成纤维细胞与脱细胞真皮基质复合培养的实验研究

目的本研究用酶消化法体外培养高纯度的人皮肤成纤维细胞(FB),将FB与高渗盐-氢氧化钠(NaCl-NaOH)消蚀法制作的人脱细胞真皮基质(ADM)复合培养并评价其生物相容性。方法中性蛋白酶-Ⅰ型胶原酶消化法体外培养人FB,通过组织学方法鉴定其纯度。携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染人FB,组织学方法观察荧光蛋白的表达情况,流式细胞仪检测转染比例。将FB和Ad-GFP转染的FB接种在NaCL-NaOH消蚀法制作的人ADM上,组织学方法观察细胞的生长和增殖情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ADM内FB角质细胞生长因子(KGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的蛋白表达。结果体外培养的人FB形态为细长梭形,有较长的突起和明显的核分裂相,波形蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达均为阳性。Ad-GFP转染FB的比例为72%。复合培养显示人FB不仅黏附在ADM表面,还可以较为均匀地在ADM天然孔隙中生长和增殖;与正常FB比较,ADM内FB KGF、bFGF mRNA的蛋白表达无明显变化。结论中性蛋白酶-Ⅰ型胶原酶消化法体外可以培养出高纯度的人FB。Ad-GFP转染FB获得成功。NaCL-NaOH消蚀法制作的ADM蕴含丰富的生物信息,FB作为种子细胞与其生物相容性好,为进一步开展皮肤创伤修复的实验研究奠定了基础。

生物细胞在极低频电磁场中的效应

探讨极低频电磁场对洋葱根尖细胞及人肺成纤维细胞生物学特性的影响。对生长发育过程中洋葱根和体外培养的人肺成纤维细胞进行50Hz,3mT极低频电磁场(ELFMFS)处理,对洋葱根的外部形态及细胞有丝分裂指数、染色体形态等进行观察分析,对人肺成纤维细胞进行增殖量比较及凋亡分析。结果表明:50Hz,3mTELFMFS在20℃时对洋葱根的生长量无明显影响,但在30℃下对洋葱根的生长起抑制作用且可导致根生长异常;正常培养条件下,ELFMFS照射组人肺成纤维细胞生长受到抑制,有细胞凋亡发生。ELFMFS与温度的叠加效应(50Hz,3mT,30℃)可对洋葱根的生长及根尖细胞的增殖产生重要作用,ELFMFS对人肺成纤维细胞的生长起抑制作用并可引起细胞凋亡。