新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。

汉黄芩素通过NRF2/HO-1信号途径诱导大鼠CIA-FLS细胞铁死亡

目的:探讨汉黄芩素(WOG)通过核因子E2相关因子2(NRF2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号途径诱导胶原诱导性关节炎大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(大鼠CIA-FLS细胞)铁死亡的机制。方法:将大鼠CIA-FLS细胞分为:对照组、低、中、高剂量(25、50和100μmol/L)汉黄芩素组、铁死亡抑制剂(LIP-1)组、LIP-1+高剂量汉黄芩素组、HO-1激动剂钴原卟啉(COPP)组和COPP+高剂量汉黄芩素组,CCK-8法检测细胞活力;结晶紫染色法检测细胞形态;检测氧化应激标志物谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的含量,Western blot检测Kelch样ECH关联蛋白1(KEAP-1)、NRF2和HO-1蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,给予WOG处理后,大鼠CIA-FLS细胞活力显著下降(P<0.01),氧化应激水平显著上升(P<0.01),ROS含量显著增加(P<0.01),NRF2和HO-1蛋白表达水平显著下降(P<0.01),KEAP-1水平显著增加(P<0.01);与WOG组相比,LIP-1处理组的细胞活力显著上升(P<0.01),氧化应激水平显著下降(P<0.01),ROS含量显著减少(P<0.01);与WOG组相比,加入COPP后,NRF2和HO-1蛋白表达水平显著上升(P<0.01),KEAP-1水平显著下降(P<0.01)。结论:WOG能通过NRF2/HO-1信号途径,促进氧化应激来诱导大鼠CIA-FLS细胞铁死亡。

车用燃料电池质子交换膜研究进展

氢燃料电池汽车被认为是真正的环保新能源清洁动力汽车,质子交换膜作为其核心部分,它性能的好坏直接影响着燃料电池的性能与使用寿命。文章介绍了三类质子交换膜的研究情况,并提出静电纺丝技术能够通过控制材料形态来调整材料性能,在质子交换膜生产领域具有广阔的前景;发掘能够多方面提升质子交换膜性能的材料或者将多种填料复合改性将成为质子交换膜领域新的研究方向;为车用质子交换膜领域提供了新思路。

三丁基锡对正常人胚胎羊膜细胞凋亡的诱导作用

为了探讨三丁基锡(TBT,tributyltin)对正常人羊膜细胞FL(humanamnioticcells)凋亡的诱导作用,进行了流式细胞仪PIAnnexinⅤ双染色检测TBT对FL细胞凋亡的诱导作用,并采用荧光染料FITC标记的特异性的caspase3的抑制剂检测活细胞中caspase3的酶活性.实验结果表明,0、1、2、3、4μmol·L-1浓度的三丁基锡作用于FL细胞2h后,细胞凋亡率和细胞中caspase3酶活性都明显升高,且有良好的剂量效应关系.表明三丁基锡在一定浓度和暴露时间下能够诱导FL细胞的凋亡,而且在此过程中,caspase3起重要作用.

风湿宁胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响

目的:探讨风湿宁(FSN)胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响。方法:采用Real-time PCR和Western blot技术分别从基因和蛋白的角度来观察各组CIA-FLS细胞中P-JAK2、PSTAT3及其负反馈调节因子SOCS1和SOCS3的含量;采用Real-time PCR技术分别对各组CIA-FLS细胞中VEGF和RANKL的表达情况进行检测。结果:Tofacitinib含药血清+IL-6组、FSN含药血清+IL-6组CIAFLS细胞JAK2、STAT3的mRNA含量和蛋白表达都明显下降(P<0.05),该通路相关细胞因子VEGF和RANKLmRNA的含量也明显减少(P<0.05)。20%FSN含药血清+IL-6组CIA-FLS细胞SOCS3mRNA含量和蛋白表达上升(P<0.05),10%FSN含药血清+IL-6组中VEGF和RANKLmRNA的含量不同程度的减少(P<0.05)。结论:风湿宁胶囊含药血清可能通过对CIA-FLS细胞JAK2/STAT3信号通路的抑制作用进而影响了相关细胞因子VEGF和RANKL的表达,这也可能是风湿宁胶囊能够改善类风湿关节炎血管翳形成和骨破坏的机制之一。

风湿宁胶囊含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨风湿宁胶囊(FSN)含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测各组血清干预24、48、72 h后对CIA-FLS细胞增殖状态的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察各组血清干预48 h后对CIA-FLS细胞早期和晚期凋亡情况的影响。结果:CCK-8法结果表明,在24 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖无抑制作用;在48 h,20%FSN含药血清和10%FSN含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖都表现出不同程度的抑制。在72 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清对CIA-FLS细胞增殖均可见显著的抑制效果,其中20%风湿宁胶囊含药血清效果最好。Annexin V-FITC/PI双染检测结果表明,风湿宁胶囊含药血清各浓度(20%、10%和5%)组都不同程度地提高了细胞总凋亡率,其中20%风湿宁胶囊含药血清组对CIA-FLS细胞凋亡促进作用最强。结论:风湿宁胶囊含药血清对CIA-FLS细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一。

大气中不同粒径颗粒物诱导人羊膜FL细胞UDS的研究

本研究以诱导人羊膜细胞ＵＤＳ为指标，对太原市大气不同粒径的颗粒物提取液进行了致突变性检验，结果表明，不同粒径颗粒物的提取液均可产生一定的遗传毒性，尤以３．３μｍ以下的颗粒物的遗传毒性较强。

铬、汞、镉、镍四种重金属化合物对FL/P4501A1细胞酶活性的影响

利用不同浓度的重金属化合物溴化汞、三氯化铬、硫酸镉、氯化镍处理人羊膜ＦＬ／Ｐ４５０１Ａ１细胞，其半数抑制浓度（ＩＣ５０，ｍｇ／ｍｌ）分别为６．０２６０，３７．５２１３，２４．５４９１和４５．３８４５。结果表明：不同的重金属化合物对ＦＬ／Ｐ４５０１Ａ１细胞的毒性相差很大，溴化汞和硫酸镉的细胞毒性较大。ＦＬ／Ｐ４５０１Ａ１细胞带有Ｐ４５０１Ａ１基因，该基因产物为乙氧基异吩恶唑Ｏ—去乙基酶（ｅｔｈｏｘｙｒｅｓｏｒｕｆｉｎＯ－ｄｅｅｔｈｙｌａｓｅ，ＥＲＯＤ）。酶活性测定结果表明溴化汞、硫酸镉能抑制ＦＬ／１Ａ１细胞自发产生的ＥＲＯＤ活性；三氯化铬、溴化汞、氯化镍、硫酸镉能抑制去甲肾上腺素诱导ＦＬ／１Ａ１细胞产生的ＥＲＯＤ活性。Ｐ４５０１Ａ１酶能激活多环芳烃，溴化汞和硫酸镉可通过降低Ｐ４５０１Ａ１酶活性干扰多环芳烃的致癌作用。

用改良消减杂交筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中高表达基因

为了研究类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞 (fibroblast- like synovialcells,FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理 ,利用改良消减杂交法以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照 ,筛选 RA滑膜细胞中的高表达基因 .将得到的基因片段克隆入质粒载体 ,通过反向点杂交排除假阳性克隆后 ,将阳性克隆进行核酸序列分析 ,最后用 Northern杂交方法检测一些高表达基因在 RA和 OA病人滑膜细胞中的表达水平 .结果显示 ,共分离到 1 50个 RA高表达基因片段 ,其中长于 1 0 0 0 bp的片段占 8% (1 2 /1 50 ) ,长于 40 0 bp的片段占 36.7% (55/1 50 ) ,在大于 40 0 bp的片段中 ,假阳性率为 2 3.7% (1 3/55) .在测序的 1 8个片段中 ,已知基因有 1 2个 ,其中包括 IGF- 1结合蛋白 (IGFBP)特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B等 .新序列有 6个 ,其中两个序列分别与 Ring- box蛋白 1和 SON DNA结合蛋白同源 .对 IGFBP特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B基因的 Northern杂交分析显示 ,在 RA病人滑膜细胞中 ,这些基因的表达水平高于 OA病人滑膜细胞 .这些结果提示 ,这种改良消减杂交法是一种简便有效的分离差异表达基因的方法 ;IGF- 1结合蛋白特异性丝氨酸蛋白酶。

人Flt3配体基因的克隆及其在CHO细胞中的表达

目的克隆人Flt3配体(Flt3 LIg and,FL),并在CHO细胞中进行表达。方法从健康人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR技术,扩增Flt3配体胞外区cDNA功能性片段,经DNA测序证实后,将得到的片段基因插入pcDNA3.0表达载体,构建了pcDNA3.0-FL真核表达载体;将重组质粒pcDNA3.0-FL转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞克隆,扩大培养,提取细胞总蛋白,用SDS-PAGE分离并Western blotting检测到在相对分子质量约24 000处有一显色条带。结果FL胞外区cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3.0中并在CHO细胞中成功表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.0-FL并在CHO细胞中成功表达,为FL的相关研究和应用开发奠定了基础。

四种重金属化合物不同条件下对EROD诱导活性的影响

目的：研究４种重金属化合物对Ｐ４５０１Ａ１基因产物乙氧基－９－羟基异吩唑酮－邻－去乙基酶（ＥＲＯＤ）诱导活性的影响。方法：４种重金属化合物及诱导物Ｌ－去甲肾上腺素不同时间与ＦＬ／Ｐ４５０１Ａ１细胞作用，通过测定ＥＲＯＤ反应终产物乙氧基－９－羟基异吩唑酮荧光强度来了解ＥＲＯＤ活性。结果：ＦＬ细胞的ＥＲＯＤ诱导活性较低，ＦＬ／Ｐ４５０１Ａ１细胞的ＥＲＯＤ诱导活性较高；重金属化合物与诱导物同时加入时可抑制ＥＲＯＤ的诱导活性；重金属化合物对预诱导产生的ＥＲＯＤ活性有抑制作用；重金属化合物处理后的ＦＬ／Ｐ４５０１Ａ１细胞有较高的ＥＲＯＤ诱导活性。

392种植物提取成分的抗病毒活性研究

目的 从植物中寻找具有抗病毒的活性成分。方法 采用CPE法对多种植物提取物进行随机筛选。结果 从 392种植物中找到了 3种含有抗病毒活性成分的植物。结论 对这 3种植物的活性成分进行追踪 ,有望开发出抗病毒新药。

FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应

目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。

生物膜中不同定植阶段细菌间的相互作用及模型

牙菌斑生物膜是引发口腔龋病和牙周病的重要因素。在牙菌斑生物膜形成过程中,中晚期定植菌并非直接附着于牙面,而是依赖于识别早期定植菌表面的多糖或蛋白受体,因而早期和中晚期定植菌之间的相互作用对生物膜的形成至关重要。近年来,体外生物膜模型被广泛应用于细菌间相互作用的研究,本文就以生物膜为依托的细菌间相互作用及体外生物膜模型的应用作一综述。

奇可力多糖治疗脂肪肝作用的研究

目的:观察奇可力多糖对脂肪肝大鼠的治疗效果,探讨其药效学机制。方法:采用高脂饮食和白酒灌胃,经8w建立大鼠脂肪肝模型,用奇可力多糖治疗4w,并与东宝肝泰进行对比,观测,血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG);血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT);肝脂—TG、TC;肝微粒体后上清心肌黄酶(DTD)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)。结论:奇可力多糖治疗脂肪肝的效应及药效学机制为:调整脂质代谢,降低血清甘油三脂和胆固醇;减轻肝细胞脂肪变性;促进肝细胞功能恢复,有效治疗脂肪性肝炎;抗脂质过氧化,提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化产物含量。

女贞子血清药理对Hela细胞增殖抑制的实验研究

目的 :观察女贞子血清药理对宫颈癌 Hela细胞增殖抑制作用。方法 :应用血清药理学方法研究中药的体外效应 ,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测含女贞子兔血清对 Hela细胞的抑制效应 ,并采用末端标记法 (TU NEL )对凋亡细胞进行定量检测。结果 :中药兔血清对 Hela检测结果为女贞子血清促进 Hela细胞凋亡。结论 :女贞子血清药理抑制 Hela细胞增殖 。

正常人周围神经内膜中的纤维性长间距体及神经束膜细胞的超微结构

本文报道在电镜下观察了正常人腹壁神经小分支的神经束膜细胞的超微结构,并在神经内膜间质中发现了纤维性长间距体(FLS)。1.2~5层神经束膜细胞紧密地包绕着神经束。束膜细胞呈扁平样排列,胞质内有丰富的微丝和吞饮小泡,基膜明显而连续。紧贴其外的和神经内膜中的成纤维细胞均无基膜。两相贴的束膜细胞之间可见缝管连接和丰富的桥粒,也可见胶原纤维。神经内膜间质中胶原原纤维细,有FLS体存在;而束膜外侧的胶原原纤维较粗,未见FLS体。2.多数FLS体与无髓神经纤维的Schwann细胞基膜相连,个别处周围为一般胶原原纤维,未见基膜;有髓神经纤维的Schwann细胞处未见FLS体。纵切面上,多数FLS体呈纺锤状,大小不等,其长轴与相邻胶原原纤维的长轴平行,有时可见两者相互延续移行。偶见FLS体呈桥样架于两Schwann细胞之间,FLS体的暗带与两侧Schwann细胞的基膜相延续。还见2~3个FLS体并为一体,但横纹错开。FLS体的斜断面近似长方形,也呈横纹样结构,与纵断面没有很大区别。FLS体的横纹周期长约133nm,暗带约53nm,主要由电子较密的颗粒状物构成;明带约80nm,由方向大致相同的微丝网构成;横纹周期中无细横纹存在。本文并对神经束膜细胞可能的作用、FLS体与基膜的关系、FLS体的横纹周期问题进行了讨论。

低浓度MNNG诱发FL细胞应答反应的蛋白质组学研究

目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质组成分 ,银染染色后用相应的分析软件分析数字化的凝胶图像 ,找出在 MN-NG处理后表达有差异的蛋白斑点 ,用基质辅助的激光解吸 -飞行时间质谱 (MAL DI- TOF)鉴定。结果 :在 MNNG处理后有 6 0多个蛋白斑点出现质和量的变化 ,其中 18个蛋白斑点只能在 MNNG处理的细胞中检测到 ,13个蛋白斑点则在 MNNG处理后消失 ;同时检测到 30个蛋白斑点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点表达升高 ,14个点则表达降低。通过数据库的检索 ,初步的鉴定了一批结构和功能各异的蛋白。结论 :在低浓度烷化剂攻击后 ,FL细胞中的蛋白表达谱发生了显著的变化。

IL-32γ对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖与细胞周期的影响

目的:研究IL-32γ对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与细胞周期的影响及机制。方法:体外培养活动性类风湿关节炎和骨关节炎(OA)患者成纤维样滑膜细胞并以IL-32γ处理,应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western印迹方法检测cyclinD1及NF-κBp65蛋白含量;免疫细胞化学染色法检测PCNA表达的变化。结果:IL-32γ对OA-FLS增殖没有影响;不同浓度的IL-32γ(10～100 ng/ml)在72～120小时范围内,浓度和时间依赖性促进RA-FLS增殖;100 ng/ml的IL-32γ作用RA-FLS 48小时后促进了细胞周期由G1期向S期,进而G2/M期转化,同时上调了cyclin D1、NF-κBp65和PCNA的蛋白表达水平。结论:IL-32γ可促进RA-FLS增殖和加速细胞周期转化。上调NF-κBp65和cyclin D1的表达可能是其作用机制之一。

新加良附方对移植性人胃癌细胞F／FL表达的影响

目的观察新加良附方对移植性人胃癌细胞（BGC-823）F／FL的表达影响。方法建立移植性人胃癌动物模型，并将动物模型随机分为胃癌模型对照组、西药5-FU对照组及新加良附方高、中、低剂量组，共5组。新加良附方大、中、小剂量组给药量分别为10g/kg、5g／kg和2．5g／kg；5-FU组给药剂量为17mg／kg；模型组给予等量无菌生理盐水。连续给药、给水15d处死模型小鼠分离肿瘤，瘤块称重，石蜡包埋，并将肿瘤组织切片，免疫组化法检测F／FL表达。结果新加良附方高剂量组能上调肿瘤组织F蛋白表达，下调FL蛋白表达，与模型对照组比较，有统计学意义（P〈0．05）；新加良附方中剂量组能下调FL蛋白表达，与模型组比较，有统计学意义（P〈0．05）。结论新加良附方能通过启动F／FL介导的受体依赖型细胞凋亡途径，上调肿瘤组织F蛋白表达，下调FL蛋白表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。