基于COI基因的浙江省内黄缘闭壳龟遗传多样性研究

为了解浙江省内不同黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)群体的种质资源现状,基于线粒体DNA COI序列对来自浙江省内野外和养殖场的8个黄缘闭壳龟群体的遗传多样性和遗传结构进行比较分析。结果表明:黄缘闭壳龟线粒体COI基因序列长度为1040 bp,A=27.4%、T=30.5%、C=24.6%、G=17.5%,有较强的AT偏好性;共定义9个单倍型,单倍型多样性(Hd)为(0.79900±0.21000),核苷酸多样性(Pi)为(0.00209±0.00147),呈“高Hd低Pi”遗传分布;不同黄缘闭壳龟群体间的遗传距离为0~0.003,群体内部的遗传距离为0~0.004,其中磐安后阁村(YS)群体内部的遗传距离最大,为0.004;单倍型系统发育树并未呈现明显的谱系结构;群体间遗传分化指数(FST)为-0.34752~0.82222,8个群体的遗传分化不显著(p>0.05);中性检验(Tajima’s D=-0.36627,Fu’s FS=-0.605)与核苷酸错配分布均表明,浙江省内黄缘闭壳龟群体并未经历种群扩张事件,同时,由Mantel检验可知,遗传距离与地理距离没有显著的相关性(R=0.2938,p>0.05);AMOVA分子方差结果显示,群体内的遗传变异高于群体间(85.06%>14.94%)。研究表明,浙江省内黄缘闭壳龟群体之间为高单倍型多样性和低核苷酸多样性的遗传特征,并且存在一定水平的遗传分化,群体内存在明显的基因交流,根据COI基因分析显示,在磐安县获得的野生黄缘闭壳龟个体确定为黄缘闭壳龟浙江种,同时也发现存在浙江种与安徽种的杂交种,建议将分化程度不同的黄缘闭壳龟群体划分为不同单元保护。研究结果为浙江省内黄缘闭壳龟种质资源开发利用和合理制定保护措施提供了基础依据。

安徽黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)野生种群的现状及其保护建议

安徽是濒危物种黄缘闭壳龟的重要分布区之一,由于人类活动使得该龟栖息地日益减少,生存空间被挤占。加之近年来日益频繁的黄缘闭壳龟贸易所带来的肆意滥捕以及缺乏有效的保护措施,导致其野生种群衰减严重,数量已经十分稀少,同时买卖和饲养也进一步加剧了黄缘闭壳龟的非自然扩散和引入。目前黄缘闭壳龟在安徽的具体产地一直缺乏一个较为科学的研究,而了解黄缘闭壳龟在安徽的具体分布状况,对于该龟的保护至关重要。2011年—2012年5月至10月间,采用市场和访问调查以及野外实地调查相结合的方法,对安徽黄缘闭壳龟野生种群现状进行了研究,并对调查结果进行了报道,同时针对保护管理中存在的问题,提出相应的保护建议。

温度对黄缘闭壳龟受精卵孵化的影响

为了探讨温度对黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)受精卵孵化的影响,挑选84个大小均一、蛋黄下沉、有精斑龟卵,随机分成4组,每组21个,分3个平行,每个平行7个。每个平行小组的龟卵在同一个孵化箱中孵化。4个小组分别对应4个温度梯度。处理1组的孵化温度为(24±0.5)℃,处理2组的孵化温度为(26±0.5)℃,处理3组的孵化温度为(28±0.5)℃,处理4组的孵化温度为(30±0.5)℃。孵化结束后计算孵化率、称量体重量。结果显示,孵化温度为(28±0.5)℃组的孵化率最高,为95.24%;其次为(30±0.5)℃组,孵化率为85.71%;孵化温度为(24±0.5)℃组的孵化率最低,为28.57%。通过对初孵幼龟体质量进行称量,发现孵化温度对初孵幼龟体质量影响显著,以(28±0.5)℃的处理3组初孵幼龟体质量最重,显著地高于(24±0.5)℃的处理1组、(26±0.5)℃的处理2组(P<0.05),但是和孵化温度为(30±0.5)℃的处理4组相比差异不显著(P>0.05)。幼龟孵出30周后体质量以(28±0.5)℃的处理3组最高,与(30±0.5)℃的处理4组相比差异不显著(P>0.05),显著地高于(26±0.5)℃的处理2组(P<0.05),极显著地高于(24±0.5)℃的处理1组(P<0.01)。由于受到孵化温度的影响,(24±0.5)℃的处理1组和(26±0.5)℃的处理2组初始孵化体重较轻,所以8周~30周的体质量增加率显著地高于(28±0.5)℃的处理3组和(30±0.5)℃的处理4组(P<0.05)。但是从幼龟的孵出率和孵出8周、30周的体质量来看,以(28±0.5)℃的处理3组孵化黄缘闭壳龟的孵化效果最好。

信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区(浉河片区)两栖爬行动物种群结构及区系分析

2021年3月至2023年10月,对信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区(浉河片区)两栖爬行动物资源进行了初步调查。本次调查共观察记录两栖爬行动物实体2041只,经鉴定隶属3目14科16属40种。其中两栖类实体803只,隶属1目4科13种,其中新记录物种、外来入侵物种各1种;蛙科种类最多8种,占两栖动物种类的61.54%;两栖动物区系组成以东洋界物种为主,共5种,占物种数38.46%。爬行动物实体1238只,隶属2目7科16属27种;本土物种25种,外来物种2种;龟鳖目2科5种,占爬行动物种类18.52%;有鳞目5科22种,占种类的81.48%;游蛇科种类最为丰富,共15种,占总种类的55.56%;爬行动物区系组成以东洋界物种为主,共14种,占物种数51.85%。40种两栖爬行动物中,属于国家二级重点保护动物5种,占物种数量12.5%;属于省级保护动物3种,占物种数量7.5%;属于中国特有物种3种,占物种数量7.5%。调查结果对自然保护区两栖爬行动物资源的有效保护、持续利用、科学管理提供了科学参考。

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能。以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0%、酶解时间3 h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08%。酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力。总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景。

黄缘盒龟血细胞亚显微结构的电镜观察分析

通过电镜对黄缘盒龟血细胞亚显微形态结构的扫描和透射观察 ,并与中华鳖比较 ,发现这一较古老的爬行动物红细胞均呈椭圆型形态 ,与后者具类似性 ,但细胞的大小有差异 ,反映在不同深度水域中载氧能力的显著不同 ;虽然具有成群的凝血细胞 ,但后者的这类细胞尚无明显的形态特征 ,反映凝血功能的不完全性 ;前者粒细胞外周形态的不规则 ,而后者的彼此无差异 。

黄缘盒龟的繁殖生物学

黄缘盒龟 6～ 7龄达到性成熟 ,繁殖行为主要表现为发情求偶、交配和产卵。发情交配时间为 4～5月和 9～ 1 0月 ,产卵时间为 6～ 7月 ,每只雌龟每年产卵 1窝 ,每窝 1～ 6枚。卵重一般为 ( 1 4 46± 2 2 7,n =2 5 )g ,卵的长径与短径之比为 1 88∶1 ;卵黄和蛋白的质量比为 1 2 2∶1 ;卵黄和卵壳的质量比为 3 1 2∶1。多数受精卵于产出 2 4～

光照强度与温度对黄缘闭壳龟基本生命活动的影响

研究了光照强度、温度等生态因子对黄缘闭壳龟基本生命的影响，结果表明：光照强度低于400lx时，黄缘闭壳龟可进行正常的活动与摄食，随着光照强度的增加，巢外活动逐渐减少；光照强度超过4500lx时，各种活动基本停止．光照强度对黄缘闭壳龟的日摄食量和相对增重率影响显著，随着光照强度的减弱。黄缘闭壳的日摄食量逐渐增加，生长速度加快．黄缘闭壳龟对温度变化极为敏感，温度为26～31℃时，活动量大，摄食旺盛，低于25℃或高于32℃时，活动量小，温度低于18℃或高于33℃时，基本不活动．温度下降至12℃以下时进入冬眠期．

黄缘闭壳龟消化系统、呼吸系统的解剖

黄缘闭壳龟消化管总长度为背甲长的3.5～4.2倍。食管和胃壁厚,扩展性强,内壁有数条纵行皱襞。小肠较长,约占消化管总长度的60.9%,无盲肠,肠内壁有大小不一的纵行皱襞。肝较大,为体重的4.8%左右。胰脏长条形,沿十二指肠分布。气管和支气管均由呈"O"形完全闭合的软骨环和环间韧带所构成。气管较长,有45～55个软骨环;支气管较短,有30～40个软骨环。肺长囊形,蜂窝状,紧贴在背甲的内表面,从肩带一直延展到腰带。

温度对黄缘闭壳龟孵化和稚龟表型特征的影响

为研究温度对黄缘闭壳龟受精卵孵化和稚龟表型特征的影响,采用恒温孵化法,设置3个孵育温度(26±0.5)、(28±0.5)、(30±0.5)℃,每个温度放置卵30个,检测孵化期、孵化率和孵化稚龟表型特征并进行统计分析。试验结果表明,28℃试验组的孵化成功率最高,达到93.3%,孵化期75 d,相对较短,所孵幼体的体质量和13个表型性状显著高于26℃试验组(P<0.05),有利于幼体的生长;依据孵化率高低、稚龟体质量和表型特征大小,28℃是黄缘闭壳龟在北京及周边地区孵化的适宜温度条件。因此,孵化温度显著影响龟卵孵化效果和稚龟表型特征,该试验结果对黄缘闭壳龟在京津冀地区的繁育孵化具有重要的参考价值。

黄缘闭壳龟主要形态性状与体质量的关系

为确定影响黄缘闭壳龟Cuora flavomarginata体质量的主要形态性状,随机选取1、2、3龄的黄缘闭壳龟为试验对象(每个年龄组120尾),测量其体质量(y)、背甲长(x_1)、背甲宽(x_2)、背甲高(x_3)、甲桥斜高(x_4)、腹甲长(x_5)、腹甲宽(x_6)、甲桥长(x_7)、喉盾宽(x_8)、肱盾宽(x_9)、胸盾宽(x_(10))、股盾宽(x_(11))、肛盾宽(x_(12))、喉盾缝长(x_(13))、肱盾缝长(x_(14))、胸盾缝长(x_(15))、腹盾缝长(x_(16))、股盾缝长(x_(17))和肛盾缝长(x_(18))19个性状,采用相关分析、主成分分析、通径分析和回归分析的方法,计算相关系数、通径系数和决定系数,获得相关回归方程,对不同年龄组间的形态性状对体质量的影响程度进行了比较研究。结果表明:1龄组龟甲桥长对体质量的直接作用较大,2龄组龟肱盾宽和背甲长对体质量的影响较大,3龄组龟肱盾宽对体质量的影响较大;1、2、3龄龟第一主成分由大至小依次综合为增重因子、背甲增长因子、腹甲增长因子→增重因子、腹甲增长因子→腹甲增长因子;利用逐步回归分析方法,以体质量为依变量(y),形态性状为自变量(x_1～x_(18)),建立了黄缘闭壳龟不同年龄最优多元线性回归方程分别为y_A=-21.193+13.874x_7+4.834x_(10),y_B=-60.626+24.880x_9+11.750x_1-34.040x_(16),y_C=223.604+145.260x_9-153.201x_8-33.241 x_5,式中y_A、y_B、y_C分别为1、2、3龄组龟的体质量(g)。本研究结果可为黄缘闭壳龟良种选育的具体应用提供理论参考。

黄缘闭壳龟体型差异与亚种群分化分析

通过对黄缘闭壳龟的体重、背甲长、背甲宽、腹甲长、腹甲宽、体高等6个形态参数,以及背甲长/背甲宽、腹甲长/腹甲宽、背甲长/腹甲长、背甲宽/腹甲宽、背甲长/体高、腹甲长/体高、体重/体高平方等7个形态参数比例来研究A、B两种体型黄缘闭壳龟的群体差异.结果显示:A、B体型黄缘闭壳龟的腹甲长和体高差异极显著(P<0.01),其他形态参数差异不显著(P>0.05);两体型的形态参数比例除背甲长/背甲宽、腹甲长/体高差异不显著(P>0.05)外,其他的形态参数比例差异显著或极显著(P<0.01或0.01<P<0.05),从而通过形态学研究,为两种不同体型黄缘闭壳龟的亚种群分化和保护单元提供初步依据.

华中与华南地区黄缘闭壳龟形态学差异

通过体质量、背甲长、背甲宽、腹甲长、腹甲宽、体高等形态参数,以及背甲长/背甲宽、腹甲长/腹甲宽、背甲长/腹甲长、背甲宽/腹甲宽、背甲长/体高、腹甲长/体高等形态参数比值研究华中、华南地区黄缘闭壳龟群体形态学差异.主成分分析、聚类分析等4种统计分析结果表明:华中地区黄缘闭壳龟形态学与华南地区黄缘闭壳龟形态学的相似程度较小,差异性较大,形态参数差异极显著(P<0.01),形态参数比值差异显著或极显著(P<0.01或P<0.05);而华中地区A、B两群体黄缘闭壳龟形态学的相似程度较大,差异性较小.

大别山区黄缘闭壳龟的形态生物学种群特征分析(Ⅰ)

大别山区黄缘闭壳龟自然种群中,有一种比较常见的体形,其形态生物学特征为,腹甲中部凸起呈倒写的"V"形,背甲与腹甲完全闭合且十分紧密.可量性状研究表明:背甲长/背甲宽、背甲长/腹甲长、背甲宽/腹甲宽的统计分析分别为1.37±0.04,1.09±0.02,1.32±0.05;体重与背甲长的回归方程为y=0.0059x+11.3150,背甲长与腹甲长的回归方程为y=0.9828x-1.0602,线性相关极其显著.年龄与体重、体重与背甲宽、背甲长与背甲宽、腹甲长与腹甲宽、背甲宽与腹甲宽存在着比较显著的线性关系.而背甲长与体高(r=0.2469,)、腹甲长与体高(r=0.3178)不存在明显的线性相关性.

河南信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区黄缘闭壳龟种群现状调查

为了解黄缘闭壳龟的野外生存环境及资源现状,我们于2014年9月4日~16日,对河南省信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区境内的罗山、商城、新县等地黄缘闭壳龟的分布、数量和栖息地环境进行了调查。结果显示,除罗山境内少量地区人为干扰较强,目前难觅黄缘闭壳龟外,其余地区均有黄缘闭壳龟分布,栖息地环境较好。根据走访调查,2012~2014年间共记录黄缘闭壳龟121只,野外实地调查发现黄缘闭壳龟2只。3 a通过调查分别发现黄缘闭壳龟47只、46只和28只,呈急剧下降趋势。为拯救这一珍贵物种,保护区应尽快组织后续的专项资源调查,以监测黄缘闭壳龟的种群动态,并积极开展该种的就地保护和迁地保护工作。

三线闭壳龟、黄喉拟水龟、黄缘盒龟及其地方品系外部形态特征比较研究

首次对中国珍稀龟类三线闭壳龟(Cuora Trifasciata)、黄喉拟水龟(Mauremys mutica)、黄缘盒龟(Cistoclemmys flavomarginatas)及其地方品系的外部形态特征和差异进行了比较研究,为制定相应的龟类种质标准,保护和合理利用龟类资源提供技术资料。

黄缘闭壳龟的孵化生态及胚胎发育过程中死亡因子的研究

对黄缘闭壳龟受精卵的孵化条件进行了研究,它的孵化积温为50688～56784℃,最适孵化温度为28～31℃,孵化基质的含水量以8%～10%较适宜.用1∶1的沙与土混合作为孵化基质孵化率最高.卵的大小及放置方式对孵化效果影响不明显,孵化过程中卵重减轻2.39%～3.71%.孵化温度、孵化基质湿度以及霉菌感染是导致受精卵发育过程中胚胎死亡的主要因素.胚胎在孵化过程中的死亡曲线呈双峰型.

驯养条件下黄缘盒龟的产卵特点与孵化积温研究

人工驯养条件下,黄缘盒龟5月中下旬进入产卵期,6月中旬为产卵旺期,产卵期为46～54d,产卵时间集中在傍晚18:00～21:00.年产卵1次,年均产卵量2.5～2.6枚,卵的受精率为64.0%～64.6%.受精卵在常温与控温条件下的平均孵化期分别为76.7d、75.8d,孵化积温分别为47491.2～57741.1℃.h、45460.8～56088.0℃.h,最短孵化期为66d,最长孵化期为82d;常温孵化比控温孵化的平均孵化积温高1803.8℃.h,孵化率降低7.6%.

黄缘盒龟肝脏与肾脏的超微结构

在透射电子显微镜下观察黄缘盒龟的肝脏和肾脏的超微结构.结果显示肝实质内结缔组织少,肝小叶分界不清楚;肝细胞具两种形态,即L细胞和D细胞.肾小球由毛细血管构成;肾小囊外壁由扁平细胞构成,内壁可见足细胞附于其上;颈段由单层纤毛立方上皮细胞构成,细胞核较大,细胞游离面有很多纤毛伸向管腔,细胞核周围排列密集的线粒体;近曲小管由单层柱状上皮细胞构成,细胞核圆形,位于细胞中部,胞质内含有丰富的线粒体;中间段由单层纤毛立方上皮构成;远曲小管由单层柱状上皮细胞构成,细胞核位于细胞中部,其周围分布有许多线粒体,细胞底部可见丰富的质膜内褶;收集管由单层柱状上皮细胞组成,胞质内可见较丰富的膜迷路.黄缘盒龟肝脏的超微结构与其他爬行动物相似.肾脏结构与其生态习性有关.

黄缘盒龟体型差异与保护单元研究

通过对黄缘盒龟体重、背甲长、背甲宽、腹甲长、腹甲宽、体高等可量性状和背甲长/背甲宽、腹甲长/腹甲宽、背甲长/腹甲长、背甲宽/腹甲宽、背甲长/体高、腹甲长/体高、体重/体高平方等可量性状比值研究了A、B两种体型黄缘盒龟的群体差异.结果显示:A、B体型黄缘盒龟的腹甲长和体高差异极显著(P<<0.01),其它可量性状差异不显著(P>0.05);两体型的可量性状比例除背甲长/背甲宽、腹甲长/体高差异不显著(P>0.05)外,其它可量性状比值差异显著或极显著(P<0.01或0.01<P<0.05),从而为两种不同体型黄缘盒龟的亚种群分化和保护单元提供初步依据.