建立基于fimY基因的LAMP技术检测食源性沙门菌

沙门菌是人类一种常见的食源性致病菌,沙门菌主要污染肉类、鱼、禽、奶、蛋等食品。食用了这些未煮透的污染食品是引起沙门菌食物中毒的最主要原因。研制能对食品中的沙门菌进行现场快速精准检测的试剂盒,对于保障人们的食品安全具有重要意义。本研究以沙门菌的fimY基因作为特异性的检测靶基因,建立一种可视化、低成本的环介导等温扩增技术,以快速检测食源性沙门菌。建立的LAMP方法具有良好的特异性,对肠出血性大肠杆菌O157、肠毒性大肠杆菌ETEC、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌等其他食源性致病菌和空白对照(水)的检测结果均为阴性。灵敏性检测结果表明,建立的LAMP检测沙门菌的灵敏度为3.8×10^(1)CFU/mL,而常规PCR检测沙门菌的灵敏度为3.8×10^(4)CFU/mL,LAMP法检测比常规PCR检测的灵敏度高1000倍。另外,采用建立的LAMP方法对18株鸡源和猪源的沙门菌分离株进行检测,结果均为阳性,与基于invA基因的常规PCR结果的一致。本研究中建立的LAMP检测方法为食源性沙门菌的检测提供一种可视化、灵敏、成本低的快速检测技术。

动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。

双重PCR检测肠炎沙门氏菌方法的建立

沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进行双重PCR扩增,结果显示22株沙门氏菌均出现与理论值大小497bp相符的属特异性条带,作为对照的3株大肠杆菌则未显示该条带,并且7株肠炎沙门氏菌均出现与理论值大小293bp相符的特异性条带。另外,敏感性试验结果显示肠炎沙门氏菌50336和鸡白痢沙门氏菌SP1的模板浓度分别为18ng和15ng时仍能清晰扩增出特异性条带。上述结果表明建立的PCR方法具有快速简便、灵敏性高、特异性强等特点,为公共卫生、食品安全、畜牧兽医及出入境安检等多部门检测和监测沙门氏菌提供了前提基础和技术保障。