纤维蛋白原Bβ链变异基因的体外重组

目的:采用基因重组技术将可能与血栓形成有关的纤维蛋白原Bβ链羧基端的KGD结构置换为EGS结构,提供一种简单方便的构建变异克隆的方法。方法:在含有正常BβcDNA的pMLP质粒(简称p668)的溶液中,加入变异引物、筛选引物和dNTP。在T4聚合酶和T4连接酶的作用下,合成除变异碱基外,其他碱基均与原正常Bβ链互补的变异Bβ链,经过两次在不同菌系的大肠杆菌中的表达与筛选,获取变异克隆。结果:由于变异克隆引入了BstBI这个新的酶切位点,可通过电泳证实变异克隆构建的成功与否,本研究经电泳及DNA序列分析证实重组体确系已含变异EGS结构的克隆。结论:本方法为一构建变异克隆的分子生物学技术,可用于任何克隆的构建。本研究成功地获得了纤维蛋白原Bβ链羧基端KGD转换为EGS的变异体。