循环microRNAs与局灶节段性肾小球硬化患者疾病活动的关系

目的:分析循环中与局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者疾病活动相关microRNAs(miRNAs),为后续探讨循环miRNAs在FSGS发病中的作用奠定基础。方法:选取年龄、性别匹配的活动性FSGS患者及正常对照各9例,提取FSGS患者及对照组血浆总RNA,采用TaqMan低密度芯片(TaqMan Low Density Array)进行miRNA表达谱分析,筛选出在活动性FSGS患者循环中表达上调的miRNAs分子;然后再选取32例活动性FSGS患者血浆,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法对筛选出的miRNAs分子进行验证,同时与非活动性FSGS患者进行比较。采用ROC曲线分析循环miRNA区分活动性FSGS、非活动性FSGS和正常对照的效能。结果:与正常对照相比,活动性FSGS患者循环miRNA-125b,miRNA-186和miRNA-193a-3p水平显著上调(P<0.05)。ROC曲线分析显示,循环miRNA-125b、miRNA-186和miRNA-193a-3p区分活动性FSGS与正常对照的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.882、0.789和0.910。与非活动性FSGS相比,活动性FSGS患者循环中miRNA-186水平也明显上调。结论:活动性FSGS患者循环miRNA-125b、miRNA-186及miRNA-193a-3p较正常对照显著升高,其中miRNA-186的升高与疾病的活动性关系更密切。

尿液microRNAs作为局灶节段性肾小球硬化疾病活动生物标志物的研究

目的:观察局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液中microRNAs(miRNAs)的表达变化,探讨miRNAs的变化与FSGS患者疾病活动性之间的关系。方法:检测尿液miRNAs的表达谱,及其在活动性FSGS患者、非活动性FSGS患者和正常对照者尿液中的水平,分析尿液中miRNAs的表达变化与尿蛋白、白蛋白等临床指标之间的关系。并与膜性肾病及糖尿病肾病患者尿液miRNAs水平进行比较,评判其特异性。结果:活动性FSGS组尿液miRNA-196a,miRNA-30a,miRNA-155和miRNA-490的表达水平不仅显著高于正常对照组且高于非活动性FSGS组(P<0.001)。尿液miRNA-196a,miRNA-155,miRNA-30a和miRNA-490的变化倍数与FSGS患者的尿蛋白、血清白蛋白、血清总胆固醇存在显著相关性(P<0.05)。在膜性肾病和糖尿病肾病患者尿液中未观察到上述变化。激素治疗有效的FSGS患者的尿液中miRNA-196a,miRNA-490,miRNA-30 a表达水平随着病情的缓解也明显下降(P<0.05)。激素治疗无效患者的尿液中,miRNAs表达水平治疗前后无显著差异。结论:尿液miRNA-196 a,miRNA-30 a和miRNA-490表达水平与FSGS患者疾病的活动性密切相关,提示尿液miRNA-196a,miRNA-30a和miRNA-490检测有可能作为判断FSGS疾病活动性和反应疗效的新的生物标志物。

局灶节段性肾小球硬化患者肾组织microRNAs表达分析

目的:比较局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者与正常对照肾组织中差异表达的microRNAs(miRNAs),探讨miRNAs在FSGS发病中的作用。方法:选取年龄、性别匹配的FSGS患者6例及正常对照3例,留取肾组织标本,提取总RNA。将6个FSGS及3个正常对照样品分别混合后,采用Taq Man低密度芯片(Taq Man Low Density Array)进行miRNAs表达谱分析,筛选出在FSGS患者肾组织中表达丰富并上调的miRNAs分子;选取14例FSGS患者和15例正常对照,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法对筛选出的miRNAs分子进行验证;采用Pearson相关分析FSGS患者肾组织中miRNAs表达水平与临床病理指标之间的相关性。结果:芯片结果显示正常对照组检测到358个miRNAs,FSGS组检测到427个miRNAs,其中109个miRNAs在FSGS肾组织中表达上调。qRT-PCR结果显示与正常对照相比,FSGS患者肾组织中miRNA-155、miRNA-194和miRNA-215表达显著上调(P<0.05)。相关性分析显示,FSGS患者肾组织miRNA-215表达与肾小球硬化比例、总胆固醇水平正相关。结论:FSGS患者肾组织miRNA-155,miRNA-194和miRNA-215表达上调,它们与FSGS发生和发展之间的联系值得进一步研究阐明。

T细胞来源的细胞外囊泡通过miR-193a诱导足细胞损伤

目的:探讨T细胞来源的循环细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)中miR-193a在局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者足细胞损伤中的作用。方法:收集经肾活检确诊的FSGS患者和健康志愿者外周血,分离EVs。芯片和RT-PCR筛选出患者EVs中升高的microRNA(miRNA),再经体外足细胞试验,选出能导致足细胞骨架改变的miRNA。用目标miRNA转染T细胞系(Jurkat细胞),获得富集目标miRNA的EVs。给予Balb/c小鼠尾静脉注射Jurkat细胞EVs,测定尿蛋白/肌酐;用Jurkat细胞来源的EVs与足细胞共孵育,检测细胞骨架改变。验证miR-193a损伤足细胞的分子机制。结果:FSGS患者外周血EVs中miR-193a水平明显上调,并能导致足细胞骨架损伤。FSGS患者循环EVs可导致小鼠蛋白尿和足细胞骨架结构紊乱。富含miR-193a的Jurkat细胞EVs通过下调WT1,导致足细胞骨架结构损伤、诱导小鼠产生蛋白尿和足细胞足突融合。结论:本研究发现FSGS患者循环中T细胞来源的EVs通过miR-193a可诱导足细胞损伤。