青岛地区常见鱼类过敏原的鉴定及其交叉反应研究

选择青岛地区喜食的阿拉斯加狭鳕、蓝点马鲛、大黄鱼、真鲷、鲑、大菱鲆、鲤等7种鱼为研究对象,利用鱼类过敏患者血清,通过SDS-PAGE及免疫印迹方法对每种鱼的过敏原蛋白进行鉴定。利用兔抗鲅鱼小清蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA和抑制性ELISA等对7种鱼的小清蛋白之间的交叉反应进行探讨。结果表明,青岛地区居民鱼类过敏原主要为48～57、33～41、28及17 ku的蛋白,和传统公认的小清蛋白为主要过敏原的共识不同。而针对小清蛋白的交叉反应研究也表明,不同鱼类蛋白之间存在强烈的交叉反应。因此,虽然鱼类过敏原可能不同,但如果对以上7种鱼中的一种鱼过敏,最好不要食用其他任何一种鱼。

斑马鱼原肌球蛋白基因克隆表达及免疫学鉴定

克隆斑马鱼原肌球蛋白的基因并表达纯化出重组蛋白,对其免疫学特性进行鉴定。提取斑马鱼总RNA,采用RT-PCR克隆斑马鱼原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增斑马鱼原肌球蛋白基因的完整开放阅读框,连入载体pET-28a,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中通过IPTG诱导得到重组斑马鱼原肌球蛋白。重组蛋白经Ni 2+亲和层析柱纯化后进行Western-blot检测。获得斑马鱼原肌球蛋白基因,Western-blot结果显示重组蛋白具有良好的免疫活性。本研究成功克隆并表达了斑马鱼原肌球蛋白基因,经免疫学鉴定发现其具有过敏原性。

蛋白质组学在水产品品质与安全研究中的应用

蛋白质组学技术在水产品品质与安全研究中已有较多应用。本文介绍了蛋白质组学的研究途径,综述了蛋白质组学在水产品物种鉴定、过敏原检测、致病性和腐败性微生物的检测与鉴定、贮藏加工过程中品质变化机制研究等方面的应用进展,并对其发展方向和应用前景进行了展望。

鱼胶原蛋白的研究进展

为解决水产品开发利用过程中综合利用化程度低的问题,提高我国水产品尤其是鱼类加工过程的经济附加值,本文结合当前国内外对鱼类胶原蛋白的研究开发报道,旨在为鱼类胶原蛋白的开发及应用提供科学依据。文章概述了鱼胶原的分布、类型以及提取方法,介绍了鱼胶原蛋白的组成与结构,着重突出了其与陆源哺乳动物胶原蛋白的差异性;其次通过对鱼胶原蛋白作为过敏原的安全性的系统阐述,明确指出了鱼胶原蛋白下一步的研究方向;最后本文对鱼胶原蛋白在食品、生物医学、美容化妆品等领域的应用进行了综述。

实时荧光PCR法检测致敏原鱼成分的研究

探讨了采用实时荧光PCR技术检测食品中的致敏原鱼成分。结果表明:采用鱼管家基因16S rRNA基因的特异性检测引物和探针进行检测时,19种样品经实时荧光PCR检测,只有鱼类样品产生阳性荧光信号,其余样品均不产生荧光信号。灵敏度试验结果表明:该方法对致敏原鱼成分的检测灵敏度较高,可达到1 mg/kg,符合痕量检测要求。

四种淡水鱼致敏蛋白免疫原性研究

对常见的食物过敏原,草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、乌鳢(Ophicephalus argus)、鲇鱼(Silurus asotus)、花鲈(Lateolabrax japonicus)四种淡水鱼进行了特异性抗原的识别,通过coca’s缓冲液分别于四类鱼肌肉组织中提取蛋白粗提液,经SDS-PAGE分离出多种分子量不同的蛋白组分并对其进行分析,再通过Western-blotting识别四种淡水鱼过敏原研究其免疫原性。由SDS-PAGE电泳分别得到四种淡水鱼全蛋白电泳图,通过免疫印迹等方法发现草鱼与IgE结合的阳性带主要有4条(107、62、50、27ku),乌鳢与IgE结合的阳性带主要有6条(62、50、34、32、28、17ku),鲇鱼与IgE结合的阳性带主要有4条(62、50、39、37ku),花鲈与IgE结合的阳性带主要有6条(62、50、37、34、32、18ku)。

不同温度下鱼类食品过敏原免疫学特性分析

目的研究鱼类食品在生熟状态下的过敏原组分,分析其热稳定性过敏原。方法4种新鲜鱼类经不同温度处理后去鳞、内脏和鱼骨,在预冷丙酮中破碎,脱脂,Coca’s液提取其生熟总蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,考马斯亮蓝显色分析其总蛋白组成,用鱼过敏患者血清对不同温度条件下的鲩鱼总蛋白进行免疫学特征分析。结果SDS-PAGE显示,生熟鱼总蛋白提取物中均含有多种蛋白,经高温处理后熟鱼总蛋白组分相对减少。免疫印迹试验结果表明,加工温度、时间对鱼类食品过敏原有显著影响。结论鱼类食品中含有热稳定的过敏原,即使加工后仍具有致敏性。

大豆抗原蛋白的结构和功能及其对鱼类消化生理功能的影响

大豆抗原蛋白既是大豆的主要营养成分,又是大豆中的主要抗营养因子之一,同时也是制约大豆蛋白在食品或饲料工业中利用的关键因素。本文综述了大豆抗原蛋白的结构、功能及其对鱼类消化生理功能的影响,旨在为大豆蛋白的合理开发利用奠定基础。

牙鲆(Paralichthys olivaceus)中不同亚型小清蛋白的提纯与鉴定

以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为研究对象,以Tris、甘氨酸和二硫苏糖醇的混合溶液为提取液,加入不同量的硫酸铵分级纯化小清蛋白,应用免疫印迹法、酶联免疫法及质谱法进行鉴定。最终提纯得到3种不同分子质量的蛋白(PVⅠ、PVⅡ和PVⅢ),所得蛋白纯度大于90%,血清学实验证明其与小清蛋白特异性IgG及IgE抗体均有结合能力,质谱鉴定得到PVII和PVIII分子质量分别为12 151 Da和11 645 Da,pI值分别为5.14和4.69。该方法满足牙鲆小清蛋白提取纯化要求,得到的3种蛋白是牙鲆小清蛋白的不同亚型,且均具有过敏原性。

奶酪中乳酸菌的分离筛选及其对小清蛋白的降解性能初步评价

为筛选可降解鱼类主要过敏原小清蛋白(parvalbumin, PV)的乳酸菌,该研究以产蛋白酶作为初筛标准从奶酪中分离筛选获得8株乳酸菌,经16S rDNA测序鉴定为Lactobacillus plantarum 4株,Lactobacillus casei 2株,Enterococcus faecalis 2株。利用这8株乳酸菌对草鱼中提取富集的PV溶液进行孵育,SDS-PAGE分析发现Lactobacillus casei B-2和Lactobacillus plantarum B-17孵育后的PV含量显著减少,进一步研究这2株乳酸菌对PV免疫活性的影响作用,结果发现这2株菌孵育PV溶液36 h后,PV发生降解,其含量显著下降,且免疫活性分别下降了96.5%和84.8%。由此可见,这2株乳酸菌具有降低鱼类主要过敏原致敏性的潜在能力,为今后乳酸菌发酵鱼肉开发低致敏鱼肉制品提供了科学依据。

实时荧光PCR法测定婴幼儿辅助食品中过敏原鱼类成分

目的建立实时荧光PCR检法测定婴幼儿辅助食品中过敏原鱼类成分。方法通过改进的前处理方法,采用实时荧光PCR法,对45个样品进行检测,分别进行特异性、检出限以及适用性试验。结果用于特异性试验的18个样品中,只有鱼类出现特异性扩增;通过7个不同质量配比的鱼肉样品得出检出限低于0.01%;对市售20批样品进行检测,检测结果与样品标识相符。结论该方法快速、灵敏、准确,适用于婴幼儿辅助食品中过敏原鱼成分的检测。

鳜鱼致敏蛋白的识别及酶法水解的脱敏分析

试验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对鳜鱼蛋白提取液中不同分子质量的蛋白组分进行分离,在阳性血清池建立的基础上,运用转移电泳、免疫印迹以及免疫印迹抑制试验识别特异性吸附蛋白条带。进而采取不同来源的6种食品级蛋白酶对鳜鱼蛋白水解脱敏,将中性甲醛电位滴定法和间接酶联免疫吸附法测定的水解度和抗原降低率作为评判指标优选出最佳水解酶。最终得到分子质量为60、50、34 ku和17 ku的4条蛋白条带可以与IgE阳性结合,最佳水解酶为木瓜蛋白酶。