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Molecular cloning and functional identification of an apple flagellin receptor MdFLS2 gene 被引量:1
1
作者 QI Chen-hui ZHAO Xian-yan +4 位作者 JIANG Han LIU Hai-tao WANG Yong-xu HU Da-gang HAO Yu-jin 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2018年第12期2694-2703,共10页
The leucine-rich repeat receptor kinase flagellin-sensing 2 gene(MdFLS2; Gene ID: MDP0000254112) was cloned from Royal Gala apple(Malus×domestica Borkh.). This gene contained a complete open reading frame of 3 47... The leucine-rich repeat receptor kinase flagellin-sensing 2 gene(MdFLS2; Gene ID: MDP0000254112) was cloned from Royal Gala apple(Malus×domestica Borkh.). This gene contained a complete open reading frame of 3 474 bp that encoded 1 158 amino acids. The phylogenetic tree indicated that Prunus persica FLS2 exhibited the highest sequence similarity to MdFLS2. The PlantCare database suggests that the promoter sequence of MdFLS2 contains several typical cis-acting elements, including ethylene-, gibberellin-, salicylic acid-, and drought-responsive elements. Quantitative real-time PCR analysis showed that MdFLS2 was widely expressed in the different tissues of the apple and most highly expressed in the leaves. Furthermore, MdFLS2 was significantly induced by the flagellin elicitor peptide flg22. Treatment of the apple seedling leaves with flg22 resulted in an increase in leaf callose levels with increased treatment duration. An increase in the production of Oalong with the expression of disease-related genes was also observed. An oxidative burst was detected in the treated seedlings, but not in the control seedlings, indicating that flg22 had stimulated the expression of the MdFLS2 gene and its downstream target genes. Furthermore, the ectopic expression of MdFLS2 complemented the function of the Arabidopsis fls2 mutant and conferred enhanced flg22 tolerance to the transgenic Arabidopsis, suggesting that MdFLS2 acts as a positive regulator in the response to pathogens in apple. 展开更多
关键词 APPLE flagellin receptor flagellin elicitor peptide MdFLS2 pathogen infection
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Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达研究 被引量:4
2
作者 杨昱 徐剑铖 +1 位作者 钱桂生 胡明冬 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期416-418,共3页
目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠ALI中的作用。方法从大肠杆菌ATCC25922中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。108只SD大鼠随机分为正常对照组(n=36)、致伤1组(n=... 目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠ALI中的作用。方法从大肠杆菌ATCC25922中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。108只SD大鼠随机分为正常对照组(n=36)、致伤1组(n=36)和致伤2组(n=36)。经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立大鼠ALI模型。每组分别在6个时相点用原位杂交法检测大鼠肺组织中TLR5mRNA的表达,并观察动脉血气分析和肺病理改变。结果从大肠杆菌ATCC25922中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65kD。静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型。从致伤后1h开始,鞭毛蛋白致肺损伤大鼠肺组织中TLR5mRNA表达增加,并随时间推移和鞭毛蛋白剂量增加而表达增多。各致伤组大鼠动脉血氧分压降低,肺组织出现肺间质、肺泡水肿和炎性细胞浸润等病理改变。结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠ALI;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程。 展开更多
关键词 TOLL样受体5 鞭毛蛋白 急性肺损伤
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芍药苷通过抑制TLR5表达及T细胞活化减轻葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎 被引量:10
3
作者 王小静 罗霞 +3 位作者 赵忠正 罗爽 陈津岩 周联 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期673-679,共7页
目的探究芍药苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、600 mg/(kg·d)美沙拉嗪处理组、(12.5、25、50)mg/(kg·d)芍药苷处理组,每组10只。除正常组外,... 目的探究芍药苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、600 mg/(kg·d)美沙拉嗪处理组、(12.5、25、50)mg/(kg·d)芍药苷处理组,每组10只。除正常组外,其他组给予30 g/L DSS溶液造模5 d,同时连续灌胃给药10 d,正常组与模型组给予等量的蒸馏水。每天观察小鼠体质量、粪便性状和便血情况,评分并计算疾病活动指数(DAI);HE染色观察结肠组织变化,ELISA检测血清鞭毛蛋白(flagellin)抗体、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western blot法检测小鼠结肠组织Toll样受体5(TLR5)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κBp65(NF-κBp65)蛋白水平;流式细胞术检测肠系膜淋巴结的淋巴细胞活化情况。结果与正常组相比,模型组小鼠DAI评分显著升高,结肠长度明显缩短;黏膜上皮、肠腺等结构消失;血清中鞭毛蛋白抗体、IL-6和TNF-α含量升高;结肠组织TLR5、MyD88、NF-κBp65蛋白表达明显增加;肠系膜淋巴结T淋巴细胞活化增加。与模型组比较,美沙拉嗪与各剂量芍药苷组的上述症状均得到缓解。结论芍药苷通过抑制TLR5的表达以及T细胞活化,减轻小鼠溃疡性结肠炎。 展开更多
关键词 芍药苷 溃疡性结肠炎 Toll样受体5(TLR5) 核因子κBp65(NF-κBp65) T细胞活化
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脓毒症患者外周血鞭毛蛋白含量和单个核细胞TLR5 mRNA表达的测定及其意义 被引量:4
4
作者 刘英新 徐剑铖 张金花 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期148-150,共3页
目的通过检测脓毒症患者外周血鞭毛蛋白的含量及单个核细胞Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达,进一步探讨脓毒症致急性肺损伤(ALI)的发病机制。方法选取经检验科体液镜检或培养证实为G-杆菌所致脓毒症患者(G-菌组)26例,G+球菌所致脓毒症患者... 目的通过检测脓毒症患者外周血鞭毛蛋白的含量及单个核细胞Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达,进一步探讨脓毒症致急性肺损伤(ALI)的发病机制。方法选取经检验科体液镜检或培养证实为G-杆菌所致脓毒症患者(G-菌组)26例,G+球菌所致脓毒症患者(G+菌组)15例,正常对照组为健康人15例。采用ELISA法检测外周血鞭毛蛋白的含量。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,半定量RT-PCR法检测TLR5mRNA表达水平。结果G+菌组、正常对照组的外周血中未检测到鞭毛蛋白,G-菌组的外周血鞭毛蛋白的含量为6.636±5.147ng/ml;G-菌组TLR mRNA表达水平较G+菌组、正常对照组显著升高(P<0.01),G+菌组与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论鞭毛蛋白可能通过TLR5介导参与了ALI的发生、发展。 展开更多
关键词 脓毒症 鞭毛蛋白 TOLL样受体5 急性肺损伤
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细菌鞭毛蛋白作为佐剂的研究进展 被引量:3
5
作者 宋丽 郭亚鑫 +3 位作者 徐慧 熊丹 潘志明 焦新安 《动物医学进展》 北大核心 2015年第4期92-95,共4页
细菌鞭毛蛋白作为Toll样受体5(TLR5)或NOD样受体C4(NLRC4)的配体,其结构决定了其既有抗原性又具有佐剂效应。将细菌鞭毛蛋白与外源抗原混合或融合表达,已获得多种有效的候选疫苗。细菌鞭毛蛋白佐剂效应主要是通过TLR5和NLRC4信号途径协... 细菌鞭毛蛋白作为Toll样受体5(TLR5)或NOD样受体C4(NLRC4)的配体,其结构决定了其既有抗原性又具有佐剂效应。将细菌鞭毛蛋白与外源抗原混合或融合表达,已获得多种有效的候选疫苗。细菌鞭毛蛋白佐剂效应主要是通过TLR5和NLRC4信号途径协同实现的。TLR5位于细胞表面,可触发炎性因子、趋化因子和Ⅰ型干扰素的分泌,启动天然免疫应答。NLRC4是细胞质中的模式识别受体,可识别细胞质中的多种配体并诱导相应免疫应答。另外,细菌鞭毛蛋白能募集T淋巴细胞和B淋巴细胞至次级淋巴器官,促进DCs和T淋巴细胞的活化。细菌鞭毛蛋白的可塑性将会使得以细菌鞭毛蛋白为基础的疫苗成为当前和未来研究的热点。 展开更多
关键词 鞭毛蛋白 佐剂 TOLL样受体5 NOD样受体C4 疫苗
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SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的H292细胞TLR5表达的影响(英文)
6
作者 吴学玲 赵云峰 +1 位作者 张椿 钱桂生 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期701-703,共3页
目的通过上调SIGIRR在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的Toll样受体5(TLR5)表达的影响。方法实验设以下6组:H292组(未给予任何处理的H292细胞)、eH292组(转染空质粒pEGFP-N1的细胞)、sH292组(转染SIGIRR-EGFP真... 目的通过上调SIGIRR在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的Toll样受体5(TLR5)表达的影响。方法实验设以下6组:H292组(未给予任何处理的H292细胞)、eH292组(转染空质粒pEGFP-N1的细胞)、sH292组(转染SIGIRR-EGFP真核表达质粒的细胞) ,另设加入鞭毛蛋白(终浓度0.2μg/ ml)的上述各组细胞,分别命名为FH292组、FeH292组和FsH292组。构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,脂质体转染法转染细胞,24h后用荧光显微镜观察融合蛋白的表达情况。Western blotting检测TLR5蛋白表达,ELISA法测定细胞上清中TNF-α浓度。结果转染重组载体的H292细胞可表达SIGIRR-EGFP融和蛋白,其主要分布于细胞质。通过对TLR5蛋白条带的光密度进行观察发现,FH292组(8.06±1.53)较H292组(1.71±0.12)、FeH292组(7.32±0.99)较eH292组(2.32±0.13)、FsH292组(7.01±0.83)较sH292组(2.01±0.07)TLR5蛋白表达明显增加(P<0.01)。FH292组TNF-α浓度(114.06±10.34)较H292组(43.52±2.84)明显增加,而FsH292组TNF-α浓度(69.56±11.23)较FeH292组(117.76±9.07)显著下降(P<0.01)。结论 SIGIRR的表达上调可抑制鞭毛蛋白诱导的H292细胞中TNF-α的产生,对TLR5表达无影响。SIGIRR在该信号通路中发挥了"刹车"作用,但该作用并不是由TLR5介导的。 展开更多
关键词 Tir8蛋白 小鼠 TOLL样受体5 上皮细胞 鞭毛蛋白 肿瘤坏死因子α
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Toll样受体5和鞭毛蛋白的相互作用影响宿主区分病原菌和益生菌(英文) 被引量:9
7
作者 罗佳 李薇 +2 位作者 段云峰 王沥 金锋 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1368-1375,共8页
【目的】大量的证据表明机体正常的免疫活动在很大程度上依赖于免疫系统和肠道菌群的相互作用,具体表现为免疫系统对病原菌进行免疫清除而对益生菌耐受。其中,免疫系统的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)和来自肠道菌群的微生物相... 【目的】大量的证据表明机体正常的免疫活动在很大程度上依赖于免疫系统和肠道菌群的相互作用,具体表现为免疫系统对病原菌进行免疫清除而对益生菌耐受。其中,免疫系统的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)和来自肠道菌群的微生物相关的分子模型(Microorganism associated molecular patterns,MAMPs)被认为在宿主免疫系统对病原菌和益生菌的区分中发挥了重要作用,因为TLRs对MAMPs的识别能够激活先天性和获得性免疫反应。在TLRs对MAMPs的识别中,只有TLR5对细菌鞭毛蛋白的识别是基于蛋白-蛋白的相互作用,比较容易对其结合方式进行研究。因此,我们研究的主要目的就是要确定TLR5与鞭毛蛋白的相互作用是如何影响宿主区分病原菌和益生菌的。【方法】构建了多种肠道细菌(包括益生菌和病原菌)鞭毛蛋白的系统发育树,并比对了鞭毛蛋白的TLR5识别序列。【结果】发现病原菌和益生菌的鞭毛蛋白序列有所不同,尤其是TLR5结合并识别的鞭毛蛋白位点。【结论】病原菌和益生菌不同的鞭毛蛋白识别区域可能是鞭毛细菌适应TLR5识别下生存的结果,据此宿主能够对病原菌和益生菌进行区分。此外,相关研究表明TLRs在肠上皮细胞的分布具有基底侧和顶端的两极性,能够分别引发对病原菌的免疫反应和对益生菌的免疫耐受,从而抵御病原菌的入侵感染、与益生菌和平共处。鞭毛蛋白和TLR5蛋白的相互作用反映了肠道菌群和免疫系统在分子层面的相互作用和共同进化,是宿主区分病原菌和益生菌的分子机制之一。 展开更多
关键词 宿主-肠道菌群相互作用 鞭毛蛋白 TOLL样受体5 系统发育树 蛋白序列比对
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Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达及其研究 被引量:1
8
作者 杨昱 徐剑铖 +1 位作者 钱桂生 胡明冬 《中华肺部疾病杂志(电子版)》 CAS 2007年第1期52-55,共4页
目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达和NF-κB活性变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的作用及其信号转导途径。方法从大肠杆菌中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。大鼠经尾静脉注射鞭毛蛋白以... 目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达和NF-κB活性变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的作用及其信号转导途径。方法从大肠杆菌中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。大鼠经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立急性肺损伤(ALI)模型。原位杂交法和核酸电泳迁移率实验(EMSA)分别检测鞭毛蛋白致ALI大鼠肺组织中TLR5mRNA表达及NF-κB活性。结果从大肠杆菌中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65 kD。静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型。在静脉注射鞭毛蛋白复制大鼠ALI模型过程中,随着鞭毛蛋白剂量增加及其作用时间的延长,肺组织TLR5的表达逐渐增多,NF-κB活性增强。结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠急性肺损伤;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程;NF-κB信号转导通路可能在鞭毛蛋白诱导大鼠ALI的过程中发挥着作用。 展开更多
关键词 TOLL 样受体5 鞭毛蛋白 急性肺损伤 核因子-ΚB
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白细胞介素-7受体α联合细菌鞭毛蛋白对异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病作用的初步探讨 被引量:1
9
作者 卫芬 马梁明 +3 位作者 任连生 朱镭 张华屏 郭慧敏 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2014年第2期92-95,99,共5页
目的 分析白细胞介素(IL)-7受体α(IL-7Rα)、细菌鞭毛蛋白单用及联合作用于小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的疗效,探讨其可能机制.方法 以BALB/C(H-2d)雌性小鼠为受鼠,均接受9 Gy 60Co全身照射,取C57BL/6... 目的 分析白细胞介素(IL)-7受体α(IL-7Rα)、细菌鞭毛蛋白单用及联合作用于小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的疗效,探讨其可能机制.方法 以BALB/C(H-2d)雌性小鼠为受鼠,均接受9 Gy 60Co全身照射,取C57BL/6(H-2b)供鼠骨髓细胞1×107个和脾细胞2×107个经尾静脉输注给受鼠.将受鼠分为单纯照射移植组(A组)、IL-7Rα干预组(B组)、细菌鞭毛蛋白干预组(C组)、IL-7Rα联合细菌鞭毛蛋白干预组(D组),每组6只,观察受鼠的症状、体征、生存时间及造血功能恢复情况.结果 A组小鼠生存期为(22.5±2.30)d,30d生存率为50.0%(3/6), 、且出现明显的倦怠、食欲缺乏、脱毛、弓背等aGVHD表现;B组小鼠生存期为(25.83±3.49)d,30 d生存率为33.3%(2/6),aGVHD表现较A组轻;C组小鼠生存期为(26.33±3.52)d,30 d生存率为33.3%(2/6),亦出现aGVHD表现,程度同B组;D组小鼠生存期为(30.17±2.86)d,30 d生存率为66.7%(4/6),aGVHD表现较前3组轻.4组小鼠外周血白细胞计数均于移植后第7天降至最低,后逐渐恢复,A组较3组干预组恢复慢,B、C两组移植后第14、21、28、30天外周血恢复比较,差异均无统计学意义(均P> 0.05);D组小鼠外周血较B、C组恢复快,差异均有统计学意义(均P< 0.05).4组小鼠移植后第2周CD3+T细胞比例均明显下降,第3周开始逐渐上升,与A组比较,B、C、D3组小鼠CD3+T细胞比例上升明显,B、C两组移植后第2、3、4周比较,差异均无统计学意义(均P> 0.05);D组小鼠较B、C组小鼠T细胞亚群CD3+T细胞恢复快(均P<0.05).结论 通过全身照射能成功建立aGVHD小鼠模型;外源性IL-7Rα、细菌鞭毛蛋白均可减轻aGVHD的发生,两者单用无明显差异,二者联合干预aGVHD小鼠模型与单一干预比较,aGVHD发生更轻,造血恢复会更快. 展开更多
关键词 骨髓移植 移植物抗宿主病 疾病模型 动物 白细胞介素7受体α亚单位 鞭毛蛋白
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^(125)I-rFlic及^(125)I-rFlicΔ180-400的制备及其在同种移植排斥监测中的作用 被引量:2
10
作者 薛莹 张超 +2 位作者 梁婷 宋静 侯桂华 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第10期34-39,共6页
目的探讨放射性碘125标记基因重组鞭毛蛋白(^(125)I-rFlic)及其片段(^(125)I-rFlicΔ180-400)在同种移植模型中的生物学分布及靶向性。方法用1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯基甘脲(Iodogen)碘化标记rFlic及rFlicΔ180-400,分析标记率及稳定... 目的探讨放射性碘125标记基因重组鞭毛蛋白(^(125)I-rFlic)及其片段(^(125)I-rFlicΔ180-400)在同种移植模型中的生物学分布及靶向性。方法用1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯基甘脲(Iodogen)碘化标记rFlic及rFlicΔ180-400,分析标记率及稳定性,进行放射性配基结合分析;构建小鼠同种/同系皮肤移植模型,于术后第8天尾静脉注射标记物,分析生物学分布和药代动力学特征,进行全身磷屏自显影显像。结果成功制备^(125)I-rFlic及rFlicΔ180-400,且具有较好的体外稳定性;^(125)I-rFlicΔ180-400对移植受体脾细胞亲和力更高。生物学分布结果显示,与^(125)I-rFlic组相比,^(125)I-rFlicΔ180-400注射组24 h的移植皮片/对侧正常皮片(T/NT)明显升高,P=0.014 8。药代动力学结果表明,与^(125)I-rFlic相比,^(125)I-rFlicΔ180-400代谢更快。全身磷屏自显影显像显示,注射后6 h的同种移植皮片放射性浓聚较1 h更明显;与^(125)I-rFlic组相比,^(125)I-rFlicΔ180-400组移植皮片显像更加清晰。注射后24 h两组均可得到清晰移植皮片显像。结论^(125)I-rFlic与^(125)I-rFlicΔ180-400在移植皮片处高度特异性浓聚,可成功显示同种移植急性排斥,而后者比前者拥有更快的代谢率和更快的特异性浓聚。 展开更多
关键词 放射性碘 鞭毛蛋白 TOLL样受体5 同种移植急性排斥
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^(131)I-rFliC的制备及乳腺癌荷瘤鼠体内生物学分布特征
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作者 杨欢 梁婷 +3 位作者 张超 宋静 郝静 侯桂华 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第12期31-36,共6页
目的探讨放射性碘131(131I)标记基因重组鞭毛蛋白(rFliC)在乳腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布特征及意义。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫荧光检测人乳腺腺癌细胞系(MCF-7)中rFliC的受体TLR5的表达;四... 目的探讨放射性碘131(131I)标记基因重组鞭毛蛋白(rFliC)在乳腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布特征及意义。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫荧光检测人乳腺腺癌细胞系(MCF-7)中rFliC的受体TLR5的表达;四氯二苯基苷脲(Iodogen)法131I标记rFliC,检测其放射化学纯度、稳定性、细胞摄取状况;制备MCF-7荷瘤鼠,注射131I-rFliC后,观察其生物学分布及肿瘤靶向性。结果①MCF-7表达TLR5的mRNA及蛋白;随着rFliC浓度的增加,TLR5 mRNA及蛋白表达逐渐减弱;②131I-rFliC标记率达95.19%;放射化学纯度为96.46%;在血清中稳定性高,可被MCF-7稳定摄取;③131I-iFliC主要经肝肾代谢,肿瘤靶向性明显,24 h靶/肌肉(T/M)放射性比值为7.09,可获得清晰放射自显影像。结论131I-rFliC肿瘤靶向明显,有望作为一种新型分子探针监测乳腺癌的发生发展。 展开更多
关键词 鞭毛蛋白 TOLL样受体5 放射性碘标记 体内分布 乳腺肿瘤
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鞭毛蛋白活化TLR5信号途径对于SPC-A-1细胞生物学行为的影响
12
作者 周辉 马安迪 +5 位作者 文亦戈 李芳 罗媚 罗永忠 易青 陈建华 《中国医师杂志》 CAS 2015年第10期1485-1490,共6页
目的 探讨外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5后,对于SPC-A-1细胞生物学行为的影响.方法 选用SPC-A-1细胞作为研究对象,鞭毛蛋白作用浓度为0.1μg/ml.构建TLR5-shRNA,并转染SPC-A-1细胞.实验分为四组:对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5... 目的 探讨外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5后,对于SPC-A-1细胞生物学行为的影响.方法 选用SPC-A-1细胞作为研究对象,鞭毛蛋白作用浓度为0.1μg/ml.构建TLR5-shRNA,并转染SPC-A-1细胞.实验分为四组:对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+ Flagellin组.用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)在0、24、48、72 h检测细胞增殖情况,在48 h分别用TUNEL法检测细胞凋亡,Transwell细胞侵袭实验研究细胞侵袭能力的影响,平板划线培养实验研究细胞迁移能力的影响,细胞集落形成实验研究细胞克隆形成能力.结果 (1)于0、24、48、72 h在570 nm波长处检测各组细胞的光密度值,结果显示,在同一时间点,Flagellin组与其它三组相比,细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),TLR5-shRNA+ Flagellin组与对照组和TLR5-shRNA组相比,细胞增殖无明显影响(P>0.05).(2)对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+ Flagellin组的细胞凋亡率分别为(14.75 ±0.072)%、(15.09 ±0.053)%、(21.63 ±0.047)%、(14.98 ±0.036)%.与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+ Flagellin组相比,Flagellin组细胞凋亡率明显增加(P<0.05).(3)对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+ Flagellin组穿膜细胞数分别为39.55±2.31、42.78±3.52、18.75±3.77和38.43±2.98.与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+ Flagellin组相比,Flagellin组的细胞其侵袭能力明显受到抑制(P<0.01),而对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+ Flagellin组两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(4)与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA+ Flagellin组相比,Flagellin刺激48 h后,Flagellin组细胞的迁移能力显著下降(P<0.05),而与对照组、TLR5-shRNA组相比,TLR5-shRNA+ Flagellin组细胞的迁移能力无明显改变(P>0.05).(5)对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA+ Flagellin组细胞集落形成率分别为(40.37±3.88)%、(39.88±2.49)%、(13.29±3.76)%、(38.81±4.11)%.与对照组、TLR5-shR-NA组和TLR5-shRNA+ Flagellin组相比,Flagellin组细胞集落形成率显著减少(P<0.01),与对照组、TLR5-shRNA组相比,TLR5-shRNA+ Flagellin组细胞集落率差异无统计学意义(P>0.05).结论 外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5信号通路后,可以抑制SPC-A-1细胞的增殖、转移、侵袭,促进其凋亡,可以作为潜在的治疗靶点. 展开更多
关键词 Toll样受体5/药物作用 鞭毛蛋白/药理学 信号传导 肺肿瘤/药物疗法
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鞭毛蛋白衍生多肽CBLB502免疫反应对其抗辐射作用的影响
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作者 段君昭 王磊 +1 位作者 詹轶群 葛常辉 《军事医学》 CAS 2021年第12期891-895,共5页
目的 Toll样受体5(TLR5)配体鞭毛蛋白衍生多肽CBLB502,具有良好的辐射防护作用,但其本身具有一定的免疫激活作用。该文拟研究CBLB502的免疫原性对其抗辐射药效的影响。方法应用ELISA方法检测正常人群中CBLB502的免疫原性反应,通过CBLB50... 目的 Toll样受体5(TLR5)配体鞭毛蛋白衍生多肽CBLB502,具有良好的辐射防护作用,但其本身具有一定的免疫激活作用。该文拟研究CBLB502的免疫原性对其抗辐射药效的影响。方法应用ELISA方法检测正常人群中CBLB502的免疫原性反应,通过CBLB502对小鼠的迟发型超敏反应和溶血空斑实验,观察多次免疫小鼠对CBLB502的免疫反应以及对其抗辐射活性的影响。结果约4.5%正常人对CBLB502具有较高反应性,CBLB502较高剂量时(10 mg/kg)小鼠迟发型超敏反应增强,体液免疫受到抑制;但在较低剂量(<3 mg/kg)时无免疫毒性。连续给药可显著激活小鼠的免疫反应,但对CBLB502的抗辐射活性抑制达80%~90%,显著降低小鼠存活率。此外,高剂量(0.5 mg/kg)给药组的存活率显著低于免疫照射对照组。结论 CBLB502连续给药可显著降低其抗辐射活性并具有一定副作用。 展开更多
关键词 鞭毛蛋白衍生多肽 CBLB502 TOLL样受体5 免疫原性 抗辐射 酶联免疫吸附测定
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