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小发夹RNA对白血病K562细胞血管内皮生长因子受体Flt-1基因表达的抑制作用
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作者 沈慧玲 许文林 +1 位作者 袁伟 江云伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期1413-1418,共6页
本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得... 本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT-PCR和免疫印迹反应检测flt-1 mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT-PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达。结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1 shRNA序列能不同程度干扰flt-1基因和蛋白在细胞中的表达,两组阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46.1%和65.4%;flt-1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力(4.3±1.2)%较对照组(12.7±1.9)%及(9.6±1.7)%明显降低(p<0.01)。结论:VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转染入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平下降。这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移。 展开更多
关键词 白血病 K562细胞 血管内皮生长因子 flt-基因 小发夹RNA RNA干扰
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绵羊妊娠期生殖组织Flt-1基因的克隆及其组织表达量的检测
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作者 姜怀志 戢爽 +2 位作者 高爱萍 李向军 杨永梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期76-79,共4页
试验从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、卵泡组织中提取总RNA,根据已发表的绵羊Flt-1基因的cDNA序列设计引物,以β-Actin基因为内参,采用RT-PCR扩增绵羊Flt-1基因,将扩增产物克隆于载体后进行序列分析,并应用Kodak Science ... 试验从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、卵泡组织中提取总RNA,根据已发表的绵羊Flt-1基因的cDNA序列设计引物,以β-Actin基因为内参,采用RT-PCR扩增绵羊Flt-1基因,将扩增产物克隆于载体后进行序列分析,并应用Kodak Science 1 D、Bandscan图像分析软件,推断出不同组织中Flt-1基因的表达量。结果表明,从雌性绵羊妊娠期不同阶段生殖道各组织上皮均获得82 bp的Flt-1基因的扩增片段,且Flt-1基因在雌性绵羊生殖道各组织内的表达量不同。说明Flt-1基因对绵羊的妊娠维持起着重要的作用。 展开更多
关键词 flt-1基因 绵羊 组织表达
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急性髓系白血病细胞Flt-3表达及Flt-3/ITD突变分析 被引量:6
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作者 汪亚伦 王彤 +2 位作者 许凤 冮岩 王杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期446-449,共4页
本研究探讨急性白血病(acuteleukemia,AL)细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)发病的关系。采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株,其中包括20例AML细胞株和57... 本研究探讨急性白血病(acuteleukemia,AL)细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)发病的关系。采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株,其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株(ALL),5株CML细胞株的Flt-3表达和Flt-3/ITD突变。结果表明:77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性,阳性表达率为62%,其中20例AML细胞株中有12例阳性,阳性表达率为60%;57例ALL细胞株中有33例阳性,阳性表达率为58%。5例CML细胞株中有3例阳性,阳性表达率为60%。12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达(阳性率为8.3%),测序显示存在有29bp的两个编码重复序列,其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列。未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL(P<0.05)。结论:Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达,在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列。Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助于ALL特别是AML的诊断。 展开更多
关键词 AML flt-3基因 flt-3/ITD突变
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胶质瘤中血管内皮生长因子受体FLT-1和KDR mRNA表达的差异及其与肿瘤病理的关系 被引量:1
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作者 韩小弟 赵继宗 +3 位作者 王嵘 范文红 吴燕 范明 《北京医学》 CAS 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
目的 探讨胶质瘤中血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR和FLT 1的基因表达水平及其与肿瘤病理的关系。方法 应用逆转录PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR)方法检测 4 3例胶质瘤和 5例正常脑组织标本中KDR和FLT 1... 目的 探讨胶质瘤中血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR和FLT 1的基因表达水平及其与肿瘤病理的关系。方法 应用逆转录PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR)方法检测 4 3例胶质瘤和 5例正常脑组织标本中KDR和FLT 1的基因表达情况 ,结合凝胶分析仪半定量的检测肿瘤标本中特异性mR NA的含量 ,并与肿瘤的临床病理进行比较。结果 电泳结果 :FLT 1在 6 4 5bp左右可见一明亮的条带 ;而KDR在1 0 0 0bp以上 (1 2 4 1bp)可见一明亮的条带 ,其亮度均随肿瘤级别的升高而升高。FLT 1mRNA的相对含量Ⅰ~Ⅳ级依次为 :0 .6 4± 0 .0 8、0 .86± 0 .1 0、1 .2 3± 0 .0 6、1 .37± 0 .0 6 ;正常脑组织为 0 .34± 0 .0 4。KDRmRNA的相对含量Ⅰ~Ⅳ级依次为 :0 .70± 0 .0 8、0 .92± 0 .1 1、1 .6 2± 0 .36、2 .86± 0 .30 ,正常脑组织为 0 .4 0± 0 .0 7。VEGF两种受体mRNA的相对含量随肿瘤级别的增加而增加 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 0 1 )。结论 两种受体之间的差异明显 ,总的来说 ,KDR要比FLT 1的mRNA含量高 ,而随着胶质瘤恶性程度的增加 ,这种差别明显增大 ,尤其在胶质母细胞瘤中 ,KDR的平均相对mRNA含量是FLT 1的 展开更多
关键词 胶质瘤 血管内皮生长因子受体 flt-1基因 KDR基因 肿瘤病理学 逆转录PCR
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Effect of Weikangning on gastric cancer cell growth and expression of vascular endothelial growth factor and its receptors KDR and Flt-1 被引量:6
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作者 Qing-MingLi Fang-JuKan Cun-YunMin 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第7期938-942,共5页
AIM: To observe the effect of Chinese traditional herbal decoction Weikang-ning (WKN) on cell growth and expression of VEGF and its receptors KDR and Flt-1 in gastric cancer cell line MGC-803. METHODS: A total of 120 ... AIM: To observe the effect of Chinese traditional herbal decoction Weikang-ning (WKN) on cell growth and expression of VEGF and its receptors KDR and Flt-1 in gastric cancer cell line MGC-803. METHODS: A total of 120 male Wistar rats were divided into control group, high dose, medium dose and low dose groups fed with natural saline, 20, 10, and 5 g/kg of WKN, respectively. The experimental animals were finally killed for the preparation of drug-containing serum. The gastric cancer cell MGC-803 was cultured with the drug-containing serum drawn from the rats in different groups. We observed the growth condition of the cancer cells with light microscope and flow cytometer. The expression of mRNA of VEGF and its receptors KDR and Flt-1 was detected with RT-PCR. RESULTS: The proportion of cells in G0-G1 phase was (65.40±0.41)%, (56.92±0.62)%, (55.89±0.69)% in high, medium and low dose groups respectively vs(41.35±0.55)% in control group (P<0.01), while the cells in G2-S and S phases were (11.62±0.62)% and (22.99±0.69)%, (17.08±0.80)% and (26.00±0.71)%, (19.37±0.57)% and (24.74±0.64)% in high, medium and low dose groups, respectively, vs(23.65±0.56)% and (35.00±0.60)% in control group (P<0.01). The expression of mRNA of VEGF and its receptors was significantly decreased, the area of electrophoresis bands (AREA), the absorptivity of mean optical density (A) and the product of AREA and A were significantly lower in WKN-administered groups than that in control group(P<0.01). CONCLUSION: The decoction of WKN suppresses the growth of gastric cancer cell MGC-803 and decreases the expression of mRNA of both VEGF and its receptors KDR and Flt-1. 展开更多
关键词 Weikang-ning Gastric cancer VEGF KDR flt-1 MGC-803
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CD、Flt-1基因共表达重组质粒的构建及对BT325细胞增殖的抑制作用 被引量:2
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作者 张鹏飞 周建华 +2 位作者 周婉琦 张亚卓 王红云 《立体定向和功能性神经外科杂志》 2014年第1期13-17,共5页
目的构建CD、Flt-1基因共表达重组质粒,并检测其对BT325细胞增殖抑制的影响。方法从大肠杆菌及人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-RCR)扩增CD基因和FLT-1基因片段,应用基因重组技术将CD基因和Flt-1基因片段克隆... 目的构建CD、Flt-1基因共表达重组质粒,并检测其对BT325细胞增殖抑制的影响。方法从大肠杆菌及人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-RCR)扩增CD基因和FLT-1基因片段,应用基因重组技术将CD基因和Flt-1基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,经酶切鉴定及DNA序列分析证实所构建的载体。转染BT325细胞株,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用。结果 RT-RCR方法获得CD基因和Flt-1基因片段,酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFPC1-CD-Flt-1构建成功。转染72h后实验组细胞生长速度是control组的(33.2%±5.4%),流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于control组,细胞出现凋亡,实验组细胞的凋亡率为(19.7%±5.45%)。结论成功构建真核表达重组质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1,其体外可抑制BT325增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 CD基因 flt-1基因 基因重组 BT325细胞
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CD、Flt-1基因对原代培养的恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的影响 被引量:2
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作者 张鹏飞 周建华 +2 位作者 周婉琦 张亚卓 王红云 《立体定向和功能性神经外科杂志》 2014年第3期144-147,共4页
目的研究CD、Flt-1基因对恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的抑制作用。方法 CD、FLT-1基因共表达质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1转染恶性胶质瘤细胞,ELISA法检测培养液上清中VEGF含量,实时定量PCR及免疫组化检测细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,通过MTT... 目的研究CD、Flt-1基因对恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的抑制作用。方法 CD、FLT-1基因共表达质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1转染恶性胶质瘤细胞,ELISA法检测培养液上清中VEGF含量,实时定量PCR及免疫组化检测细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞活性的影响。结果转染72h后实验组细胞VEGFmRNA及蛋白水平显著降低,培养液中VEGF含量降低,细胞活性受到抑制,流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组,细胞出现凋亡。结论重组质粒pEGFPC1-CD-Flt-1,其体外可抑制恶性胶质瘤细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,抑制细胞活性、诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 CD基因 flt-1基因 恶性胶质瘤
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Flt-1基因对BT325细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响
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作者 张鹏飞 周建华 +2 位作者 周婉琦 张亚卓 王红云 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2014年第9期941-944,共4页
目的 探讨Flt-1基因对BT325胶质瘤细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响.方法 从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增Flt-1基因片段,基因重组技术将Flt-1基因片段插入真核表达载体pEGFP-C1中,双酶切及DNA测序... 目的 探讨Flt-1基因对BT325胶质瘤细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响.方法 从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增Flt-1基因片段,基因重组技术将Flt-1基因片段插入真核表达载体pEGFP-C1中,双酶切及DNA测序鉴定pEGFP-C1-Flt-1重组质粒.pEGFP-C1-Flt-1重组质粒转染BT325胶质瘤细胞,转染后72hELISA法检测培养上清液中VEGF含量,MTT法检测细胞的增殖情况.结果 RT-PCR方法证实从人脐静脉血内皮细胞中成功获得1 384 bp Flt-1基因片段;经双酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFP-C1-Flt-1构建成功;ELISA检测发现,BT325细胞被转染后72 h VEGF含量转染组为(56.3±41.2) pg/ml,空载体转染组为(95.5±35.3) pg/ml(P<0.05);MTT法检测发现,转染组和空载体转染组的生存率分别为(42.6±3.7)%和(92.8±6.6)%(P<0.05).结论 Flt-1基因可抑制BT325细胞VEGF的蛋白表达,抑制细胞增殖. 展开更多
关键词 flt-1基因 基因重组 BT325细胞
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