蛛丝蛋白基因在大肠杆菌中表达研究

利用大腹园蛛基因组文库筛选获得一段693 bp基因片段,经分析该段基因处于鞭毛状丝基因重复区域,且其中包含了一个完整的重复框架。通过基因密码子优化,在其3′和5′端分别融合蛋白质亲和层析标签,克隆于pET30LIC表达载体中,在不同的大肠杆菌中进行表达试验。实验结果显示：经过密码子优化,融合目的蛋白基因在BL21（DE3）中得到了高效表达,产量达到25-30mg/L,纯化产物纯度达90%以上。SDS-PAGE和W estern-b lotting检测目的融合蛋白均与预期蛋白大小一致。

大腹园蛛鞭毛样丝蛋白cDNA克隆

应用RT -PCR技术 ,从大腹圆蛛 (Araneusventricosus)壶腹腺中扩增出鞭毛样丝蛋白基因 (flagelli formsilkproteingene) ,经 1 5 %琼脂糖凝胶电泳分离 ,WizardPCRPrepsDNAPurificationSystem回收后 ,将其克隆在pGEM -T载体中 ,经限制性核酸内切酶鉴定和核苷酸序列分析证实 ,构建的重组质粒pSF1中含有蜘蛛鞭毛样丝蛋白基因 ,且含有