一株降解黄曲霉毒素B_(1)、拮抗黄曲霉的菌株鉴定及应用研究

目的筛选、鉴定一株降解黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))及拮抗黄曲霉的菌株,并进行应用研究。方法以青岛市海洋、陆地、河流等不同地区的土壤、水质微生物为研究对象,利用平板划线法、AFB_(1)降解率和黄曲霉对峙试验法筛选得到有效菌;通过形态学观察和同源性分析,鉴定有效菌的种类;分离该菌的上清液、悬菌液、胞内液并对各组分的AFB_(1)降解率进行测定;提取有效菌的活性物质,对其提取物进行抑菌试验;主动侵染花生籽仁,验证有效菌对降解AFB_(1)及抑制黄曲霉生长的效果。结果通过筛选,得到有效菌株LE160。综合形态学特征和16S rRNA基因分析结果,鉴定菌株LE160为毕节假单胞菌(Pseudomonas bijieensis),命名为毕节假单胞菌LE160。该菌株胞外上清液、菌悬液和胞内液对AFB_(1)降解率分别为80.4%、16.3%、11.9%。该菌降解AFB_(1)不是依赖细菌胞体的吸附作用,而是细菌代谢产生并分泌至胞外的活性物质主导的生物降解作用。菌株提取液对黄曲霉菌有明显抑制作用。花生应用试验结果表明该菌株的发酵液对降解AFB_(1)及抑制黄曲霉生长有一定效果。结论菌株LE160对AFB_(1)具有良好的降解效果,能有效拮抗黄曲霉的生长,具有应用的潜力。本研究结果为深入研究该菌的降解机制奠定了基础,也为花生等农产品防控黄曲霉侵染提供了新思路。

葡萄-藏红花间作系统下尖孢镰刀菌拮抗菌Cs12对藏红花根腐病的抑制作用

[目的]以藏红花单作和葡萄与藏红花间作土壤根系土为研究对象,分析微生物群落组成和差异表达菌群。[方法]对湖州现代农业示范园葡萄园区葡萄-藏红花间作和藏红花单作种植地块进行根系土壤采集。利用RoToR HDA菌落高通量筛选工作站构建细菌资源库。通过对间作菌群进行分离纯化以及平板对峙筛选出有益菌。通过分析藏红花的发病率来探究有益菌对藏红花根腐病的抑制作用。[结果]通过对间作菌群进行分离纯化以及平板对峙,分离出1种尖孢镰刀菌拮抗菌Cs12。球体接种试验表明Cs12使病情指数降低50%,对尖孢镰刀菌的防治效果达75%。[结论]分离出1种新发现的有益菌Cs12,这种菌具有较好地拮抗尖孢镰刀菌的作用。藏红花-葡萄间作系统不仅能够解决藏红花腐烂病问题,而且提高了土地资源利用率。这种生物防治方法对于防治其他植物的土传病害有一定的参考价值,有助于农业产业的可持续发展。

物理诱变技术在提升有益微生物拮抗香蕉真菌病原菌方面的研究进展

香蕉真菌性病害是香蕉生产中的主要病害之一,可严重阻碍香蕉产业的可持续发展。而生物防治技术,尤其是利用生防菌的策略,为该问题提供了一个可持续的解决方案。尽管生物防治具有潜在的应用前景,但生防菌在田间的有效定殖和稳定防病能力仍是挑战。本研究聚焦于物理诱变技术对生防菌的改良效果,旨在提升其对香蕉真菌性病原的拮抗能力。利用物理诱变技术对生防菌株进行诱变改良可显著提高生防菌对寄主的定殖能力和病害的防治效果。为了明确物理诱变技术对提升生防菌田间防效的作用,本文综合分析了不同物理诱变技术的类型、作用机理以及它们在提升生防菌拮抗真菌病原体中的应用。同时,文中还探讨了突变菌株筛选与鉴定的方法,并对比了各技术的优缺点。特别指出了传统物理诱变技术在控制突变方向、提高效率及稳定性方面的局限,并提出了离子束、脉冲强光和空间诱变等新型物理诱变技术的潜在优势。通过归纳现有研究和展望未来发展方向,本文旨在为物理诱变技术在增强生防菌对植物病害防治效果的应用提供理论依据,并对其在未来香蕉真菌性病害管理中的应用潜力进行展望。

栝楼根腐病镰孢菌拮抗菌SJ1623发酵代谢物的抑制活性

检测了6株拮抗菌发酵上清液对栝楼根腐病菌的抑制活性,采用菌丝生长速率法测定优势拮抗菌不同接种量和发酵时间对发酵上清液抑菌活性的影响,测定了不同稀释倍数的发酵上清液和脂肽粗提物对栝楼根腐病菌的抑制活性。结果表明,对栝楼根腐病菌抑制活性最高的拮抗菌为SJ1623,种子液培养时间为10 h,0.75%(体积比)的接种量效果较好;发酵上清液稀释10倍对病菌的抑制率为87.6%,脂肽粗提物50倍稀释液对病菌的抑制率为83.1%。

梨黑斑病拮抗菌的筛选研究

本文以梨枝条、果实以及梨根际土壤为试验材料,运用平板对峙法分离筛选出对梨黑斑病具有拮抗作用的菌株。结果表明:根际土壤中分离到可培养细菌8种,梨枝、梨果内分别分离到可培养菌株5种、3种;经过初步筛选得出共有7株对梨黑斑病菌有抑制效果的菌株,再经过复筛得出,7种菌株对梨黑斑病菌均有一定的抑制作用,但抑制效果不同,LZd对梨黑斑病的拮抗作用最强,抑制率高达87%;其次是LTa和LTe,抑菌率为80.50%和83.25%;LGb和LTf的抑菌率为70.25%和78.50%;LZe和LTh抑制效果最差,抑菌率仅为49.50%和55%。

嗜酸乳杆菌对3种弧菌的拮抗效果及对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响

使用益生菌是预防和控制水产养殖细菌感染的非抗生素方法之一。嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)可在机体内分泌抗菌物质,具有抑制有害菌生长、调节肠道微生态平衡和增强抗毒抗病能力等功能。研究了不同氧环境和不同培养基条件下嗜酸乳杆菌、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、溶珊瑚弧菌(V.coral-liilyticus)的生长情况,并通过牛津杯法和液体培养法结合PCR荧光定量技术、高通量测序技术,系统评价了嗜酸乳杆菌对上述弧菌的拮抗效果及对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道菌群的组成和变化的影响。结果显示,在厌氧条件下,哈维氏弧菌的菌量显著高于在好氧环境培养后的菌量(P<0.05)。不同培养基配比对4种细菌的生长均具有显著性影响(P<0.05)。嗜酸乳杆菌对3种弧菌的生长均有良好的抑制效果。在对虾肠道菌群背景下,嗜酸乳杆菌对副溶血弧菌的生长有显著抑制作用(P<0.05)。处理组的弧菌属比例较对照组显著减少,高菌量组的有益菌属均显著增加。研究表明,嗜酸乳杆菌对上述3种弧菌的生长有良好的抑制效果,在对虾肠道菌群背景下对副溶血弧菌的生长也有良好的抑制效果,且能够优化菌群结构。

烟草赤星病拮抗菌YZ01发酵条件优化及抑菌活性物质初探

由链格孢菌Alternariaalternata引起的赤星病是烟草上的主要叶部病害之一,常常造成巨大的经济损失。对烟草赤星病菌具有显著拮抗活性的菌株YZ01进行鉴定、活性物质探究及发酵条件优化,可为烟草赤星病的防治提供菌种资源,为指导其实际生产应用奠定基础。通过形态学、生理生化特征及16S rRNA和gyrA基因序列系统发育分析,鉴定菌株YZ01为贝莱斯芽胞杆菌Bacillusvelezensis。无菌滤液抑菌试验发现贝莱斯芽胞杆菌YZ0110%无菌滤液对烟草赤星病菌Alternariaalternata的抑菌率为86.56%,对苹果腐烂病菌Valsa mali、辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、苹果炭疽叶枯病菌Colletotrichum fructicola的抑菌率为100.00%。进一步研究发现,贝莱斯芽胞杆菌YZ01发酵液可使烟草赤星病菌菌丝细胞结构受损,导致其原生质体外渗,从而抑制菌丝生长,其发酵液抑菌活性成分主要为脂肽及蛋白类物质。单因素试验法和正交实验优化菌株YZ01的最佳发酵培养基配方为葡萄糖0.50%、胰蛋白胨1.50%和磷酸氢二钾1.50%。发酵液稳定性测定发现,其抑菌活性受温度、pH和紫外处理的影响较小。综上所述,该结果为烟草赤星病的生物防治提供了菌种资源,也为后续田间应用奠定了基础。

一株香蕉枯萎病菌拮抗菌的筛选鉴定及盆栽防治效果

[目的]从香蕉根际土壤等材料中分离筛选获得对香蕉枯萎病菌有抑制作用的拮抗菌,为香蕉枯萎病生物防治提供理论基础及菌株资源。[方法]采用稀释平板分离法,从香蕉枯萎病罹病土壤、桑蚕和发酵藻等材料中分离得到微生物,再分别采用平板划线法和单孢分离法对细菌、真菌进行分离和纯化,以香蕉枯萎病菌亚热带4号生理小种(Foc STR4)为靶标菌,采用平板对峙法进行拮抗菌的筛选试验,对抑制效果最好的菌株进行基因测序鉴定、生理生化指标测定;以只接种Foc STR4为对照进行防治香蕉枯萎病的盆栽试验。[结果]从罹病的香蕉根际土壤中筛选得到1株对Foc STR4有明显抑制效果的拮抗细菌TU3-1,抑制率为56.18%,在试验中发现TU3-1对香蕉炭疽病菌等其他13种供试植物病原菌有抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌的抑制效果最好,抑制率为75.99%。盆栽试验结果显示,与只接种Foc STR4处理相比,对香蕉枯萎病的防治效果为51.81%。经基因测序、序列比对和生理生化实验观测,TU3-1菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌属(Bacillus),该菌株为革兰氏阳性菌,厌氧性,可水解淀粉和纤维素,产生氨气和蛋白酶,最适宜培养基为PDA培养基,最适培养温度为30℃,最适生长pH为7。[结论]筛选鉴定得到1株对Foc STR4抑制率为56.18%、对香蕉枯萎病防治效果为51.81%的拮抗细菌TU3-1,被鉴定为B.velezensis,TU3-1对其他10种植物病原真菌及3种植物病原细菌也有抑制作用,表现出广谱抑菌活性,可进一步开发作为生防菌种质资源。

草莓炭疽病病原鉴定及拮抗菌株筛选

草莓炭疽病是近几年草莓生产中的主要病害之一,危害性大、毁灭性强。为明确江苏省镇江市丹徒区草莓炭疽病病原菌种类,并筛选对其有效的拮抗菌株,从丹徒区草莓露天苗圃采集炭疽病发病植株,采用组织分离法对病原真菌进行分离,通过致病性测定,结合形态学和分子生物学准确鉴定其种类,并以此为靶标病原菌,通过平板对峙法筛选拮抗菌株。结果表明,从草莓植株发病部位共分离获得11株暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense),其中,从根部分离得到2株(D13、D19)、茎部4株(D1、D2、D11、D12)、叶部5株(D8、D9、D10、D20、D21)。经柯赫氏法则验证,C.siamense为草莓炭疽病病原真菌,其中D8和D19这2株C.siamense致病性较强。从健康草莓植株内分离获得29株内生真菌,以D8和D19作为指示菌,通过平板对峙试验筛选出5株拮抗效果较好的生防菌株,分别为Z72、Z79、Z52、Z107和Z101,其抑菌率均达到了60%以上,其中Z72对D8和D19的抑菌率分别达到了74.07%、79.82%。经鉴定,这5株拮抗菌均为木霉属真菌(Trichoderma spp.)。暹罗炭疽菌为丹徒区草莓炭疽病主要病原菌,具有较强的致病性,草莓内生真菌可为草莓炭疽病微生物防治提供重要资源。

花椒流胶病拮抗菌的分离鉴定及其生防机制

由三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)引起的花椒流胶病是近年来危害严重的花椒病害之一。为获得F.tricinctum的优良拮抗菌株,采用平板对峙法,筛选分离得到一株具较强拮抗作用的花椒内生真菌HJ-18,其对F.tricinctum的抑制率达58.85%。基于形态学和ITS分子鉴定,初步确定HJ-18为裂褶菌(Schizophyllum commune,GenBank登录号为OP502072);经抑菌谱与稳定性测试发现,HJ-18对4种供试植物病原真菌均具抑制效果,培养滤液经不同光照、温度和pH处理后,抗真菌效果稳定,但对紫外线敏感;当菌株HJ-18培养滤液体积分数为50%时,对F.tricinctum菌丝生长抑制率为66.40%;扫描电镜结果显示,经菌株HJ-18培养滤液处理后,F.tricinctum菌丝出现褶皱,且表面有碎屑产生;盆栽试验表明,菌株HJ-18对花椒流胶病的相对防效为52.65%,与22.5%啶氧菌酯100倍液处理具有相同防效。以上结果表明,菌株HJ-18是一株具有生防潜力的内生真菌,可作为生防菌剂进行开发利用。

新疆甜瓜采后致腐菌及拮抗菌的分离、筛选与鉴定

[目的]对甜瓜采后主要致腐微生物进行分离鉴定,并筛选出防腐效果最佳的拮抗菌株,丰富甜瓜采后保鲜拮抗菌资源。[方法]利用组织块分离法在腐烂的甜瓜果实中分离致腐菌,采用梯度稀释法从甜瓜种植地土壤分离拮抗菌,通过平板对峙法筛选出拮抗作用较强的生防菌,并通过形态学观察、生理生化测定、生物学鉴定确定其种属,测定拮抗菌对菌丝生长及分生孢子萌发的作用,明确拮抗菌对致腐菌的防治效果。[结果]本研究分离出1株主要病原菌CH-3,通过对ITS、tef和tub基因序列进行BLAST比对及系统发育分析,结合菌落形态特征观察,病原菌CH-3鉴定为尖孢镰刀菌。从甜瓜种植地土壤中分离得到67株细菌,通过拮抗试验得到3株抑菌活性很强的拮抗菌,分别为BG-1、BG-2和BG-3,选取抑菌效果更好的BG-2作为供试菌株,结合生理生化测定、菌落和菌体形态特征观察及16S rDNA、gyrB和rpoB基因序列分析结果,明确拮抗菌BG-2为贝莱斯芽孢杆菌。致病性测定结果表明,致腐菌CH-3对甜瓜有致病性,拮抗菌BG-2对甜瓜致腐菌尖孢镰刀菌CH-3孢子萌发、菌丝生长的相对抑制率分别为90.00%、60.11%。[结论]获得1株拮抗效果最佳的拮抗菌BG-2,鉴定为贝莱斯芽孢杆菌,分离到1株甜瓜主要致腐菌CH-3,鉴定为尖孢镰刀菌。贝莱斯芽孢杆菌BG-2对尖孢镰刀菌CH-3有较强的拮抗作用,致腐菌CH-3对甜瓜有致病性,拮抗菌BG-2能有效抑制甜瓜致腐菌尖孢镰刀菌CH-3孢子萌发和菌丝生长,且拮抗菌浓度越高对孢子萌发的抑制效果越好,在甜瓜采后贮藏及生物保鲜中具有潜在的应用价值。

番茄青枯病拮抗菌的筛选及防治效果

为了筛选出具有抑制青枯雷尔氏菌作用的拮抗菌,采用形态指标、生理生化特征以及16S rRNA序列分析等方法对菌株进行了研究,并且通过阴性对照(CK)、番茄青枯病菌阳性胁迫处理(RB)和拮抗菌K+番茄青枯病菌处理(KRB)3个盆栽番茄土壤样品进行了防卫反应基因的表达研究.结果表明,拮抗菌K5菌落呈乳白色且表面光滑,经革兰氏染色为阳性,初步确定为芽孢杆菌,通过分子鉴定后确定为贝莱斯芽孢杆菌;番茄青枯病的盆栽防治效果达到23.20%,K5菌株在接种48 h后能诱导番茄根部抗病基因表达,CTR、ETR基因的表达量提高,表明K5通过植物抗病相关基因的表达,能诱导植物产生抗病性,并能有效地抑制青枯病菌的繁殖,从而达到防治青枯病的作用.

一株拮抗菌产生的抗菌物质的分离纯化与初步鉴定

试验旨在分离纯化XDH菌株产生的抗菌物质,并初步鉴定有效抗菌物质的结构。从泰山林地土壤中分离获得一株对大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌等多种动物致病菌具有较强拮抗作用的短短芽孢杆菌XDH,通过硫酸铵盐析和层析技术对该菌株产生的抗菌物质进行了分离纯化,对纯化后的抗菌物质进行了性质研究,并对抗菌物质B组分进行了结构鉴定。结果为:经过CM Sepharose FF离子交换层析、Sephadex G25凝胶层析对抗菌物质进行分离纯化,纯化后的抗菌物质对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)分别为2.34μg/mL和4.69μg/mL,对鸡白痢沙门氏菌的MIC、MBC分别为0.63μg/mL和1.25μg/mL。采用AKTA Explore10层析系统对抗菌物质进一步分离纯化,获得A、B、C三个活性组分,其中,活性组分B的质谱解析结果显示,其分子量为1570.9 Da,推断为一新的多肽类抗菌物质。

杨树溃疡病拮抗菌防治机制研究进展

随着杨树栽植面积不断扩大,杨树溃疡病发生趋重,对树木造成严重损害。杨树溃疡病主要防治手段为化学药剂,但环境污染和病原菌耐药性等问题越发严重,需开发无污染且防治有效的技术或策略。以植物根际微生态组学为研究手段,可获得提升植物抗病能力的有益微生物。这些拮抗菌能够抑制溃疡病原菌的生长且无环境污染,具有很好的生物防治潜力。鉴于此,本综述主要探讨拮抗菌对防治杨树溃疡病的作用方式,包括通过养分水分竞争和分泌抑菌物质抑制病原菌生长,提高植物抗病性抵御病原菌侵染,以及提高宿主自身的活性氧耐受性等机制。未来利用多组学手段,将微生物培养与宏基因组学、代谢组学充分结合,进一步探究拮抗菌的协同作用机制,将有助于开发高效、稳定、环保的微生物菌剂;同时,寻找合适的纳米材料作为载体,构建能最大限度发挥拮抗菌功能的菌剂体系,也是未来生物控制剂研发的重要方向之一。

咖啡炭疽病菌致病性测定及其拮抗菌筛选

炭疽病是咖啡的一种常见病害,对咖啡果实的产量和质量造成严重损失,开展引起咖啡炭疽病的病原菌致病性及其生物学特性研究,并筛选有效的拮抗菌,将为咖啡炭疽病的生物防治提供参考依据。对实验室分离并保存的4株咖啡炭疽病病原Wyq1(Colletotrichum siamense)、Yyq1(C. fructicola)、Xbd1(C. gloeosporioides)、Hb1(C.theobromicola)孢子悬浮液进行致病性测定,并选择致病力最强的菌株进行后续试验;通过平板培养法测定病原菌的生物学特性,采用平板对峙法对病原菌进行拮抗菌筛选。致病性测定结果显示,4株菌株均可侵染健康咖啡叶片,且在4株病原菌中菌株Xbd1的致病力最强;对菌株Xbd1的生物学特性测定结果表明,营养生长最适培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),最适氮源为胰蛋白胨,最适碳源为葡萄糖,最适温度为28℃,最适pH为7,不同光照对其营养生长的差异不显著。室内拮抗菌筛选中有5株拮抗效果较好,分别是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MC4-2、特基拉芽孢杆菌(B. tequilensis)D5-8、贝莱斯芽孢杆菌(B. velezensis)MC2-1、弯曲芽孢杆菌(B. flexus)ZLSY3和解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliticus)GJ7,其中拮抗效果最好的是枯草芽孢杆菌MC4-2,抑制率达57.8%。通过咖啡炭疽病病原菌致病性测定及其拮抗菌筛选,明确了该病原菌的致病性,筛选得到的5株拮抗菌的拮抗效果均较好,为炭疽病的防治及其生防菌剂的开发奠定基础。

拮抗犬小孢子菌芽胞杆菌的筛选和鉴定

为了寻找能够拮抗犬小孢子菌的细菌,本试验从健康犬、猫和貉粪便中筛选了抗犬小孢子菌的芽胞杆菌,经培养、染色特性和16S rDNA序列分析对其中抑菌谱最广的芽胞杆菌进行鉴定,采用平板对峙法测定所筛选芽胞杆菌对犬小孢子菌的抑制效果,用碘化丙啶对芽胞杆菌发酵上清处理的犬小孢子菌菌丝进行染色以初步分析抑菌机理。结果显示,共筛选到12株拮抗犬小孢子菌的芽胞杆菌,其中F-15株对犬小孢子菌的抑制率为64.28%,也可抑制金黄色葡萄球菌和沙门菌;F-15株的16S rDNA序列与HSB1株贝莱斯芽胞杆菌的16S rDNA序列相似度为100%;F-15株发酵上清处理的犬小孢子菌菌丝染色后,在荧光显微镜下可见红色荧光,表明其损伤了犬小孢子菌菌丝的细胞膜。本试验为贝莱斯芽胞杆菌及其代谢产物在防控犬小孢子菌等真菌危害中的应用提供了参考。

葡萄致腐菌灰葡萄孢及其拮抗菌贝莱斯芽孢杆菌的分离鉴定

分离筛选出对葡萄致腐菌灰葡萄孢有较强拮抗作用的拮抗菌,丰富葡萄采后保鲜拮抗菌资源,以期为葡萄灰霉病的生物防治提供理论依据和奠定应用基础。利用组织块分离法在腐烂的葡萄果实中分离得到灰葡萄孢,梯度稀释法从葡萄园土壤中分离得到潜力拮抗菌,通过平板对峙及琼脂扩散法筛选出拮抗作用较强的生防菌,并通过形态学观察、生理生化测定、生物学鉴定确定其种属。通过对拮抗菌进行溶血性测定初步探索其是否对人体有溶血作用。分离得到的葡萄致腐菌通过形态学观察,病原菌PH-23菌丝初期呈灰白色,继续培养会逐渐转变为淡淡的青灰褐色,菌丝繁盛,孢子众多。对病原菌PH-23进行ITS、β-tub序列分析,结合形态学特征确定其为灰葡萄孢。致病力测定结果表明,PH-23接种后葡萄症状与葡萄灰霉病症状相符,腐烂严重。筛选得到对葡萄致腐菌PH-23拮抗作用较强的生防菌TP-1,抑菌圈直径为22.49 mm。通过形态学观察,菌体为杆状,芽孢呈椭圆形,大小为0.62μm×2.35μm。TP-1革兰氏染色阳性。生理生化鉴定结果初步认为TP-1为芽孢杆菌。基于16S rDNA基因、rpoB基因、gyrB基因序列分析确定其为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。拮抗菌TP-1的溶血性测定显示其对人体无溶血作用。拮抗菌TP-1对灰葡萄孢有较强的拮抗作用,在葡萄采后贮藏及生物保鲜中具有潜在的应用价值。

乳山长牡蛎共附生可培养细菌的多样性和副溶血性弧菌拮抗菌的筛选

采用稀释涂布法分离培养2020年6—9月采自山东省威海市乳山牡蛎养殖区的长牡蛎(Crassostrea gigas)胃和鳃部位共附生可培养细菌,通过形态观察和16S rRNA基因测序进行多样性分析,同时筛选副溶血性弧菌的拮抗菌。结果表明:共分离获得细菌422株,删除重复后共获得不同批次细菌258株,主要包括变形菌门、厚壁菌门、放线菌门和拟杆菌门4个类群,分别占比72.2%、12.6%、11.8%和3.4%,共囊括了6个纲,63个属和119个种,并分离到1个潜在新种。分离的不同种类弧菌可能与牡蛎夏季高死亡率有关,并筛选出一株杀鱼假交替单胞菌ML-231对副溶血性弧菌有较强的抑制作用。本研究首次报道了乳山长牡蛎共附生可培养细菌多样性,发现多种致病性弧菌,并获得1株副溶血性弧菌拮抗菌,对今后乳山长牡蛎的生产管理及弧菌防治具有一定参考价值。

烟草赤星病拮抗菌的筛选及其生防机理初探

[目的]本研究以烟草赤星病菌为靶标菌,筛选对其拮抗效果较好的生防菌,并对其进行后续的鉴定,同时初步设计试验验证生防机理,为烟草赤星病的拮抗生防菌资源、拮抗菌剂的制备等提供新的参考。[方法]采用初筛复筛获得生防菌后;绘制系统发育树鉴定、抑菌谱系测定、菌株产酶活性测定、对赤星病病菌菌丝生长和孢子萌发的影响、诱抗定量检测、离体叶片防效等方法验证生防机理。[结果](1)筛得2株对于赤星病菌拮抗效果较好的生防菌,经由16S rDNA鉴定发现其分别是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)X768与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)703;并完成了2株生防芽孢杆菌的抑菌谱系测定,证明其均具有抑菌广谱性;(2)对其生防机理探究过程中,菌株703具备产生纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶的能力,菌株X768具备产生纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的能力;2株生防芽孢杆菌均可抑制赤星病孢子的萌发和影响菌丝正常生长的形态,对于病原菌具有较强的抑制作用;(3)使用qRT-PCR法验证了生防菌对烟草防御基因通路(SA、JA、ET等通路)的影响,其中应用菌株703处理后烟草应用防御通路可能与SA通路、JA通路和泛素连接酶通路相关;而使用菌株X768处理后烟草应用防御通路可能与SA通路和泛素连接酶通路相关。[结论]筛得的具有抑制烟草赤星病作用的生防菌株B.subtilis X768与B.velezensis 703,抑菌谱较广,均可较强效果地抑制赤星病孢子的萌发和菌丝生长,并且2株生防菌均可引起烟草防御基因通路的上调,离体叶片防效效果较好。

月季炭疽病内生拮抗细菌的筛选鉴定及抑菌作用

【目的】发掘月季内生拮抗细菌资源,为月季炭疽病生物防治提供高效而稳定的拮抗菌株资源。【方法】以20个健康无病害蔷薇属植物的叶片为试验材料,采用组织匀浆法分离叶片内生细菌,采用平板对峙法筛选对月季炭疽病病原菌(Colletotrichumfructicola)YJY-20具有拮抗作用的内生细菌菌株,结合菌落形态、生理生化和16S rRNA序列分析对拮抗菌进行种类鉴定。利用平板对扣法测定拮抗菌挥发性有机化合物的拮抗效果;利用牛津杯扩散法测定拮抗菌无菌发酵液对炭疽病病原菌及菌丝的影响;通过PCR扩增脂肽类抑菌物质合成基因;采用琼脂孔扩散法测定拮抗菌粗蛋白和脂肽类抑菌物质的抑菌活性;利用平板检测法测定拮抗菌产胞外酶活性;通过平板对峙法测定拮抗菌对12种植物病原真菌的抑制效果;采用离体叶片试验测定拮抗菌发酵液对月季炭疽病的防治效果。【结果】从蔷薇属植物叶片中分离筛选出2株对菌株YJY-20具有较强拮抗效果的内生细菌DMGSMG4和QZM1,经鉴定分别为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)。菌株DMGSMG4和QZM1的挥发性有机化合物对菌株YJY-20的抑制率分别为11.72%和30.71%,同时能减少病原菌黑色素生成;其无菌发酵液对菌株YJY-20的抑制率分别为60.25%和61.24%,并能造成病原菌菌丝断裂扭曲。菌株DMGSMG4和QZM1粗蛋白对菌株YJY-20的抑制率分别为59.76%和50.63%,且热稳定性较好;其脂肽类抑菌物质对菌株YJY-20的抑制率分别为50.07%和45.03%。2株拮抗菌均能扩增出bmyB、fenD、srfAA和srfAB脂肽类抑菌物质合成相关基因。2株拮抗菌可产纤维素酶和蛋白酶,其中菌株DMSGMG4还可产有机酸。菌株DMGSMG4和QZM1对12种植物病原真菌的抑制率均大于50.00%,其对月季炭疽病离体叶片防治率分别为59.35%和20.58%。【结论】筛选获得的菌株DMGSMG4和QZM1对炭疽病病原菌具有较强的拮抗效果,具有作为月季炭疽病生防菌株的潜力。