原酶蛋白在细胞膜的表达;并通过检测转染细胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能。结果 pcDNA3-fgl2真核表达质粒在HL-60细胞中进行了瞬时表达,转染细胞可见明显的fgl2凝血酶原酶mRNA条带。激光共聚焦显微镜观察到转染细胞胞质中可见明显的绿色荧光,流式细胞仪在转染细胞胞膜上未检测到明显的蛋白表达。转染pcDNA3-fgl2重组质粒细胞的PCA明显增高且依赖于凝血酶原。结论成功地将fgl2凝血酶原酶基因在HL-60细胞中进行了瞬时表达;fgl2凝血酶原酶主要在胞质中表达,细胞膜上无分布并可能分泌到细胞外;凝血功能分析显示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能。

宫颈癌患者Fgl2凝血酶原酶、D-二聚体表达及与临床预后关系

目的:检测宫颈癌患者纤维蛋白原样蛋白2(Fgl2)凝血酶原酶和D-二聚体表达情况,并探讨二者在宫颈癌发病中的作用及与临床预后关系。方法:选取2015年1月-2017年5月在本院经病理确诊的宫颈癌患者80例为宫颈癌组,同期本院行常规体检的健康女性75例为对照组。采用反转录-聚合酶链反应检测Fgl2凝血酶原酶mRNA水平,酶联免疫吸附法检测D-二聚体水平;Kaplan-Meier法绘制生存曲线评估Fgl2凝血酶原酶和D-二聚体对宫颈癌患者预后的影响;Cox回归分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果:宫颈癌组Fgl2凝血酶原酶mRNA和D-二聚体表达水平均高于对照组,宫颈癌患者Fgl2凝血酶原酶mRNA、D-二聚体表达与临床分期及病理类型有关,Fgl2凝血酶原酶mRNA和D-二聚体高表达组术后24个月总生存率均低于低表达组(均P<0.05);Fgl2凝血酶原酶和D-二聚体高表达水平及临床分期III^IV期是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(HR=5.013,95%CI为1.275~5.636;HR=2.305,95%CI为1.841~4.935;HR=2.305,95%CI为1.752~5.921,P均<0.05)。结论:Fgl2凝血酶原酶和D-二聚体在宫颈癌患者中表达均明显升高,表达水平与宫颈癌患者预后有关,提示两项指标可作为宫颈癌的病情评估及不良预后预测的潜在生物学指标。

凝血酶原酶基因在小鼠严重急性呼吸综合征肺损伤中的作用

目的:利用鼠肝炎3型病毒(MHV-3)建立小鼠严重急性呼吸综合征(SARS)模型,探讨小鼠fgl2凝血酶原酶基因(mfgl2)与SARS肺损伤,尤其是透明膜和血栓形成之间的关系及其临床意义。方法:Balb/cJ小鼠气管途径感染MHV-3建立小鼠SARS模型,动态观察小鼠一般情况、组织器官的病理学改变及病毒分布情况;免疫组化和原位杂交方法检测其肺组织中mfgl2和纤维蛋白的表达。结果:感染小鼠5 d内死于以肺损伤为主的多器官功能衰竭;肺呈现典型间质性肺炎样改变伴透明膜、血栓形成;所有收集的器官均可检测到病毒的复制;肺支气管浆液腺上皮细胞、间质浸润细胞及肺泡上皮细胞可检测到mfgl2的特异性表达;免疫组化双染色发现肺内透明膜及微血栓形成区域多见mfgl2与纤维蛋白的共沉积。结论:MHV-3诱导的小鼠SARS模型能较好地模拟人类SARS肺损伤的疾病特征,mfgl2在模型肺组织中的特异性高表达可激活凝血酶原,启动局部凝血过程,导致纤维蛋白的沉积,促进肺内血栓和透明膜的形成,提示mfgl2可能是SARS肺损伤又一重要分子机制。

乙型肝炎重症化机制的研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis virus B,HBV)感染宿主引起不同类型的慢性肝炎,在一定条件下均有可能重症化而转变为重型乙型肝炎。本文从病毒基因突变、病毒基因型差异、宿主纤维介素激活、宿主基因异常表达、肿瘤坏死因子的等位基因多态性、细胞凋亡等方面对慢性乙型肝炎重症化发病机制的近期研究进展作一综述。

益肾泄浊方对高糖环境下人肾小球内皮细胞的保护作用及机制

目的:探讨益肾泄浊方含药血清对高糖环境下人肾小球内皮细胞的保护作用及其机制。方法:体外培养的人肾小球内皮细胞分为空白组、模型组、空白血清对照组、益肾泄浊方含药血清低剂量组、益肾泄浊方含药血清高剂量组,每组设置3个复孔。除空白组外,每组给予含30 mmol·L^(-1) D-葡萄糖的ECM培养基培养2 h后,给予相应药物进行干预,分别于干预24 h、48 h后,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein2,fgl2)凝血酶原酶水平;RT-PCR法检测细胞中TNF-α mRNA、fgl2凝血酶原酶mRNA的表达情况;分析细胞上清中TNF-α与fgl2凝血酶原酶水平的相关性及细胞中TNF-α mRNA与fgl2凝血酶原酶mRNA表达的相关性。结果:与空白组比较,模型组肾小球内皮细胞的增殖率显著降低(P<0.05),细胞上清中TNF-α、fgl2凝血酶原酶水平及细胞中TNF-α mRNA、fgl2凝血酶原酶mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益肾泄浊方能显著提高人肾小球内皮细胞增殖率(P<0.05),显著降低细胞上清中TNF-α、fgl2凝血酶原酶水平及细胞中TNF-α mRNA、fgl2凝血酶原酶mRNA表达水平(P<0.05),且细胞上清中TNF-α与fgl2凝血酶原酶水平及两者mRNA表达水平呈正相关关系。结论:益肾泄浊方含药血清能保护高糖环境下肾小球内皮细胞损伤,其可能的作用机制是通过纠正由炎症因子TNF-α介导的免疫凝血功能异常,缓解肾脏微循环障碍,保护肾脏功能。