甲状腺肿瘤细胞DNA含量及CyclinD1与p27和Rb基因表达的定量检测

目的:探讨DNA含量(DI值)、细胞增殖活性(PI值)、CyclinD1、p27及Rb基因表达在不同甲状腺肿瘤中的变化,为甲状腺癌的癌变机制及甲状腺肿瘤的鉴别诊断提供实验依据。方法:采用流式细胞术(FCM)和免疫荧光技术对甲状腺癌(40例)、结节性甲状腺肿(21例)、甲状腺腺瘤(16例)、正常甲状腺组织(10例)的DNA含量、细胞增殖活性及CyclinD1、p27、Rb基因蛋白的表达进行定量检测。结果:甲状腺癌组的DI值明显增高,异倍体细胞明显增多,异倍体率为80.0%,PI值明显增高。CyclinD1蛋白在甲状腺癌组表达显著增高,p27蛋白表达量在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺腺癌组中依次减少,均明显低于正常甲状腺组织。结论:甲状腺癌发展过程中,DNA含量及异倍体率增加,细胞增殖活性增高。CyclinD1蛋白高表达,p27蛋白低表达,CyclinD1、p27与甲状腺肿瘤的发生密切相关。

复合垂直流人工湿地基质理化性质对nirS和nirK型反硝化菌多样性的影响

深入研究复合垂直流人工湿地基质理化性质及其对相关脱氮反硝化微生物的影响,可为解析人工湿地污水处理及提高脱氮效率提供理论依据。2020年12月采集贵州喀斯特地区复合垂直流人工湿地4口池(一级垂直流下行池、一级垂直流上行池、二级垂直流下行池、二级垂直流上行池)的基质样品,用Illumina高通量测序技术获得反硝化功能基因序列,分析其种群组成和多样性特征,并采用冗余分析揭示反硝化菌群落与基质理化性质之间的相关性。结果表明,复合垂直流人工湿地中4口池的基质理化性质存在显著差异;pH在4口池中均呈中性,溶解氧(DO)呈先下降后升高趋势,下行池的基质电导率(EC)均比上行池要高;总氮(TN)、总磷(TP)含量随着人工湿地梯级呈显著下降趋势,未出现厌氧现象;NO_(3)^(-)-N和NH_(4)^(+)-N含量在二级垂直流下行池中大量积累并达到峰值。在多样性分析中,nirS、nirK型反硝化菌丰度随着人工湿地梯级呈先降低后升高的趋势,多样性随人工湿地级数逐渐降低,且下行池丰度多样性显著高于上行池。基质中nirS型反硝化菌共5门9属,nirS型为6门14属,变形菌门是nirS、nirK型反硝化菌群的共同优势菌门,相对丰度为55.36%~65.72%、30.06%~45.66%。nirS、nirK型反硝化菌共有OTUs数分别为392、245,并与反硝化菌群OTUs数目趋势一致,从多角度表明nirS型反硝化菌群丰度明显高于nirK型,且共有OTUs占有率高达41.6%和41.7%,表明各级池中反硝化菌群相似度较高。冗余分析表明基质中nirS和nirK反硝化菌群的构建主要受pH、NH4+-N、DO、TP、TN影响,且nirS型对pH、nirK型对NH4+-N的响应更为强烈。

射孔对产层的损害机理及评价标准

本文阐述了对射孔损害机理及评价标准研究的重要性。回顾了国外在该方面的研究情况,着重介绍了我国“七·五”期间在此研究工作中所取得的一些成果,并指出了今后发展的方向。

环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80μmol/L)处理24,48,72h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P<0.01;TE-13:F=46.99,P<0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P<0.01;TE-13:r=0.925,P<0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P<0.01;TE-13:r=-0.703,P<0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P<0.01;TE-13:r=-0.753,P<0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.

外周血CD4^+CD25^+调节性T淋巴细胞对增殖性糖尿病视网膜病的临床指导价值

目的探讨外周血CD4+CD25+T细胞(Treg细胞)在增殖性糖尿病视网膜病(PDR)患者中的表达意义。方法选取2014年6月~2015年5月西安市第四医院收治的玻璃体积血糖尿病视网膜病患者42例(PDR组)和2型糖尿病无PDR患者30例(糖尿病组),同时选取健康志愿者30例(正常对照组),采用流式细胞仪检测各组患者外周血Treg细胞比例,同时检测各组患者糖化血红蛋白(Hb A1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平。结果 PDR组、糖尿病组和正常对照组年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05);PDR组Hb A1c、TG、BUN分别为(8.02±2.53)%、(2.01±1.04)mmol/L和(7.88±1.43)mmol/L,明显高于正常对照组的(4.92±1.38)%、(0.94±0.24)mmol/L和(3.45±1.25)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);PDR组TC、LDL-C和Scr分别为(5.44±1.21)mmol/L、(3.78±1.06)mmol/L和(118.63±34.16)μmol/L,明显高于糖尿病组的(4.47±1.33)mmol/L、(2.91±1.18)mmol/L和(88.63±23.21)μmol/L及正常对照组的(3.08±1.12)mmol/L、(1.60±0.82)mmol/L和(61.32±17.21)μmol/L,差异均有统计学意义(均P<0.05),而HDL-C为(1.22±0.34)mmol/L,低于正常对照组的(4.26±1.33)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);PDR组患者外周血CD4+T细胞比例为(18.21±5.34)%,明显低于糖尿病组和正常对照组的(24.07±4.11)%和(28.76±7.14)%,差异有统计学意义(P<0.05);3组Treg细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血Treg细胞可能参与了增殖性糖尿病视网膜病的发病机制,有待临床进一步研究。

流动注射荧光法测定微量铝

基于β-环糊精-丙酮能加速与增敏Al-钙黄绿素的荧光反应,建立了流动注射荧光法测定中草药中微量Al的新体系(Al-Calcein-β-CD-丙酮)。荧光最大激发波长和发射波长分别为478.0nm和509.6nm。Al^(3+)浓度在0～3.5μg/ml范围内标准曲线呈线性;检出限0.037μg/ml。方法已用于测定中草药中微量Al,RSD在1％以下;回收率在97％～105％范围;进样频率140次/h。

小鼠Sca-1阳性心脏干细胞的分离提取和表型鉴定

【目的】探索可靠的小鼠心脏干细胞（ cardiac stem cells ，CSCs）分离方法，并对体外培养的 CSCs进行表型鉴定。【方法】选用 SPF 级3-4周龄 ICR 小鼠，无菌条件下处理心脏组织，胶原酶 A 消化，40μm 筛网过滤，制备单细胞悬液，利用免疫磁珠分选法结合抗干细胞抗原‐1（stem cell antigen‐1，Sca‐1）的磁珠抗体来分离 Sca‐1阳性干细胞，并进一步行免疫荧光、流式细胞及基因表达等鉴定。【结果】利用磁珠分选法结合特异的抗 Sca‐1的磁珠抗体，成功地从小鼠心脏组织中分离出 Sca‐1阳性细胞群。这些细胞具有小、圆、亮等特征，能在体外培养扩增，传代后仍绝大部分表达 Sca‐1抗原，但基本不表达内皮系或造血细胞系的特异抗原 c‐kit 、Flk‐1、CD31、CD34、CD45等。这些 Sca‐1阳性细胞表达多能干细胞特征的 Nanog 、TERT 基因，心脏胚层特异的 ISL‐1、TBX5基因及心肌特异性转录因子 GATA4、Nkx2．5、MEF2C ，但不表达成熟心肌的标志基因α‐M HC 。【结论】利用磁珠分选法结合抗特异干细胞表面标志物 Sca‐1的磁珠抗体能在短期内获得高纯度的Sca‐1阳性 CSCs ；小鼠 Sca‐1阳性 CSCs 能在体外培养增殖，有助于 CSCs 相关的组织工程或分子机制的实验研究。

返流性肾病淋巴细胞经活化后CD69、CD71和HLA-DR表达及其意义

操探讨返流性肾病的发病与免疫致病的关系。方法：通过全血体外培养法，对１２例返流性肾病患儿外周血淋巴细胞体外活化，并用流式细胞仪测定淋巴细胞活性化抗原ＣＤ６９、ＣＤ７１和ＨＬＡ－ＤＲ。结果：在分裂原ＰＤＢ或ＰＨＡ刺激下，正常组淋巴细胞与Ｃｏｎｔｒｏｌ组对比，ＣＤ６９＋、ＣＤ７１＋、ＨＬＡ—ＤＲ十显著增殖（Ｐ＜００５），返流性肾病组则无明显差异（Ｐ＞０．０５，ＣＤ６９除外）。结论：返流性肾病存在细胞免疫调节功能失调，与该病发病密切相关。

人造血干/祖细胞多态性的研究:Ⅲ.骨髓CD34^+造血干/祖细胞功能亚群的分析

CD 34^+造血干/祖细胞(HSC/HPC)是十分异质性的,由多个不同功能亚群所构成,在分化方向与重建造血等方面差异显著。本文对正常人骨髓CD 34^+ HSC/HPC各亚群进行了较全面的分析。首先以阳性选择策略,采用Isolex^(TM) 50免疫磁球分选术富集骨髓CD 34^+HSC/HPC,其纯度>90%,随之采用免疫荧光抗体双标记二维流式细胞仪对其测定,发现高纯度的CD 34^+HSC/HPC可分为八个不同亚群:1.CD 34^+/CD 71^-(23.4%—56.6%)与CD 34^+/CD 71^+(33.4%—66.6%);2.CD34^+/CD 45^-(80.8%—82.5%)与CD34^+/CD 45^+(8.1%—11.2%);3.CD 34^+/CD 33^-(20.4%—80.6%)与CD 34^+/CD 33^+(14.6%—64.8%);4.CD 34^+/DR^-(6.3%—11.0%)与CD 34^+/DR^+(82.8%—85.5%)。用免疫胶体金——免疫桥酶联组化双染色对上述亚群进一步分析的结果与流式细胞仪的高度一致。

流式细胞术检测大鼠Th1/Th2细胞的刺激方案研究

目的探讨流式细胞术检测大鼠Thl／Th2细胞时使用刺激剂的最佳方案。方法用不同浓度佛波酯（PMA）联合不同浓度离子霉素（Ion）作为激活剂，刺激大鼠外周血T淋巴细胞，采用流式细胞仪三色法方案。观察和分析在不同浓度组合的激活剂刺激下检测T淋巴细胞内干扰素-γ／（INF-γ）、白介素-4（IL-4）的分泌效果。结果PMA浓度为25ng／mL时，联合浓度分别为0、2、5、10、15、20μg／mL的Ion刺激大鼠淋巴细胞，胞内IFN-γ／IL-4的表达阳性率分别为（1．19±0．26）％／（2．46±0132）％、（1．23±0．21）％／（2．56±0．86）％、（3．08±0．56）％／（12．01±2．01）％、（4．01±O．48）％／（9．80±1．80）％、（3．98±1．78）％／（11．85±4．83）％、（3．76±1．08）％／（10．78±2．35）％。结论选用工作浓度为5～10μg／mL的Ion联合工作浓度为25ng／mL的PMA刺激培养大鼠淋巴细胞即可起到较好的激活作用，而且不会带来如CD4细胞下调、流式细胞术设门难度增加等干扰因素。在该浓度下，CD3／CD8和CD4两种设门方案均可用于大鼠Thl／Th2细胞检测。

wt1定量联合FCM在急性髓细胞白血病MRD监测中的临床应用

目的探讨在急性髓细胞白血病(AML)中Wilms瘤基因1(wt1)mRNA定量联合多参数流式细胞术(FCM)分析监测微小残留病灶的临床应用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测35例AML患者的wt1表达水平;将患者根据不同亚型分组检测;并且对9例缓解和4例复发患者进行随访,检测wt1表达水平。采用FCM分析AML中微小残留病灶(MRD)水平。结果与对照组比较,AML病例组wt1表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。在初诊的各种AML亚型中,M2亚型wt1表达水平最高,M6亚型wt1表达水平最低。9例随访患者提示在达到完全缓解时wt1表达水平下降,而4例随访复发患者在复发时再次升高。FCM检测MRD在不同阶段异常髓系细胞比例明显不同。联合qRT-PCR和FCM技术对MRD检测的敏感性和特异性大大提高,两者具有一致性;利用ROC曲线对复发病例进行分析得到的监测阈值为3.33%。结论在急性髓细胞白血病中wt1 mRNA定量联合多参数流式细胞术分析可用于监测MRD、评估治疗效果、预后及预测疾病复发风险。

hUVECs在不同切应力作用下的形态及纤毛发生

分别应用紫杉醇荧光和免疫荧光标记法显示h UVECs(human umbilical vein endothelial cells,h UVECs)在不同切应力加载下微管骨架的装配动态及初级纤毛的形态发生。结果表明,以梯度切应力加载24 h,随着切应力增大,细胞由梭形逐渐变圆,长宽比降低,胞质微管向细胞核周围集结并发生装配;14 dynes/cm2切应力加载48 h后,微管向切应力方向延伸导致细胞呈长梭型,微管停止装配;以15 dynes/cm2切应力加载28 h后,纤毛基体在细胞表面的定位不可见,纤毛微管解聚;再以1 dynes/cm2切应力加载18 h,又可观察到纤毛基体在细胞表面的重新定位。因此,切应力作用可诱导h UVECs形态变化,该变化经历了微管骨架的解聚、向细胞核方向聚集及重新装配过程;此外,切应力能够影响初级纤毛的形态发生,该现象可能导致了初级纤毛在心血管系统中的分布不均,并为"纤毛疾病"的治疗提供新的思路。

狼疮性肾炎感染与非感染患者之间淋巴细胞亚群的差异

目的:了解系统性红斑狼疮-狼疮性肾炎(SLE-LN)患者感染者与非感染者之间外周血T淋巴细胞亚群、B细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)的差异。方法:应用流式细胞仪对25例SLE-LN合并感染患者及25例SLE-LN不合并感染患者的外周血淋巴细胞亚群进行检测。结果:与未感染组相比,感染组患者的CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞显著降低,B细胞显著升高。SLE-LN患者感染者与非感染者之间的淋巴细胞亚群水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:免疫活性细胞介导的免疫机制在SLE-LN合并感染中起重要作用。

湖南矿必兴科技有限公司

矿兴磨矿业兴旺矿兴磨必不可少新型节能、环保高科技粉磨机矿兴磨应用范围矿兴磨广泛应用于建材、冶金、化工、矿山、能源、电力、耐火材料等行业中莫氏硬度8级以下,成品细度不高于-400目的各种物料的粉磨。如水泥（生、熟料）、石灰石、石灰、双飞粉、石膏、玻璃、砂岩、页岩、煤、焦碳、煤矸石、蛇纹石、矿渣、高炉渣、滑石、方解石、白云石、大理石、莹石、麦饭石、铁合金（硅铁、锰铁、铬铁等）、高岭土、凹凸棒土、钡盐、氧化铁红、明矾、钾盐、重晶石、铁矿、、铜矿、锰矿、镁矿、金属锰、硫磺、长石、石英、电石、烧结矿、铝钒土、磷矿石、钙镁磷肥、磷铵、尿素、偏硅酸钠、磷石膏、硫石膏、球团散矿等。

分析海外直接投资动机 积极合理有效利用外资

本文从国际资本流动的必然性及其分类情况，剖析了作为长期资本流动的海外直接投资倍受各国重视而居国际资本流动主导地位的原因；针对多年来庞大的海外投资军团对我国市场的冲击，在总结经验教训的基础上，分析了扩大引资对我国社会经济的正面效应及负面影响。提出了要客观分析海外直接投资的动机，从更高层面上认真贯彻积极合理有效地利用外资的方针。

Detwmination of Blood Flow in the Lower Leg of Patients with Diabetes Mellitus and the Effects of Treatment with the Principle of Vitali

Blood flow in the lower leg was determined in 50 cases of non-insulin dependent diabetesmellitus using an XLJ-2 bipolar rheoencephalometry impedance rheogram. In patients with leg pain (85legsi and diabetic foat (15 legs3, the blood flow of the lower leg was decreased as compared withhealthy legs (P<0. 01￣0. 001) . The group with diabetic foot showed a bigger decrease compared withthe leg pain group (PMO. 051 . Atter treatment with the principle of vitalizing blood and solubilizing throm-bus, 22 cases with leg pain (32 legs) showed a significant increase of blood flow in the lower leg (P<0. 001). The group with diabetic foot failed to show any significant increase, indicating the importance ofearly treatment. This method of determining blood flow in the lower leg will help early discovery of abnor-mal changes of blood supply in the lower leg. Treatment with the principle of vitalizing blood and solubiliz-ing thrombus can help improve the conditions of the patients.

应用协同射流控制的临近空间螺旋桨高增效方法

基于雷诺平均Navier—Stokes方程与多块搭接网格技术，数值模拟了协同射流（CFJ）翼型及桨叶的黏性绕流，分析了CFJ技术的增升减阻效果及工作机理。研究了CFJ的功率及效能比的分析方法，量化分析了cFJ的能量利用率。开展了喷口大小、喷口动量系数等参数对CFJ翼型性能的影响规律研究，并在此基础上开展了应用CFJ的临近空间螺旋桨高增效方法研究。结果表明：数值模拟结果与实验值吻合良好，在不同状态下，CFJ控制技术均能显著改善翼型气动性能。其中，最大升力系数提高了60％～130％；阻力系数降低了100％～440％，部分小迎角工况甚至出现负阻力系数，升阻比显著提高；翼型失速特性明显改善，失速迎角提高了近10°；能量利用率高，效能比可达440％。最终，在最优参数条件设置下，采用基于CFJ控制技术的临近空间螺旋桨可提高效率5％以上。

栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型吸附量的影响

目的 观察栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型（HSV-1）吸附过程中病毒吸附量的影响，以探讨其抗病毒作用机理。方法 采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FTrc）作为荧光探针标记病毒，以肝素钠为对照，借助流式细胞仪，通过收集多种不同的加药方式后细胞表面的荧光强度，来考察病毒吸附过程中病毒吸附量的变化及栀子提取物ZG对此变化的影响。结果 单纯疱疹病毒1型在Hep-2细胞表面吸附存在饱和性、特异性；肝素钠3种加药方式均能明显降低病毒吸附量，先加药后吸附及吸附和加药同时进行两种方式，优于先吸附后加药的方式，其吸附抑制率分别为84．76％和82．02％；栀子提取物ZG3种加药方式均能明显降低病毒吸附量，其中以吸附和加药同时进行组最为显著，吸附抑制率为68．46％。结论 栀子提取物ZG可能是通过作用于病毒吸附的多个环节来达到抑制HSV-1的吸附作用。

系统性红斑狼疮病人T和B淋巴细胞凋亡的观察

为了研究SLE的T、B淋巴细胞及其亚类的凋亡情况,采用碘化丙锭染色,在流式细胞仪下观察计数:22例SLE病人淋巴细胞(包括总体淋巴细胞、CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞和CDl9^+B细胞)凋亡率在培养0、24、48h时均较正常组有显著增高,并以CD4^+T细胞和CDl9^+B细胞在活动期SLE病人中凋亡更突出。此外,SLE病人,自身抗体产生愈多,其细胞凋亡率愈高;疾病活动度增高,凋亡率也较高。提示;SLE病人的淋巴细胞凋亡在体外加速,与其自身抗体产生有密切关系,在其发病机制中起一定的作用。

白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞增殖和凋亡影响观察

目的:研究白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphomas,CTCL)Hut-78细胞株体外增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用不同浓度的白藜芦醇(5、10和20μmol/L)作用于人皮肤CTCL Hut-78细胞,24和48h后MTT检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;TUNEL末端标记法和AnnexinⅤ-FITC双标记流式法检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响。结果:经5、10和20μmol/L浓度的白藜芦醇处理24h后,细胞A值分别为1.202±0.094、0.568±0.019和0.535±0.033,与0μmol/L A值(1.272±0.107)比较,差异有统计学意义,P<0.01。各浓度作用48h后,细胞A值分别为0.604±0.095、0.314±0.042和0.260±0.055,与0μmol/L A值(0.781±0.020)比较,差异有统计学意义,P<0.01;与作用24h后同浓度A值比较,差异均有统计学意义,P<0.01。随着时间和浓度的增加Hut-78细胞生长均受到不同程度的抑制,呈明显的浓度和时间依赖性。经5、10和20μmol/L浓度的白藜芦醇处理24h后,HUT-78细胞抑制率分别为(5.28±2.64)%、(53.52±10.86)%和(56.13±10.79)%,与0μmol/L抑制率(0)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;HUT-78细胞凋亡率分别为92.35%、96.39%和98.56%,与0μmol/L凋亡率(55.7%)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;各浓度作用48h后,HUT-78细胞抑制率分别为(22.85±10.98)%、(59.77±5.44)%和(66.52±7.80)%,与0μmol/L细胞抑制率(0)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;与作用24h后同浓度细胞抑制率比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论:达到5μmol/L的白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞产生明显的抑制增殖作用,白藜芦醇主要通过诱导HUT-78细胞凋亡,其中主要是早期凋亡抑制其增殖。