问号钩端螺旋体fliN基因原核表达及其产物的鉴定

目的克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株鞭毛相关基因fliN并构建其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性。方法提取钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长fliN基因片断,T-A克隆后测序。按常规方法构建fliN基因原核表达系统,并用IPTG诱导目的重组蛋白rFliN表达。采用SDS-PAGE结合Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rFliN表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rFliN。采用兔抗问号钩体黄疸出血群赖株全菌抗血清的Western blot鉴定rFliN及其免疫反应性。结果与报道的相应序列比较,所克隆的fliN基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。IPTG诱导原核表达系统pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN表达量约占细菌总蛋白的30%,rFliN提纯后仅见单一的蛋白条带。rF-liN能与抗血清发生免疫结合反应。结论本研究成功地构建了高效表达目的重组蛋白的问号钩体fliN基因原核表达系统,RFliN有良好的免疫反应性,为深入研究FliN致病及免疫保护作用奠定了基础。

计算智能的理论与应用研究进展——FLINS2002计算智能系统国际会议简况

第五届计算智能系统国际会议(FLIN2002)于2002年9月16日至18日在比利时根特大学召开。FLINS(Fuzzy Logic and Intelligent Technologies in Nuclear Science)会议是一个在国际上具有相当影响的系列学术会议,会议主题是计算智能的理论与应用(尤其是在核技术领域的应用)研究,其宗旨是为相关领域的研究人员,工程师及企业建立一个合作与交流的桥梁。从1994年开始,FLINS会议已举行了四届,在学术界的影响越来越大。本届会议主要涉及智能信息处理、智能控制、神经网络、模糊数学、软计算等领域,共有来自世界各地的近90位专家、学者、工程师及企业领导出席了会议。我校理学院数学系徐扬教授、秦克云教授及刘军博士后应邀参加了这次会议。在这次会议上。

靶向敲除问号钩端螺旋体鞭毛相关fliN基因及其突变株致病性变化

目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体）鞭毛相关Ⅲ型分泌系统∥洲基因产物的致病性。方法构建基因打靶载体p2NIL fliN-amp，采用基于自杀质粒与染色体同源序列重组的靶基因敲除技术构建不表达FliN的问号钩体赖型56601株突变株，采用PCR、测序和Westernblot对FliN-突变株进行鉴定。采用动力试验、MTT、Fontana镀银染色法和流式细胞术，对FliN-突变株的迁移能力、培养物上清对小鼠单核-巨噬样细胞株J774A．1的细胞毒性、黏附及诱导J774A．1细胞凋亡能力的改变进行分析。结果PCR、测序和Westernblot结果均证实成功构建了FliN‘突变株，该突变株能在含100μg/ml氨苄青霉素的Korthof培养基中生长及繁殖。FliN。突变株在Korthof半固体培养基上菌落直径（2—3mm）明显小于野生株（6～8mm），表明该突变株动力消失。FliN一突变株培养物上清作用J774A．1细胞72h时虽显示有细胞毒性，但明显低于野生株（P〈0．05）。FliN。突变株作用J774A．1细胞60rain时的黏附率（25．5％）明显低于野生株（47．5％）（P〈0．05），其引起J774A．1细胞坏死和细胞凋亡率（30．6％和22．7％）也明显低于野生株（48．2％和35．2％）（P〈0．05）。结论．fliN基因产物与问号钩体黏附细胞、分泌毒力因子和诱导细胞凋亡密切相关。采用基于自杀质粒基因敲除技术可用于研究问号钩体靶基因产物的致病机制。

茎瘤固氮根瘤菌ORS571鞭毛马达基因fliN与fliM的功能分析

【目的】考察茎瘤固氮根瘤菌ORS571中鞭毛马达蛋白FliN、FliM的编码基因分别缺失的突变体表型,初步探究其功能机理。【方法】本研究采用同源重组和三亲本接合转移的方法构建突变体,测定野生型及突变株的生长曲线、趋化性、胞外多糖的分泌、生物膜的形成及细胞絮凝等表型。【结果】三种菌株的生长速率基本无差,与野生型菌株相比突变株鞭毛结构丧失,趋化能力、分泌的胞外多糖和生物膜形成能力均下降,但相同时间内细胞絮凝程度比野生型明显。【结论】实验表明,鞭毛基因fliN、fliM对茎瘤固氮根瘤菌ORS571鞭毛的形成、趋化运动、胞外多糖的分泌、生物膜的形成及细胞絮凝能力等均有调控作用。