超声造影联合血清Ficolin-3,FOXM1对2型糖尿病下肢动脉病变的诊断价值分析

目的超声造影联合血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)、叉头框蛋白M1(FOXM1)对2型糖尿病(T2DM)下肢动脉病变的诊断价值分析。方法选取2022年2月至2023年2月我院收治的T2DM患者114例,以下肢动脉血管造影检查为金标准,将患者分为下肢动脉病变组23例(病变组)和无下肢动脉病变组91例(T2DM组),另选取同期于本院进行体检的健康志愿者91例为对照组。对患者及健康志愿者进行血清Ficolin-3、FOXM1及超声造影检查;ROC曲线分析血清Ficolin-3、FOXM1对T2DM下肢动脉病变的诊断价值;采用四格表法分析血清Ficolin-3、FOXM1、超声造影及3项联合对T2DM下肢动脉病变的诊断价值。结果病变组、T2DM组血清Ficolin-3水平显著高于对照组,且病变组血清Ficolin-3水平显著高于T2DM组(均P<0.05);病变组、T2DM组血清FOXM1水平显著低于对照组,且病变组血清FOXM1水平显著低于T2DM组(均P<0.05);血清Ficolin-3诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.868,敏感度为86.96%,特异度为75.82%,最佳截断值为35.12μg/ml;血清FOXM1诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.854,敏感度为82.61%,特异度为78.02%,最佳截断值为0.57;血清Ficolin-3、FOXM1检查结果与金标准均具有中度一致性(Kappa=0.480、0.481,均P<0.001);超声造影检查结果显示,T2DM下肢动脉病变的阳性检出率为73.91%,与金标准具有较高一致性(Kappa=0.631,P<0.001);3项联合检测的敏感度、漏诊率均显著优于超声造影单独诊断,准确度显著优于Ficolin-3、FOXM1单独诊断,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论血清Ficolin-3、FOXM1联合超声造影检查在T2DM下肢动脉病变诊断中的应用价值较高,进一步提升了诊断的敏感度、准确度,减少了误诊率。

Ficolin在毛蚶抗弧菌感染中的作用

Ficolin是一类含FBG结构域的蛋白,在动物免疫防御中发挥重要作用。无脊椎动物中,Ficolin主要作为模式识别受体和免疫效应分子发挥免疫功能。本研究从毛蚶中克隆获得一条Ficolin基因(命名为SsFic1),该基因编码区序列长度为897 bp,编码298个氨基酸,推测的蛋白含有典型的FBG结构域和Coiled coil结构域,但未发现胶原样结构域。SsFic1的mRNA在毛蚶各组织中广泛分布,其中在肝胰腺和鳃中表达丰度较高,但SsFic1转录产物在卵细胞和四细胞期未检测到,说明该基因不是母源性免疫基因。副溶血弧菌和脂多糖、葡聚糖等免疫刺激物均可诱导SsFic1显著上调表达。利用RNAi技术抑制SsFic1基因表达,酚氧化酶激活因子PAF和补体相关基因(C1qDC、补体C3和Fic3)的表达量及CAT、SOD和PO的酶活力均显著下降,而TEP、C1q2和Fic2等基因的表达显著上调。敲降SsFic1表达后,感染副溶血弧菌后毛蚶血细胞数量和吞噬能力均显著低于对照组,这也是RNAi实验组毛蚶死亡率和血细胞凋亡率显著升高的原因。综上,SsFic1可能通过调控补体通路和酚氧化酶原激活通路参与毛蚶免疫防御反应,这对贝类免疫学研究及抗病新品系的选育具有重要意义。

血清HbA1c、Alarin及Ficolin-3水平对妊娠期糖尿病患者妊娠结局的预测价值

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清糖化血红蛋白A1c(HbA1c)、Alarin及纤维凝胶蛋白-3(Ficolin-3)联合对不良妊娠结局的预测价值。方法选取入院产检并住院分娩的129例GDM患者为GDM组,选取同期于本院产检并分娩的133例糖耐量试验结果正常孕妇作为对照组。采用全自动糖化血红蛋白分析仪检测血清HbA1c水平;酶联免疫吸附试验检测血清Alarin和Ficolin-3水平;Pearson法分析GDM患者血清HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平与餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平与GDM患者发生不良妊娠结局的关系;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平对GDM患者发生不良妊娠结局的预测价值。结果GDM组2 h PG、FBG、HOMA-IR及血清HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平均高于对照组(P<0.05)。GDM患者血清HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平与2 h PG、FBG、HOMAIR均呈正相关(P<0.05)。血糖控制差的GDM患者血清HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平均高于血糖控制好的GDM患者(P<0.05)。不良妊娠结局的GDM患者上述三指标水平均高于无不良妊娠结局GDM患者(P<0.05)。HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平升高均是GDM患者发生不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。HbA1c、Alarin、Ficolin-3单独及联合预测GDM患者发生不良妊娠结局的曲线下面积分别为0.840、0.865、0.815和0.979。结论GDM患者血清HbA1c、Alarin、Ficolin-3水平异常升高,三者联合检测可提高不良妊娠结局的预测价值。

妊娠期高血压患者血清ficolin-3、Angptl4水平变化及其临床意义

目的:探讨妊娠期高血压患者血清纤维蛋白胶凝素-3(ficolin-3)、血管生成素样蛋白4(Angptl4)水平变化及其临床意义。方法:选取2020年5月至2022年5月在本院接受治疗的102例妊娠期高血压患者作为观察组,根据患者病情,分为高血压组(37例)、轻度子痫前期组(42例)和重度子痫前期组(23例);另选取同一期间102名孕检健康孕妇作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清ficolin-3、Angptl4水平。采用Pearson相关系数分析血清ficolin-3与Angptl4的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线检测血清ficolin-3、Angptl4对妊娠期高血压的诊断价值;采用Logistic回归分析妊娠期高血压发生的危险因素。结果:与对照组比较,观察组血清ficolin-3、Angptl4水平均明显降低(P<0.05)。高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清ficolin-3、Angptl4水平逐步降低(P<0.05)。观察组患者血清ficolin-3与Angptl4呈正相关(r=0.527,P<0.001)。血清ficolin-3、Angptl4联合诊断妊娠期高血压的ROC曲线下面积(AUC)大于单独诊断的AUC(Z=2.595,P=0.009;Z=5.201,P<0.001)。与对照组比较,观察组血小板计数(PLT)明显降低,血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板聚集率(PagT)明显升高(P<0.05)。血清ficolin-3低表达、Angptl4低表达、PLT低水平、MPV高水平、PDW高水平、PagT高水平是妊娠期高血压发生的危险因素(P<0.05)。结论:妊娠期高血压患者血清ficolin-3、Angptl4水平均降低,且与妊娠期高血压病情严重程度相关,检测两者水平变化可对妊娠期高血压进行准确评价。

CT评分联合血清HMGB-1、Ficolin-3在颅脑损伤患者损伤程度及预后中的应用价值

目的探究计算机断层扫描评分(CT)联合血清高迁移率蛋白-1(HMGB-1)、纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)在颅脑损伤患者损伤程度及预后中的应用价值。方法回顾性选择2019年1月至2024年3月在芜湖市第一人民医院接受颅脑损伤治疗的90例患者作为研究对象,根据GCS量表评估结果及临床诊断划结果分为3组:轻度损伤组(n=37)、中度损伤组(n=30)、重度损伤组(n=23)。治疗3个月后以格拉斯哥预后量表(GOS)对90例患者预后情况进行评估,将预后良好67例作为预后良好组,预后不良23例作为预后不良组。比较轻度损伤组、中度损伤组与重度损伤组的CT评分、HMGB-1、Ficolin-3指标水平差异,以及预后良好组与预后不良组的CT评分、HMGB-1、Ficolin-3指标水平差异。并采用Pearson相关性分析法分析CT评分、HMGB-1、Ficolin-3指标水平与颅脑损伤程度及预后的相关性。结果重度损伤组CT评分、HMGB-1水平分别为(11.25±2.04)分、(8.06±1.25)mg/L,均高于中度损伤组[(8.13±1.32)分、(6.55±1.19)mg/L]、轻度损伤组[(5.08±1.21)分、(5.01±1.17)mg/L],重度损伤组Ficolin-3水平为(12.63±2.76)μg/mL,则低于中度损伤组[(14.90±2.28)μg/mL]、轻度损伤组[(18.05±3.14)μg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);而中度损伤组CT评分、HMGB-1水平均高于轻度损伤组,中度损伤组Ficolin-3水平则低于轻度损伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的CT评分、HMGB-1水平分别为(11.37±1.83)分、(7.54±1.39)mg/L,均高于预后良好组[(4.70±0.92)分、(4.62±1.07)mg/L],而Ficolin-3水平为(14.01±3.18)μg/mL,低于预后良好组[(19.43±2.56)μg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,CT评分、HMGB-1与颅脑损伤程度、预后情况均呈正相关,而Ficolin-3水平表达则与颅脑损伤程度、预后情况呈负相关(P<0.05)。结论相较于轻度颅脑损伤患者中度、重度颅脑损伤患者CT评分、HMGB-1水平均更高,而Ficolin-3水平则明显下降,检测CT评分、HMGB-1、Ficolin-3指标水平有助于颅脑损伤患者病情程度检测,同时还有益于预后评估。

ficolin-3表达水平对急性脑梗死患者溶栓治疗结局的影响

目的:研究纤维蛋白胶凝素3(ficolin-3)表达水平对急性脑梗死患者溶栓治疗结局的影响。方法:选取2019年1月—2021年6月商丘市中医院收治的80例超早期急性脑梗死患者作为研究对象,根据患者改良Rankin量表(mRS)评分将其分为预后良好组(52例)和预后不良组(28例)。入组前所有患者均给予爱通立(rt-PA)进行静脉溶栓治疗。分别于治疗前及治疗后测定两组患者血清中ficolin-3水平;治疗前及治疗后14 d、90 d时对患者进行美国国立卫生研究所卒中量表(NHISS)评分。结果:治疗后,两组患者血清中ficolin-3水平均明显增加,且预后良好组明显高于预后不良组,差异有统计学意义(t=3.629,P<0.05);治疗后14 d和90 d,预后良好组患者NHISS评分均明显降低,且治疗后90 d明显低于治疗后14 d时的NHISS评分,差异有统计学意义(t=32.257,P<0.05);治疗后14 d和90 d,预后良好组患者NHISS评分明显低于预后不良组,差异有统计学意义(t=18.451、32.257,P<0.05);治疗后90 d NHISS评分是急性脑梗死患者溶栓治疗预后的独立危险因素,治疗后血清ficolin-3水平是急性脑梗死患者溶栓治疗预后的独立保护因素。患者血清中ficolin-3水平与治疗后患者NHISS评分成正相关(r=0.536,P<0.001),与治疗后NHISS评分的降低程度成负相关(r=-0.541,P<0.001)。ROC曲线的AUC为0.746(95%CI=0.674~0.873,P<0.001),敏感性为65.49%,特异性为56.38%。当血清中ficolin-3水平低于20.28μg/L时,预后不良率较高。预后良好组治疗至14 d时未发生不良事件,预后不良组出现1例进展性卒中,1例脑出血。结论:血清ficolin-3表达水平与急性脑梗死患者溶栓治疗结局呈负相关,低血清ficolin-3水平的患者预后不良的发生率更高。

Ficolin-3水平对老年急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成的预测价值

目的探讨分析纤维凝胶蛋白(Ficolin)-3水平对老年急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成的预测价值。方法选取2018年1月至2021年1月在廊坊市人民医院治疗的102例老年急性脑梗死患者,采用颈动脉超声检查,将患者分为内膜增厚组33例、稳定斑块组25例和不稳定斑块组44例,并选取同期体检正常50例健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆纤维凝胶蛋白(Ficolin)-3水平,分析其水平变化与颈动脉粥样硬化斑块形成的关系。结果各组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、同型半胱氨酸(HCY)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙氨酸转氨酶(ALT)、尿酸等指标水平差异无统计学意义(P>0.05),而三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平、入院时美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分、血清Ficolin-3水平差异有统计学意义(P<0.05);稳定斑块组和不稳定斑块组TG、TC、HbA1c水平显著高于对照组和内膜增厚组(P<0.05);内膜增厚组、稳定斑块组和不稳定斑块组入院时NIHSS评分和血清Ficolin-3水平显著高于对照组,且组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Ficolin-3水平截断值为21.46μg/L时,预测老年急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.69(95%CI:0.658~0.814),灵敏度和特异度为71.48%和66.52%。Logistic回归分析结果显示TC、入院时NIHSS评分、血清Ficolin-3是终末期肾病患者发生血管钙化的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。虚拟视频恐惧刺激下同步辅助运动康复治疗后,与治疗前比,治疗后部分患者简易精神状态评价(MMSE)评分、洛文斯顿作业疗法认知(LOTCA)量表、Fugl-Meyer(FMA)量表、评估功能性步行能力(FAC)量表显著升高,提示患者认知功能和运动功能显著改善(P<0.05)。结论Ficolin-3水平是老年急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成的独立危险因素,其水平异常降低具有较好预测价值。

血清PCT HMGB-1 ficolin-3与颅脑外伤神经损伤程度的相关性分析

目的探讨血清PCT、HMGB-1、ficolin-3与颅脑外伤神经损伤程度的相关性及对术后颅内感染的预测价值。方法选取2018-01—2021-01诊治的86例颅脑外伤患者作为研究对象,根据GCS评分将颅脑外伤患者分为A、B、C 3组,再根据术后72 h有无发生颅内感染分为颅内感染组(n=22)与非颅内感染组(n=64)。结果C组的PCT、HMGB-1均高于A、B组,而ficolin-3低于A、B组(P<0.05)。Spearman相关性显示,颅脑外伤患者神经损伤程度与PCT、HMGB-1、呈正相关(r=—0.456、0.362,P<0.05);与ficolin-3呈负相关(r=—0.386,P<0.05)。颅内感染组的PCT、HMGB-1高于非颅内感染组,而ficolin-3低于非颅内感染组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PCT、HMGB-1、ficolin-3预测颅脑外伤患者术后发生颅内感染的AUC值分别为0.987、0.996、0.712(P<0.05)。结论实时监测PCT、HMGB-1、ficolin-3表达量能为神经损伤程度的评估及术后颅内感染的预测提供重要参考信息。

人L-ficolin基因重组蛋白的表达及功能研究

目的:构建人L-ficolin基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR方法从质粒pCDNA3-L-ficolin中扩增L-ficolin cDNA片断,并将该片断插入pGEX-KG原核表达载体中,以进行插入基因的融合表达,表达后再用Thrombin切除GST以得到单纯的L-ficolin蛋白,SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,并以细菌侵袭试验检测所得蛋白的生物学活性。结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-L-ficolin原核表达载体,并使之在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的分子质量(Mr)与预期值相一致。原核表达的L-ficolin蛋白具有调理吞噬作用,促进吞噬细胞吞噬细菌的能力,L-ficolin调理吞噬能力呈剂量依赖关系,并显著高于对照蛋白。结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-L-ficolin,经过Thrombin作用后得到的L-ficolin蛋白具有生物学活性,为进一步研究人L-ficolin的功能奠定了基础。

老年慢性肾小球肾炎病人血清Ficolin-3水平与肾功能损害程度及预后的关系

目的 探究老年慢性肾小球肾炎(CGN)病人血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)水平与肾功能损害程度及预后的关系。方法 选取2017年9月至2019年9月本院收治的140例老年CGN病人(CGN组)进行研究,并纳入同期140例老年健康体检者(对照组)进行对照研究。比较2组一般资料及血清Ficolin-3水平。根据估算肾小球滤过率(eGFR)水平将140例CGN病人分为3组,即正常-轻度下降组(43例)、中度下降组(57例)、重度下降组(40例)。对病人随访2年,其中发展成慢性肾功能衰竭(CRF)10例(CRF组),病情缓解/无进展130例(非CRF组)。采用Pearson相关系数描述CGN病人血清Ficolin-3水平与肾功能指标UA、BUN、血肌酐(SCr)的相关性;绘制ROC曲线分析血清Ficolin-3水平及肾功能指标对CGN病人CRF的评估价值;多因素Cox回归分析CGN病人CRF发生的影响因素。结果 CGN组病人UA、BUN、SCr及血清Ficolin-3水平明显高于对照组(P<0.01)。不同水平肾功能病人UA、BUN、SCr及血清Ficolin-3水平由高至低依次为重度下降组、中度下降组和正常-轻度下降组(P<0.05)。CGN病人血清Ficolin-3水平与UA、BUN、SCr水平均呈正相关(r=0.559、0.394、0.427,P<0.05)。CRF组病人UA、BUN、SCr及血清Ficolin-3水平明显高于非CRF组(P<0.05或P<0.01)。血清Ficolin-3联合肾功能指标评估CGN病人发生CRF的AUC为0.944,明显高于Ficolin-3、UA、BUN、SCr单独检测(P<0.05)。Cox回归分析显示,BUN≥9.07 mmol/L、SCr≥88.64 μmol/L、Ficolin-3≥45.02 mg/L是CGN病人发生CRF的危险因素(P<0.05)。结论 老年CGN病人血清Ficolin-3水平升高,高水平的Ficolin-3与CGN病人肾功能损害程度及预后有关。

Ficolin在小鼠体内结肠癌细胞系CT26生长效应及其机制

目的研究Ficolin的抗结肠癌作用,并初步探究其作用机制。方法建立不同免疫细胞缺失的小鼠荷瘤模型,研究Ficolin的抗结肠肿瘤效应及其效应细胞;流式细胞仪检测小鼠结肠癌细胞(CT26)与Ficolin及其截短突变蛋白的结合;用ELISA方法检测Ficolin及其截短突变蛋白刺激BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞释放细胞因子情况;C4沉积实验检测Ficolin蛋白与CT26结合后激活补体凝集素途径情况。结果 Ficolin-2与Ficolin A能明显抑制荷瘤小鼠背部肿瘤的生长;当荷瘤小鼠体内巨噬细胞去除后,Ficolin-2与Ficolin A抑制荷瘤小鼠背部肿瘤的生长效应消失;Ficolin-2与Ficolin A蛋白能与CT26细胞结合,并呈现剂量依赖性;Ficolin-2的截短突变蛋白D1、D2能与CT26细胞结合,D3不能与CT26细胞结合;Ficolin-2与Ficolin A蛋白能明显刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放细胞因子,如一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素17A(IL-17A)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素22(IL-22);而Ficolin-2的截短突变蛋白D1、D2、D3却不能刺激巨噬细胞释放上述细胞因子;Ficolin-2与Ficolin A蛋白能激活补体凝集素途径。结论 Ficolin-2与Ficolin A能明显抑制荷瘤小鼠背部肿瘤的生长,而荷瘤小鼠体内的巨噬细胞被去除后,Ficolin-2与Ficolin A抗结肠癌效应受到抑制。体外实验发现,Ficolin-2与Ficolin A可能是通过刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放NO、TNF-α、IL-17A、IL-6及IL-22细胞因子发挥抗结肠癌作用;Ficolin-2与Ficolin A也能激活补体凝集素途径。Ficolin通过其C端与CT26结合,而其发挥生物学活性则需要N端与C端的共同存在。

肺炎支原体肺炎患儿急性期和恢复期血浆H-ficolin和L-ficolin水平分析

目的了解肺炎支原体肺炎患儿急性期和恢复期血浆中H-ficolin、L-ficolin水平的变化。方法采用ELISA法检测85例肺炎支原体肺炎患儿急性期和恢复期血浆H-ficolin、L-ficolin水平，并进行相关性分析。结果急性期H-ficolin水平18～252uq／ml，平均（119±59）ug／ml，恢复期H-ficolin水平0．3～26．5ug／ml，平均（10．1±57）ug／ml，急性期明显高于恢复期（Z=2．161．P=0.031）。急性期L-ticolin水平0．2～106μg／ml，平均（4．5±2.3）ug／ml，恢复期L-ficolin水平0．03～102μg／ml，平均（4．6±22）uq／ml，急性期和恢复期无统计学差异（t=0.245，P=0.807）。患儿急性期血浆H-ficoNn水平与L-ficolin水平明显相关（r=0.22，P=0.039）。结论H-ficolin可能参与儿童肺炎支原体肺炎疾病过程。

H-ficolin与丙型肝炎发展的相关性

目的探讨补体凝集素H-ficolin表达与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)病毒感染及肝病病程发展的相关性。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测丙肝、肝硬化、肝癌患者血清中H-ficolin的表达水平,并用免疫组化检测正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织中H-ficolin的表达。结果丙肝患者血清中H-ficolin表达高于健康对照者,而肝硬化、肝癌患者血清H-ficolin水平低于健康对照者;正常肝细胞高表达H-ficolin,当肝细胞硬化甚至癌变后,则H-ficolin表达下降或不表达。结论 H-ficolin表达与丙型肝炎病程迁延,肝细胞发生硬化或癌变,具有一定相关性。

经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析

利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性。Western blot结果显示以7.5MOI接种量感染的sf9细胞在96h时获得了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolinα具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性。猪Ficolinα在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性。本研究可以为猪Ficolinα的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础。

ficolins基因多态性与临床疾病易感性的研究进展

ficolins是天然免疫中的一种模式识别分子,最早被作为转化生长因子β1结合蛋白从猪子宫内膜中分离而来。ficolins与甘露聚糖结合植物凝集素功能相似,能结合病原微生物的糖类配基,通过补体途径和调理吞噬作用消灭病原体,在天然免疫中发挥重要作用。迄今为止,已发现M-ficolin,L-ficolin和H-ficolin 3种人类ficolin蛋白,分别由FCN1,FCN 2和FCN 3基因编码。随着研究的深入,越来越多的学者开始关注FCN基因多态性与疾病易感性之间的关系。大量研究发现,FCN基因多态性与疾病的易感性、严重性及疾病的发生发展密切相关。本文就FCN基因多态性与相关疾病易感性间的关系进行简述。

L-ficolin突变体原核表达载体的构建及表达产物的鉴定

目的构建L-ficolin突变体的原核表达载体，为研究L-ficolin的糖结合位点奠定基础。方法设计L-ficolin突变体基因上、下游引物，分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点。以插入L—ficolin M2（Val144Phe）和M6（Glu 307Asp）点突变的完整编码区基因的质粒pCDNA3-L-ficolin为模板，通过PCR扩增获得突变体的基因片段，将其克隆入原核表达载体pGEX—KG．然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定；将此表达载体转化入表达菌BL21（DE3）pLvSs诱导表达。并采用SDS—PAGE对表达产物进行鉴定。结果经酶切及序列分析表明．成功地构建了重组原核表达载体pGEX-KG—L—ficolin—M2、pGEX-KG-L-ficolin—M6，SDS—PAGE显示目的蛋白大量表达。结论L—ficolin突变体融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达。为研究L-ficolin的糖结合位点打下基础。

Ficolin通过激活补体加重poly(I:C)联合LPS诱导的急性肺脏损伤

目的:探究纤维胶凝素(ficolin)在poly(I:C)联合LPS刺激诱导的急性肺损伤中的作用及机制。方法:6~8周龄SPF级C57BL/6小鼠和ficolin基因敲除小鼠分别随机分组,连续2 d滴鼻50μg/d poly(I:C),然后50μg/d滴鼻LPS 1 d,构建poly(I:C)和LPS联合刺激诱导的急性肺损伤小鼠模型,单独刺激或滴鼻PBS为对照组;HE染色检测肺组织病理变化;流式细胞术检测每组小鼠肺组织中性粒细胞和巨噬细胞的比例变化;Western blot检测每组小鼠肺组织和RAW264.7细胞中C3的表达变化和活化情况。结果:成功建立了poly(I:C)联合LPS刺激诱导的急性肺损伤小鼠模型。联合刺激组小鼠肺脏病理损伤加重,肺泡融合和弥漫性损伤,大量炎症细胞浸润;其中中性粒细胞和间质巨噬细胞比例显著提高,肺泡巨噬细胞比例显著降低。联合刺激增加小鼠肺组织和RAW264.7细胞中补体C3的表达和酶解活化,而敲除ficolin可明显降低联合刺激诱导的C3活化,并减少间质巨噬细胞募集和肺泡巨噬细胞耗竭,改善急性肺损伤。结论:Ficolin可通过激活补体加重poly(I:C)联合LPS刺激介导的肺脏炎症和急性肺损伤,是重症肺炎潜在的治疗靶点。

Ficolin-3、TRF及hs-CRP联合检测在2型糖尿病早期诊断中的价值

目的检测2型糖尿病(T2DM)患者,T2DM前期人群及健康人群血清中纤维凝胶蛋白-3(Ficolin-3)、转铁蛋白(TRF)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,来探讨血清中Ficolin-3、TRF及hs-CRP水平与T2DM的关系.方法选择大连医科大学附属第一医院T2DM患者33例,T2DM前期组41(包括29例糖耐量减低者和12例空腹血糖受损者)及健康对照组30例,比较各组间Ficolin-3、TRF及hs-CRP的水平,分析3者与T2DM间的关系.结果 (1)血清Ficolin-3水平:在T2DM前期组(26.1±10.5)μg/m L及T2DM组(28.1±8.5)μg/m L均高于正常对照组(20.8±11.7μg/m L,P<0.05),T2DM前期组与T2DM组无显著性差异(P>0.05);(2)血清TRF水平:T2DM前期组(261.3±51.1)mg/d L明显高于正常对照组(236.5±31.9 mg/d L,P<0.05),T2DM组(242.0±57.7)mg/d L与正常对照组、T2DM组与T2DM前期组均无显著性差异(P>0.05);(3)血清hs-CRP水平:T2DM组(3.12±3.47)mg/L明显高于正常对照组(1.19±1.41)mg/L和T2DM前期组(1.70±1.97mg/L,P<0.05),T2DM前期组与正常对照组无显著性差异(P>0.05).结论血清Ficolin-3、TRF和hs-CRP的水平可以有助于2型糖尿病的早期诊断,对T2DM的早期预防及病情发展有一定的预测价值.

纤维胶凝蛋白(ficolin)在非特异性免疫中的作用

纤维胶凝蛋白(ficolin)是一组存在于人的不同组织中含有胶原样结构域和纤维蛋白原样结构域的糖蛋白。人血清中的Ficolin通过胶原样结构域与病原微生物表面的寡聚糖结合后,激活补体凝集素途径,并起调理作用,在非特异性免疫中起着重要作用。

Ficolin-A的克隆、蛋白表达和抗体的制备与鉴定

目的:克隆小鼠ficolin-A(mouse ficolin-A)基因,构建在真核及原核表达载体,并在大肠杆菌中表达和鉴定其蛋白,并制备其抗体,以进一步用于研究小鼠ficolin-A的功能。方法:用RT-PCR的方法从新生7 d的C57BL/6小鼠肝脏中运用GeneRacer kit扩增ficolin-A cDNA片段,并将该片段分别插入pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合,在IPTG的诱导下在大肠杆菌中表达。用GST-Sepharose 4B的柱子对表达的融合蛋白进行纯化,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。制备ficolin-A的多克隆抗体并对其效价进行测定。结果:成功地构建了pVAX-1-ficolin-A真核表达载体及pGEX-KG-ficolin-A原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致。并且成功制备了多克隆抗体。结论:成功地构建了重组表达载体pVAX-1-ficolin-A及pGEX-KG-ficolin-A,并在E.coliBL21中表达了ficolin-A蛋白,为下一步研究小鼠ficolin-A的功能奠定了基础。