fmnl2基因沉默抑制SW620体外侵袭能力的机制

目的研究fmnl2基因沉默抑制SW620体外侵袭能力的机制。方法筛选并建立fmnl2基因沉默的SW620细胞;反转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测干扰效率;Boyden试验检测fmnl2基因对SW620侵袭能力的影响。利用Active Rho pull-down试验和Western blot检测fmnl2基因沉默后,细胞中RhoA、RhoB、RhoC活性和蛋白水平的变化;利用Western blot检测RhoA/Rock信号转导通路中3种效应蛋白[Phospho-肌球蛋白轻链(MLC)、Phospho-LIM激酶(LIMK)、Phospho-Cofilin]及细胞内肌动蛋白纤维(F-actin)、核内MAL的蛋白变化。检测fmnl2基因沉默前后,磷脂酸(LPA)对细胞体外侵袭能力、RhoA的活性和蛋白水平、Phospho-MLC及MLC的影响。结果 fmnl2基因沉默后明显抑制SW620体外侵袭能力。fmnl2表达沉默后,细胞中RhoA活性降低,但蛋白水平没有明显变化;细胞中Phospho-Cofilin、Phospho-LIMK、Phospho-MLC、F-actin和核内MAL的蛋白水平均减少。fmnl2表达沉默后,LPA对细胞体外侵袭能力,RhoA活性及Phospho-MLC均无影响。结论 fmnl2表达沉默后,通过抑制RhoA/Rock信号转导通路,会影响肿瘤细胞的侵袭运动能力。

FMNL2基因对大肠癌细胞SW620增殖、侵袭及转移的影响

目的探讨FMNL2基因对大肠癌细胞SW620增殖、侵袭及转移的影响。方法将大肠癌SW620细胞随机分为三组,其中稳定转染FMNL2-shRNA质粒的细胞作为shFMNL2组,稳定转染Pgenesil-1质粒的细胞作为对照组,单纯SW620细胞作为空白组。扫描电镜下观察三组细胞超微结构;Real-time PCR法检测FMNL2 mRNA表达,Western blotting法检测FMNL2蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性(光密度值),平板克隆形成试验检测细胞克隆数,Transwell小室及Boyden小室试验检测细胞运动及侵袭能力。结果透射电镜下,空白组细胞均具有癌细胞的一般特征;对照组细胞内无退变的细胞器,细胞质基质密度均匀,细胞表面可见许多微绒毛和伪足;shFMNL2组细胞质内出现大小不等空泡及自噬体,细胞质局部粗面消失,细胞膜及核膜基本完整,细胞表面绒毛大量减少,未发现伪足。shFMNL2组FMNL2 mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组及空白组(P均<0.05)。培养第1、2、3、4、5、6、7天时shFMNL2组细胞光密度值均低于对照组及空白组(P均<0.05)。shFMNL2组细胞克隆数、Transwell小室及Boyden小室穿膜细胞数均较对照组及空白组减少(P均<0.05)。结论抑制FMNL2基因表达导致大肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力下降;FMNL2基因可能是大肠癌侵袭、转移的相关基因之一,其可能作为大肠癌潜在的治疗靶点。

FMNL2基因沉默对人大肠癌细胞体内外增殖及侵袭能力的影响

[目的]探讨FMNL2基因沉默对人大肠癌细胞体内外增殖及侵袭能力的影响。[方法]筛选并建立FMNL2基因沉默的SW80/M5细胞系;荧光定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率;CCK8法检测FMNL2对SW80/M5增殖能力的影响;流式细胞仪检测细胞周期;侵袭小室实验检测其对SW80/M5侵袭能力的影响;裸鼠皮下成瘤实验和脾注射法体内转移实验检测FMNL2基因表达沉默对SW80/M5在体内增殖、侵袭能力的影响。[结果]FMNL2基因沉默后显著抑制SW80/M5在体内外增殖、转移及侵袭能力(P<0.05)。[结论]FMNL2与大肠癌多种恶性生物学功能的调控密切相关,可能是潜在的治疗靶点。