Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。

去甲斑蝥素诱导小鼠肺纤维瘤L929细胞凋亡

目的:研究去甲斑蝥素 (norcantharidin,NCTD)抑制小鼠肺纤维瘤 (L929)细胞的作用机制。方法:用MTT法测定细胞生长抑制率。采用Hoechst33258染色、DNA凝胶电泳和乳酸脱氢酶 (LDH)活力检测细胞凋亡。用免疫印迹法(Westernblot)分析了细胞外信号调节激酶 (extracellularsignal regulatedkinase, ERK)和磷酸化ERK、c JunN 末端激酶 (C JunN terminalkinase, JNK)和磷酸化JNK蛋白表达的变化。结果:NCTD诱导L929细胞凋亡。JNK抑制剂 (SP600125)与ERK抑制剂(PD98059),可明显抑制NCTD对细胞的杀伤作用。同时磷酸化ERK和磷酸化JNK表达增加。结论:NCTD对L929细胞的细胞毒作用是通过诱导其凋亡而发生的,且呈时间剂量依赖性。这种作用可能与JNK,ERK通路激活有关。

吴茱萸碱在诱导小鼠纤维肉瘤L929细胞凋亡过程中对细胞周期的阻滞作用

目的研究吴茱萸碱体外诱导 L929细胞死亡的机制。方法用 MTT 法测定吴茱萸碱对 L929的细胞毒作用。通过倒置显微镜,荧光染色,观察 L929在吴茱萸碱作用下的形态学变化,用 LDH 活力测定法证明凋亡途径,用流式细胞分析技术研究昊茱萸碱对细胞周期的影响。结果 MTT 法测定不同浓度吴茱萸碱明显抑制 L929生长,并具有剂量依赖性。吴茱萸碱可诱导 L929凋亡,呈现凋亡小体,亚二倍体峰出现,但无典型因凋亡引起的 DNA 梯状泳带。低剂量5μmol·L^(-1)吴茱萸碱可将细胞周期阻滞在 G_2/M 期,而高剂量20μmol·L^(-1)吴茱萸碱可将细胞周期阻滞在 G_0/G_1 期。结论在吴茱萸碱诱导 L929凋亡过程中低剂量将细胞周期阻滞在 G_2/M 期,而高剂量则引起 G_0/G_1期阻滞。

纤维肉瘤的诊断及鉴别诊断

目的 :进一步探讨纤维肉瘤与其它梭形细胞软组织肿瘤的鉴别诊断。方法 :分别选取 1980年前 (5 2例 )与 1980年后(18例 )原病理诊断为纤维肉瘤病例 ,经 3位病理医师按标准复查原病理切片 ,结果一致者 30例 ,选出其中 2 0例和另外有争议的 2 4例 ,共 44例分别作免疫组织化学vimentin、α1 AT、S 10 0、NF、desmin、myoglobin、C keratin染色。结果 :1980年前 5 2例中维持原诊断 30例 ,修改诊断 2 2例 (42 3% ) ,分别为恶性纤维组织细胞瘤 8例、恶性神经鞘膜瘤 4例、单相性梭形细胞滑膜肉瘤 3例、平滑肌肉瘤 3例、横纹肌肉瘤 2例、韧带状纤维瘤 2例 ;1980年后纤维肉瘤 18例中 ,维持原诊断 16例 ,修改诊断 2例 (11 1% ) ,分别为恶性纤维组织细胞瘤和滑膜肉瘤各 1例。结论 :坚实的病理形态学基础、细致的观察是病理正确诊断的关键 ;合理应用免疫组化或电镜技术 。

红景天提取物对纤维肉瘤细胞T241增殖功能的影响及抑瘤作用的初步研究

目的:通过体内外实验研究红景天提取物对T241肿瘤细胞增殖的影响。方法:检测不同浓度红景天醇提取物对T241肿瘤细胞增殖及细胞存活的影响;C57BL6/J荷瘤小鼠分为红景天组及实验对照组,观察红景天灌胃处理对荷瘤小鼠肿瘤生长的作用,计算两组肿瘤生长抑制率。结果:红景天醇提取物抑制T241细胞增殖呈浓度依赖性,且浓度在在50μg/ml至250μg/ml之间时实验组与对照组相比细胞存活率没有显著差异。荷瘤小鼠在红景天灌胃21 d后,与对照组相比,红景天组抑瘤率达到了70.9%。结论:红景天在体内外实验均能有效抑制T241纤维肉瘤细胞的增殖,且未发现明显细胞毒作用。

内皮细胞Rho/Rho激酶介导纤维肉瘤细胞血管外游走的机制

目的研究内皮细胞Rho/Rho激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制。方法采用血管外游走体外模型观察纤维肉瘤细胞血管外游走状况;测定游走过程中血管内皮单细胞层电阻变化;进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平。结果纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,在游走过程中跨血管内皮细胞层电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平升高。内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化。结论内皮细胞Rho/Rho激酶可能是通过调节肌球蛋白轻链磷酸化水平诱导纤维肉瘤细胞向血管外游走。

RNA干扰MMP-9表达对人纤维肉瘤细胞系HT1080侵袭转移的影响

目的:探讨MMP-9高表达对人纤维肉瘤细胞HT1080侵袭和转移能力的影响,及对相关机制进行初步研究。方法:将能与MMP-9结合的双链RNA转染到HT1080细胞中。结果:人纤维肉瘤细胞HT1080细胞系中的MMP-9表达减少,可导致细胞迁移抑制、增加细胞粘附和减少肿瘤细胞迁移此外,MMP-9敲除后会造成可溶性细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的水平下降,从而导致粘附缺陷与肿瘤转移。结论:MMP-9在人纤维肉瘤细胞HT1080中具有关键作用,通过改变ICAM-1从膜结合形式变为可溶性形式。

内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调控纤维肉瘤细胞血管外游走的实验研究

目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制。方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术,评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平。结果:纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,并且游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平升高。内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)能够抑制上述变化,并具有浓度依赖性。结论:内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可通过调控肌球蛋白轻链的磷酸化水平,引起骨架重组、细胞收缩,从而导致纤维肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走。

一种新的制备多克隆抗体的方法

用亲和色谱纯化的rhEPO作为抗原免疫KM小鼠和Balb/c小鼠 ,然后腹腔注射S180细胞或SP2 / 0细胞。S180细胞可刺激KM小鼠产生腹水 ,腹水量大 ,抗体效价高。而直接注射SP2 / 0细胞既未能使KM小鼠产生腹水 ,也未能使Balb/c小鼠产生腹水。实验提供了一种新的简便、快速。

组织因子在纤维肉瘤细胞血管外游走中的作用

目的:评价组织因子对纤维肉瘤细胞血管外游走的影响,明确组织因子与纤维肉瘤细胞血行转移的相关性。方法:应用流式细胞仪检测组织因子在纤维肉瘤细胞(HT1080)的表达情况;在体外模拟肿瘤细胞血管外游走过程,构建充分融合的单层血管内皮细胞及血管外基质,定量评价HT1080向血管外游走的状况。结果:应用流式细胞仪检测出组织因子在HT1080上有强表达;HT1080可以穿过单层血管内皮细胞游走至血管外基质,具有时间依赖性;抗组织因子抗体能够抑制HT1080的血管外游走,并且高浓度的抗TF抗体(20 mg/L)较低浓度的抗TF抗体(5 mg/L)的抑制作用更为明显,差异有显著意义(P<0.05),具有浓度依赖性。结论:组织因子能够促进纤维肉瘤细胞的血管外游走,从而加速纤维肉瘤细胞的血行转移。

肿瘤干细胞与纤维肉瘤的研究进展

肿瘤干细胞是近年来医学研究领域的热点之一,它具有强大的自我更新和致瘤能力以及不断分化的潜能。肿瘤干细胞学说认为肿瘤干细胞可能与肿瘤的产生、易复发和转移、具有强耐药性等有密切关系。有学者在造血系统肿瘤和多种实体瘤中分离并鉴定出肿瘤干细胞进一步证明了这种理论。现主要从肿瘤干细胞学说、生物学特性、鉴定分离、纤维肉瘤干细胞相关研究方面进行简要综述。

鼠高、低转移性纤维肉瘤中波形纤维蛋白的分析

为探讨肿瘤细胞生物特性与细胞骨架蛋白表达的关系，选用了鼠的高、低转移性纤维肉瘤细胞，采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对这两株细胞的中等纤维蛋白－波形纤维蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）进行了分析。结果显示：波形纤维蛋白在高、低转移性纤维肉瘤细胞中，其含量有所不同，并有波形纤维蛋白亚基的变化。在高转移性纤维肉瘤细胞中检测到新型的波形纤维蛋白亚基，说明高转移瘤细胞的中等纤维蛋白的表达，与其来源组织的特异性蛋白表达有着明显的差异。

血管紧张素Ⅱ通过Raf/MEK/ERK通路对PDGF诱导的气道上皮细胞转分化的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对加速纤维肉瘤蛋白(Raf)/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调控作用,及对血小板源生长因子(PDGF)诱导的气道上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法取人气道上皮细胞株16-HBE,分为对照组、PDGF不同浓度刺激组(5、25、50、100、200 ng/L),用免疫荧光法检测各组细胞EMT标志物波形蛋白(vimentin)阳性表达,选出合适的PDGF诱导浓度。将16-HBE细胞分为正常对照组、PDGF诱导组(100 ng/L)、AngⅡ不同浓度组(10^(-7)、10^(-6)、10^(-5) mol/L),用倒置显微镜检测细胞形态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞EMT相关蛋白E-粘钙素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、vimentin,气道纤维化相关蛋白-纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅳ(ColⅣ),Raf/MEK/ERK通路相关蛋白Raf、MEK及磷酸化水平(p-MEK)、ERK及磷酸化水平(p-ERK)、转化生长因子β1(TGF-β1)等蛋白相对表达水平。将16-HBE细胞分为正常对照组、PDGF诱导组、AngⅡ组(10^(-6) mol/L)、Raf/MEK/ERK通路抑制剂(sorafenib)组(10μmoL/L)、AngⅡ+sorafenib(10^(-6) mol/L+10μmol/L)组,检测细胞形态及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达。结果PDGF不同浓度处理下,细胞vimentin阳性表达随浓度升高逐渐升高,并在100~200 ng/L时上升至稳定水平,选取100 ng/L为诱导浓度。AngⅡ不同浓度处理后,与正常对照组比较,PDGF诱导组细胞紧密连接减少,细胞呈长梭形等改变,E-cadherin表达降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、FN、ColⅣ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05);与PDGF诱导组比较,AngⅡ不同浓度处理组细胞长梭形改变进一步加重,E-cadherin表达进一步降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、FN、ColⅣ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达进一步升高(P<0.05),且AngⅡ浓度10^(-6) mol/L组及10^(-5)mol/L浓度组上述指标变化优于10^(-7)mol/L组,AngⅡ浓度10^(-6) mol/L组与10^(-5)mol/L浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05)。AngⅡ与sorafenib联合应用后,与正常对照组比较,PDGF诱导组细胞紧密连接减少,长梭形改变较多,Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05)。与PDGF诱导组相比,AngⅡ组细胞紧密连接减少,长梭形改变较多,Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达进一步升高(P<0.05),sorafenib组Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达降低(P<0.05)。AngⅡ+sorafenib组上述指标变化与AngⅡ组相反,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ可通过激活Raf/MEK/ERK通路表达,促进PDGF诱导的气道上皮细胞EMT进程。

成纤维细胞和纤维肉瘤细胞的中等纤维构型特点及其意义

对体外培养的成纤维细胞、高分化纤维肉瘤细胞、低转移性及高转移性纤维肉瘤细胞的中等纤维的构型进行了研究。结果显示：中等纤维在恶变细胞中，其构型变化发生紊乱，并随细胞恶变程度的增加，其紊乱的程度也相应增加．说明中等纤维构型变化紊乱是恶变细胞的异型性表现之一．转移率高的瘤细胞，这种异型性更大．

α-硫辛酸对高糖作用后βTc6细胞的保护作用

目的:研究α-硫辛酸对高糖毒性作用后βTc6细胞胰岛素基因、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)基因表达的影响,对细胞的保护作用及其机制。方法:培养βTc6细胞,分为NG组(5mmol/L葡萄糖)、HG组(16.7mmol/L葡萄糖)和HG+ALA组(16.7mmol/L葡萄糖+200μmol/Lα-硫辛酸);培养48h后收集细胞培养液,检测胰岛素浓度并提取细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应检测胰岛素及MafAmRNA水平。结果:HG组与NG组比较,胰岛素和MafAmRNA的表达下降(P<0.05或P<0.01);HG+ALA组与HG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达均提高(均P<0.01);而与NG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:糖毒性可能通过激活βTc6细胞内氧化应激反应使MafA的表达下降,进而导致胰岛素基因表达下降;α-硫辛酸可能通过上调MafA的表达而对β细胞起到保护作用。

一例猫舌下高分化纤维肉瘤的病理组织学观察

为了丰富猫口腔肿瘤的病理学知识并为临床诊断提供病理学依据,以山西晋中某动物医院来诊的一例猫舌下肿瘤组织为材料,采用常规病理学方法进行观察。结果表明,猫口腔舌下右侧舌系带旁呈灰白色菜花状肿物大小约为1 cm×1.5 cm×0.8 cm,未见有明显的包膜,切面为有光泽的灰白色,可见明显的纤维,呈交织状。组织病理学观察到瘤细胞空间排列紊乱,梭形的瘤细胞大小不一,细胞核呈椭圆形,嗜碱性强,核仁明显,可见少量的病理分裂相,细胞胞浆嗜酸性,呈旋涡状,两端延伸,边界不清。根据纤维肉瘤组织病理学特征,诊断该病例为高分化纤维肉瘤。

金属蛋白酶抑制剂对外源Rac1表达介导的细胞侵袭胶原屏障的影响

目的体外研究金属蛋白酶(MMPs)抑制剂对外源Rac1基因表达介导的HT1080纤维肉瘤细胞侵袭胶原屏障的影响。方法分别转染显性负调控突变体Rac1V12N17(HN)、持续活化型Rac1V12(HV)或空载体(HW)于纤维肉瘤HT1080细胞,G418筛选。蛋白印迹分析检测外源性Rac1基因表达,并在含胶原蛋白凝胶的3D基质中培养,用得克萨斯红结合的鬼笔环肽染色显示细胞肌动蛋白骨架构型。在含胶原蛋白凝胶覆盖滤膜的Transwell小室进行细胞侵袭胶原屏障实验,并观察MMPs抑制剂和抑肽酶对上述细胞侵袭实验的影响。结果HV细胞伸出明显的突起,HN细胞形态紧凑,HV细胞侵袭胶原屏障的能力大于HW细胞,而后者又强于HN细胞,这种差别在应用广谱MMPs抑制剂后消失,而抑肽酶则无影响。结论外源活化型Rac1基因在纤维肉瘤HT1080细胞内稳定表达可诱发肌动蛋白纤维聚集,并可增加HT1080纤维肉瘤细胞侵袭胶原屏障的能力,但这种细胞侵袭胶原蛋白能力的增强可被MMPs抑制剂阻断。

细胞肌腱膜纤维肉瘤因子调节免疫细胞分化及功能机制

细胞肌腱膜纤维肉瘤因子(c-MAF)是一种具有广泛功能的转录因子,其C端的碱性亮氨酸拉链(Basic Leucine Zipper,b-Zip)结构域高度保守,可与细胞核内含有b-ZIP结构的转录因子结合形成同源或异源二聚体形式并结合DNA发挥转录激活功能调节机体免疫状态。c-MAF通过与IL-10、IL-21、IL-4等细胞因子的基因座启动子或增强子部位结合调控其表达,从而双向调节包括2型辅助T(T helper type 2,Th2)细胞、Th17细胞、Tfh细胞和调节性T(Regulatory T,Treg)细胞在内的多种淋巴细胞及巨噬细胞的分化或功能形成。c-MAF信号网络的阐述对于免疫细胞绝对数及功能异常所引起的自身免疫性疾病的发病机制的探讨及靶向治疗具有重要意义。

卵巢富细胞纤维瘤24例临床病理分析

目的:探讨卵巢富细胞纤维瘤的临床与病理学特征。方法:收集2008年2月至2017年3月复旦大学附属妇产科医院诊治的24例卵巢富细胞纤维瘤患者的临床病理资料,观察肿瘤组织学特征、免疫表型,并进行随访。结果:24例患者年龄为17~70岁,平均46.5岁。临床症状包括卵巢肿块、下腹胀痛或合并胸腹水。2例患者术前伴CA125显著升高。卵巢富细胞纤维瘤发生于右侧卵巢、左侧卵巢、双侧卵巢分别为13、10、1例。镜下显示肿瘤细胞丰富、无明显异型性。3例患者的肿瘤细胞核分裂象活跃,核分裂象5~7个/10个高倍视野(high power fields,HPF),3例患者的肿瘤中含少量(少于10%)性索成分,4例见黄素化细胞。随访1~109个月,未见复发。结论:卵巢富细胞纤维瘤是纯间质肿瘤,可有核分裂象增多、伴有少量性索成分及黄素化。部分患者合并胸腹水及CA125升高,易误诊为恶性肿瘤。为避免误诊以影响临床诊断和治疗,认识该病具有重要的意义。

小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响

目的:构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响。方法:提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用PmeⅠ线性化后转化到含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响。结果:与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK)mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论:成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化。