伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株的制备

目的:为探讨z66鞭毛抗原阳性伤寒沙门菌的fljA样基因的功能,制备沙门菌fljA样基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌fljA样基因序列,设计PCR特异性引物并在5'末端加接酶BglII位点,扩增fljA样基因上、下游片段,用BglII消化后,定向连接成fljA样基因的缺损性同源性核苷酸片段,先克隆至pGEM T质粒,再经BamHI酶切后导入自杀质粒pGMB151,电转化入伤寒沙门菌(GIFU10007),进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为fljA样基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的fljA样基因缺失231个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌鞭毛抗原表达的调控作用奠定了基础。

伤寒沙门菌fljA样基因表达载体的构建

目的:进一步明确二相伤寒沙门菌鞭毛抗原表达调节机制,系统分析伤寒沙门菌fljA样基因功能,构建含fljA样基因的表达载体并验证其表达。方法:根据fljA样基因两端序列设计引物,以z66抗原阳性伤寒沙门菌G IFU10007基因组为模板,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后,重组体转化至大肠杆菌JM109中诱导培养,并通过RT-PCR观察fljA样基因表达情况。结果:基因克隆和序列分析结果显示伤寒沙门菌fljA样基因被成功导入载体pET22b,RT-PCR结果提示大肠杆菌JM109可利用此重组载体进行fljA样基因表达。结论:成功获得能在大肠埃希菌中表达伤寒沙门菌fljA样基因的载体。