抑肽酶的提取及活性研究

以牛肺为原料,经酸沉淀,胰蛋白酶亲和层析,分离提纯抑肽酶。并建立了二种抑肽酶活性测定方法(UKIU法及PKAIU法)。提纯后抑肽酶纯度提高88.3倍。得率为96.8％。活性抑制试验表明,该抑肽酶可抑制PKA对前激肽释放酶(PK)的作用,以及尿激酶对纤溶酶原的作用,对纤溶酶原的活化及纤溶酶活性也有较强抑制作用。

3D共培养模型对体外培养兔角膜缘干细胞的影响

目的探讨三维(three-dimension,3D)共培养模型对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的作用。方法体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(human periodontal stem cell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分为3组,纤维蛋白胶组:将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3D共培养;羊膜组:将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组:将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5 d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物p63的表达,并比较各组p63的阳性率。结果共培养5 d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组和羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.000)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔LSCs。