不同炮制方法对泽泻中泽泻醇B23-乙酸酯的影响

目的探讨不同炮制方法对泽泻中泽泻醇B23-乙酸酯的影响。方法采用RP-HPLC法。反相HypersilODSC18柱(200mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(70∶30)为流动相,检测波长为208nm。结果樟帮麸炒法的质量分数为0.1565%,生品为0.155%,而其他炮制品质量分数均低于生品。结论不同炮制方法、辅料对泽泻各炮制品中泽泻醇B23-乙酸酯含量有一定的影响。

泽泻有效部位对肾草酸钙结石模型大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的研究泽泻有效部位对大鼠肾草酸钙结石形成和肾组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响,探讨泽泻抑制尿结石形成的机制。方法采用现代植化和生物活性导向分离的方法分离、提取泽泻的有效部位。将30只大鼠随机分成3组对照组、模型组、泽泻组。以乙二醇和1α-羟基维生素D3ig制备大鼠肾草酸钙结石模型。检测各组大鼠血及尿生化、肾Ca2+水平、24h尿草酸分泌量和肾组织病理学改变,并采用免疫印迹(Western blotting)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别观察各组大鼠肾组织OPN蛋白及其mRNA的表达水平。结果ig泽泻有效部位(主要以四环三萜类化合物为主)大鼠的血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾Ca2+水平、24h尿Ca2+分泌量、肾组织草酸钙晶体的分布、OPN蛋白及其mRNA的表达水平均显著低于模型组(P<0.01)。结论泽泻有效部位能抑制大鼠肾组织OPN的表达,减少肾组织草酸钙结晶的沉积,从而能有效抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。

保健食品建泽泻及其混淆品的PCR-RFLP分子鉴别

目的:寻找简易可重复的分子标记方法对保健食品建泽泻及其混淆品进行鉴定。方法:对建泽泻及其混淆品的rDNA ITS区进行PCR扩增、测序,运用ClustalX、Mega3.0、DNAMAN 4.0等软件对ITS区进行序列分析和PCR限制性酶切图谱分析(PCR-RFLP)。结果:依据建泽泻及其混品完整的rDNA ITS区片段长度,将慈菇和甘薯两种混淆品首先区分开;再通过PCR-RFLP分析,可将建泽泻从川泽泻、窄叶泽泻、小泽泻和芋等混淆品中成功鉴别出来。结论:rDNA ITS片段长度不足以用于鉴别保健食品建泽泻原料的真伪;PCR-RFLP可对保健食品建泽泻及其混淆品进行简便而快捷的分子鉴别。

柱前衍生RP-HPLC法测定泽泻中氨基酸的含量

目的 分析不同产地泽泻中氨基酸含量及其特征性。方法 采用邻苯二甲醛 (OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC)联合柱前衍生RP HPLC测定泽泻中的 17种氨基酸。结果 氨基酸质量浓度与峰面积呈良好的线性关系 ,r均在 0 99以上。不同产地泽泻中氨基酸含量有一定差别。结论 该方法适宜泽泻药材中氨基酸含量的测定。

建泽泻HMGR基因保守区片段克隆与组织分布研究

目的:对建泽泻三萜类成分生物合成关键酶HMGR基因保守区片段进行克隆与组织分布研究。方法:以建泽泻总RNA为模板,通过RT-PCR方法,克隆HMGR基因的保守区片段,并用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测HMGR基因在不同器官中的表达情况。结果:所克隆的建泽泻HMGR基因保守区序列长度为458 bp(Gen-Bank注册号为HQ913638),与药用植物黄花蒿、柴胡、杜仲、丹参的同源性分别达到86.8%、88.2%、88.2%、85.5%,QRT-PCR结果显示HMGR基因在建泽泻各器官中均有表达,其中叶片表达量较高,块茎、根、叶柄表达量相对较低。结论:首次分离并报道了建泽泻HMGR基因保守区片段克隆及其组织分布,为泽泻三萜类成分生物合成途径的阐明和生物工程应用提供科学依据。

基于ITS2序列的建泽泻及其混伪品鉴定研究

目的利用ITS2条形码鉴别建泽泻及其混伪品。方法提取28份建泽泻及其混伪品基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,测序结果提交至GenBank,同时从GenBank下载泽泻科植物及其混伪品10种17条ITS2序列,对提交与下载的45条序列,应用MEGA 5.1软件进行序列比对,计算种内和种间距离,采用相似性搜索法、最近距离法进行鉴定分析,并构建NJ系统进化树直观反映鉴定结果。结果建泽泻、川泽泻ITS2序列长度均为311bp,存在1个变异位点;建泽泻与泽泻科泽泻属物种距离较近,与泽泻科其他属及其混伪品之间遗传距离较远;NJ树结果显示建泽泻及其混伪品均可明显区分,表现出良好的单系性。结论 ITS2序列作为DNA条形码可以准确快捷地鉴别建泽泻及其混伪品,为其种质资源鉴定及临床安全用药提供了新的技术手段。

东方泽泻实时荧光定量PCR内参基因的筛选及AoSS基因的组织表达特性分析

【目的】筛选适用于东方泽泻实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的内参基因,并分析其鲨烯合酶基因(AoSS)的表达特性,为后续研究东方泽泻原萜烷型三萜生物合成调控及诱导机制打下基础。【方法】从东方泽泻转录组中选取内参基因18S rRNA、EF1α、GAPDH、ACT、UBQ和UBC,应用qRT-PCR检测其在不同组织和激素处理下的表达情况,并借助Delta CT、GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder对其表达稳定性进行分析评价。以筛选到的内参基因分析AoSS基因在不同组织中的表达情况。【结果】18S r RNA、GAPDH和EF1α基因在东方泽泻不同组织的表达稳定性较高,但18S rRNA、UBC和EF1α基因在不同激素处理下的表达稳定性均较高。以18S rRNA、GAPDH和EF1α基因为内参分析AoSS基因在东方泽泻不同组织中的表达量情况,结果显示,AoSS基因在东方泽泻不同组织中均有表达,其表达情况基本一致,均在东方泽泻块茎中表达量最高,其次是叶柄和叶,而在根中表达量最低。【结论】18S rRNA、GAPDH和EF1α基因是研究东方泽泻不同组织中基因表达分析的首选内参基因;18S rRNA、EF1α和UBC基因是研究激素处理下基因表达的首选内参基因。AoSS基因的表达具有组织特异性,其可能在东方泽泻的生长发育中发挥重要的调控功能。

三种中药提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

分别用水、60%乙醇和95%乙醇为提取溶剂,对泽泻、青风藤和白芷进行提取,通过测定黄嘌呤氧化酶(XOD)-黄嘌呤反应体系终产物尿酸的吸光度,得出各提取物对XOD的抑制率,并判断其抑制机制。实验结果显示,在一定浓度范围内,泽泻和青风藤两种醇提物对XOD的抑制率较高,泽泻60%乙醇提取物抑制率最高达86%,青风藤95%乙醇提取物抑制率最高为71.2%,白芷水提取物对XOD抑制率较高,最高为72.7%。结果表明,三种中药的提取物均具有较强的体外抑制XOD活性的作用。

川泽泻鲨烯合酶基因的原核表达研究

目的:构建川泽泻鲨烯合酶(squalene synthase,SS)基因的原核表达载体。方法:在建泽泻SS基因序列的基础上,采用RT-PCR技术,从川泽泻新鲜叶片中克隆得到SS基因,并在BL21(DE3)细胞中分别用不同的表达载体、IPTG浓度、温度诱导该蛋白表达。结果:该基因在大肠杆菌中表达,但为包涵体,将其克隆到带有GST标签的pGEX-6t-1载体中进行原核表达并未改善蛋白溶解性;30℃诱导蛋白表达最佳;不同IPTG浓度对蛋白表达影响不大。结论:川泽泻的原核表达为后续对该基因的生物学功能及川泽泻品质改良奠定了基础。

泽泻田莲纹夜蛾的诱集试验及田间药效试验初报

开展莲子与泽泻按1∶9比例面积间栽的诱集试验,结果表明:莲子对莲纹夜蛾具有较强的诱集作用,且以太空莲36号品种诱集效果最好,其泽泻田间莲纹夜蛾的种群数量明显轻于对照。田间药效试验结果显示:15%安打SC、10%除尽SC这2种化学农药和2.5%菜喜SC、20%米满SC这2种生物农药对莲纹夜蛾幼虫都具有较高防效;99%绿颖OL作为一种对害虫无抗性风险的农药,是今后莲纹夜蛾综合治理的理想药剂。

泽泻田节肢动物群落结构特征

根据泽泻田节肢动物物种的组成和数量,按照营养和取食关系,将群落划分为害虫、捕食性天敌、寄生性天敌和中性昆虫亚群落,采用群落分析的多个参数比较分析了群落的结构特征.研究结果表明:泽泻田节肢动物群落物种较为丰富,共采集到节肢动物101种(或类),隶属于昆虫纲中10个目60科及蛛形纲中1个目9科,合计150555个个体.其中,捕食性天敌25种,寄生性天敌32种,害虫25种,中性昆虫19种,天敌物种数所占比例高达56.43%.从各类群个体数量看,害虫占有绝对优势,其个体数量是天敌类群的2.3倍,约为中性昆虫的2.4倍,害虫类群个体数量高主要是由于莲缢管蚜和莲纹夜蛾的个体数量过高造成的,二者合计占害虫类群个体数的92.53%,占整个泽泻田节肢动物群落总个体数的50.06%.

不同栽培模式对泽泻田节肢动物群落的影响研究

研究不同栽培模式对泽泻田节肢动物各类群的物种数和种群数量的影响，结果表明：模式A（传统栽培方式＋施用复合肥，CK）的物种数明显少于其他栽培模式，其物种数可相差6～8种；在个体数量上，模式A（CK）〉模式B（传统栽培方式＋施用复合肥和有机肥）〉模式C（垄畦栽培方式＋施用复合肥）〉模式D（垄畦栽培方式＋施用复合肥和有机肥），模式A（CK）的个体数量比模式D的高出9035。由此说明，通过改变生境可以达到调节泽泻田间节肢动物种群的效果，其中，采用模式D则既可显著控制泽泻田间害虫种群的发生量，又可有效培育和营造天敌及中性昆虫种群，体现出具有持续控制害虫种群的独特优势。

莲缢管蚜为害泽泻的防治指标及田间药效试验研究

莲缢管蚜是危害泽泻生长的重要害虫之一。药效试验结果表明,2.5%菜喜SC、1.5%普乐CS、25%阿克泰WG、3%莫比朗EC和20%康福多EC对莲缢管蚜具有良好的防效,适宜在泽泻生产上使用。莲缢管蚜虫口数量与块茎产量损失率之间相关式:在生长前期,Y=-0.331 8+0.397 8X(r=0.993**);在生长中期,Y=0.041 2+0.247 4X(r=0.950*);在生长后期,Y=-0.003 6+0.113 9X(r=0.922*)。根据经济阈值的计算公式,结合莲缢管蚜虫口数量与块茎产量损失率之间的相关式,制定出了不同时期选用不同药剂的防治指标。

泽泻花苔培育与田间管理技术研究初报

目的研究出泽泻花苔培育与田间规范化栽培管理技术。方法开展田间对比试验以及对当地药农传承下来的泽泻传统管理经验进行整理、提炼、优化。结果初步研究总结出一套符合现代中药材栽培管理要求的泽泻花苔规范化培育及田间管理技术。结论经大田示范检验,泽泻花苔的单产水平可由原来的50-75kg/667m2提高到200-260kg/667m2,病虫害可以得到安全、有效地控制,经济效益显著,市场开发前景良好,据此说明泽泻花苔培育与田间管理技术总体科学可行,具较强的实践指导性和科学性,采用这一技术将有助于促进该种药材综合有效利用和可持续生产。

泽泻田优势天敌对莲纹夜蛾幼虫的捕食作用研究

通过开展几种优势天敌对莲纹夜蛾的捕食作用研究发现,在相同猎物密度下,拟水狼蛛雌成蛛的日捕食量>草间小黑蛛雌成蛛的日捕食量,龟纹瓢虫雌成虫的日捕食量>黑翅小花蝽雌成虫的日捕食量,说明拟水狼蛛和龟纹瓢虫对莲纹夜蛾1-2龄幼虫具有较强的控制能力.经拟合,它们各自的捕食功能反应均属HollingⅡ型反应,其圆盘方程分别为:Na=1.00260N/(1+0.98404N)(草间小黑蛛雌成蛛)、Na=0.94118N/(1+0.02804N)(拟水狼蛛雌成蛛)、Na=0.44238N/(1+0.00375N)(龟纹瓢虫雌虫)、Na=0.50312N/(1+0.01350N)(黑翅小花蝽雌成虫).a`/Th值的大小是反映天敌对猎物控制能力强弱的参数,供试的这4种天敌对莲纹夜蛾1-2龄幼虫控制作用效果的a`/Th值大小依次为:龟纹瓢虫雌成虫的a`/Th>拟水狼蛛雌成蛛的a`/Th>黑翅小花蝽雌成虫的a`/Th>草间小黑蛛雌成蛛的a`/Th.此外,研究结果还表明,天敌的捕食作用有较强的种内干扰效应,随着捕食者密度的增大,平均捕食量逐渐减少,捕食作用率也相应降低.

泽泻的资源调查及外观性状评价

目的:了解泽泻的资源分布、产销情况,为泽泻的保护与栽培推广等提供基础依据。方法:文献调查、访查和实地调查等;外观性状评价。结果:药用泽泻主产于福建、四川、江西和广西。种植总面积超过5 500 hm2,蕴藏量1 300万kg以上。结论:市场流通的泽泻商品来源于两种植物,且商品规格较混乱,应进一步规范,引导市场认真对待。

泽泻不同部位药食功能成分分析比较

目的:以泽泻不同部位(食用期泽泻花苔、泽泻叶、泽泻茎和药用泽泻块茎)作为研究对象,检测其药食功能成分包括总蛋白、总脂肪、氨基酸、总多糖、总黄酮、总多酚及5种泽泻特有萜类成分(环氧泽泻烯、泽泻烯醇、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B和11-去氧泽泻醇B)的含量并进行比较,为泽泻不同部位在功能保健及食品应用方面提供一定依据。方法:采用国家标准方法测定总氨基酸、总蛋白、总脂肪、总多酚的含量;采用硫酸-苯酚法和NaNO2-NaOH-Al(NO3)3紫外分光光度计法分别测定总多糖和总黄酮含量,采用超高效液相法测定环氧泽泻烯、泽泻烯醇、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B和11-去氧泽泻醇B 5个泽泻萜类成分的含量。结果:泽泻不同部位均含有总蛋白、总脂肪、氨基酸等所检测药食功能成分,其中泽泻花苔总蛋白、氨基酸、总脂肪和总多酚含量均高于其他部位((328.0±19.1)、(219.7±10.5)、(48.0±11.5)mg/g和(17.63±0.60)mg/g),总多糖、总黄酮和活性萜类成分则在泽泻块茎中含量较高((9.26±0.86)、(2.07±0.12)mg/g和(5.315±0.545)mg/g),泽泻茎、叶中各成分含量相对较低。结论:泽泻不同部位均含有药食功能成分,其中泽泻花苔富含各种营养成分,具有很大的开发价值。

不同产地泽泻HPLC指纹图谱建立及模式识别

目的建立不同产地泽泻HPLC指纹图谱,并对其进行模式识别。方法泽泻乙腈提取物的分析采用Hanbon Hedera ODS-2 C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相水-乙腈,梯度洗脱;柱温35℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长210 nm。对结果进行化学模式识别(聚类分析、主成分分析和正交最小二乘法判别分析)。结果 19批四川产地样品指纹图谱中有17个共有峰,11批广西产地样品指纹图谱中12个共有峰,相似度均大于0.94。正交最小二乘法判别分析结合HPLC-MS/MS及对照品比对,筛选出泽泻醇B、泽泻醇A、11-去氧泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇O、24-乙酰泽泻醇A6种主要差异性成分。结论该方法稳定可靠,可将四川、广西产地泽泻进行明显区分,从而用于该药材的质量控制与评价。

氮肥运筹对川泽泻干物质积累和分配的影响

目的以不施氮肥为对照,不同施氮量和不同施氮配比组合对川泽泻干物质积累与分配规律影响的研究。方法取样测定的方法。结果泽泻各器官干物质积累量均随施氮量增加而明显上升,但其块茎的积累量与施氮量>150(kg/hm2)时,增长幅度不大;泽泻各器官干物质分配率在不同施氮量下也有差异,其块茎干物质最大分配率的施氮量为150(kg/hm2),同时块茎膨大期追施氮肥(75 kg/hm2)最利于块茎的生长。结论施氮量为150(kg/hm2)和施氮配比为1∶1的组合对川泽泻干物质积累和分配最佳。

基于高通量测序的不同生态环境东方泽泻块茎转录组分析

目的:探索不同生态环境对东方泽泻生理活动及其药效成分原萜烷型三萜生物合成调控的分子基础。方法:通过Illumina HiSeq测序平台获取种植于福建和四川的东方泽泻块茎转录组数据并进行功能注释,基于|log_(2)FC|>0.58(FC为差异倍数)、P<0.05的筛选条件获得差异表达基因。结果:转录组测序共获得50652条unigenes,有22689条unigenes注释到京都基因与基因组百科全书(KEGG)、NR、SwissProt、COG、基因本体(GO)和Pfam数据库。从福建和四川2种环境生长的东方泽泻之间筛选到3878条差异表达基因,其中2082条在福建东方泽泻中上调表达,1796条在四川东方泽泻中上调表达,差异基因主要参与植物防御反应、光合作用、淀粉和蔗糖代谢、萜类生物合成等生理活动,包括5个原萜烷型三萜生物合成通路上的关键酶基因。此外,东方泽泻移栽四川后,与三萜生物合成相关的转录因子和细胞色素P450(CYP450)基因表达也发生了显著变化。结论:利用高通量测序技术和生物信息分析获得了不同生态环境下东方泽泻转录组信息特征,为阐明生态环境对东方泽泻原萜烷型三萜生物合成的调控机制提供参考。