鸭源鸡杆菌flfA基因的克隆及功能区域分析

为了解鸭源鸡杆菌(G.anatis)菌毛蛋白Flf A的分布情况及功能,对18株G.anatis中国分离株的flfA基因进行扩增和分子克隆,应用相关软件对其核苷酸序列及氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,18株G.anatis均具有flfA基因,核苷酸同源性为70.2%~99.8%,氨基酸同源性为63.1%~98.8%,有6~8个B细胞抗原表位,且这些优势的抗原表位多位于保守序列区,表明G.anatis不同菌株间可能存在交叉免疫反应。

鸭源鸡杆菌flfA基因的克隆表达及抗原性分析

用PCR方法从鸭源鸡杆菌中国分离株PDS-RZ-1-SLG中扩增flfA基因，并运用生物信息学软件分析鸭源鸡杆菌菌毛蛋白FlfA的二级结构、表面可及性与B细胞优势表位簇；将目的基因插入原核表达载体Pet28a（＋），经PCR、酶切及测序鉴定成功构建重组表达质粒pET28a（＋）-FlfA，然后转化到大肠杆菌BL21，IPTG诱导重组质粒表达；SDS-PAGE和Western blot鉴定FlfA的表达及抗原性。结果显示：成功获得与预期大小一致的573bp的flfA基因；FlfA蛋白结构分析显示其二级结构以无规则卷曲为主，表面存在很多抗原表位；PCR及酶切等鉴定表明重组表达质粒pET28a（＋）-FlfA构建成功。SDS-PAGE分析显示，经IPTG诱导表达获得相对分子质量约20000的重组蛋白；Western blot分析结果显示重组菌毛蛋白能被兔抗rFlfA多抗血清和鸡抗鸭源鸡杆菌血清识别，抗原性良好；而且，rFlfA多抗血清与菌毛蛋白具有良好反应性。