以叶酸受体为靶向的阳离子脂质体的制备与性质考察

为了研制一种能通过叶酸受体途径靶向肿瘤细胞的叶酸受体靶向脂质体,将叶酸（folate,folic acid,F）、聚乙二醇二胺（polyoxyethylene-bis-amine,NH2-PEG-NH2）、琥珀酸酐（succinic anhydride,SUC）和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（distearoylphosphatidylethanolamine,DSPE）按序共价连接,并使用薄层色谱和飞行时间质谱确证合成产物为叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（folate-polyethyleneglycol-distearoylphosphatidylethanolamine,F-PEG-DSPE）。膜材选用二棕榈酰磷脂酰胆碱（dipalmitoylphosphatidylcholine,DPPC）,3β-[N-（N′,N′-二甲基胺乙基）胺基甲酰基]胆固醇（3β-[N（N′,N′-dimethylaminoethane）carbamoyl]cholesterol,DC-Chol）和F-PEG-DSPE,以10∶10∶0.75（摩尔比）的配比,以荧光素标记的阴离子葡聚糖（dextran fluorescein anionic,DFA）为模型,用薄膜分散法制备含DFA的叶酸受体靶向脂质体,其包封率较高（〉55%）、稳定性好,平均粒径为144 nm,体外释放慢。MTT法考察其对细胞的毒性结果表明该阳离子脂质体具有一定的细胞毒性,在低浓度时（0.012 5-0.1μmol.L-1）脂质体的细胞毒性与DC-chol浓度成正比。流式细胞技术检测KB细胞和HepG2细胞对DFA脂质体的摄取,结果表明叶酸受体靶向的长循环阳离子脂质体能提高细胞对脂质体的摄取。该研究为进一步研究叶酸受体靶向阳离子脂质体在肿瘤基因治疗中的应用提供了理论基础。

叶酸-脂质体制备及对HeLa细胞靶向作用

目的 研制一种能通过叶酸受体途径靶向肿瘤细胞的叶酸脂质体。方法 将叶酸（Ｆ）、聚乙二醇二胺（ＮＨ２ＰＥＧＮＨ２）、琥珀酸酐（ＳＵＣ）和卵黄磷脂酰乙醇胺（ＥＰＥ）按序共价连接，并与胆固醇（ｃｈｏｌ）、卵黄磷脂酰胆碱（ＥＰＣ）以１０∶４０∶５６配比，用成膜水化结合冷冻熔融超声法制备内含钙黄绿素叶酸脂质体，以负染色电镜法确定其粒径；用荧光显微镜观察ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体与脂质体的差异；以荧光定量法确定浓度、时间、游离Ｆ、磷脂酶Ｄ（ＰＬＤ）和磷脂酰肌醇特异磷脂酶Ｃ（ＰＩＰＬＣ）对ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体影响程度。结果 （１）ＦＰＥＧＳＵＣＥＰＥ连接物为色谱纯；叶酸脂质体平均粒径为２００ｎｍ。（２）叶酸脂质体进入ＨｅＬａ细胞质内量明显高于脂质体。（３）浓度增大、时间延长，叶酸脂质体摄取量递增幅度明显减缓；ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体量均在脂质体的４倍以上。（４）５０μｍｏｌ／Ｌ游离Ｆ可使叶酸脂质体摄取量降低５０％；ＰＩＰＬＣ（０．２Ｕ／ｍｌ）和ＰＬＤ（０．５ｍｇ／ｍｌ）处理后，叶酸脂质体摄取量分别降低７１％和７０％。

叶酸受体靶向伊马替尼pH敏感脂质体的制备工艺及质量评价研究

目的:运用改良的硫酸铵梯度法制备叶酸受体靶向伊马替尼pH敏感脂质体(FSLI),并评价其质量。方法:采用改良的硫酸铵梯度法制备FSLI,以包封率为指标进行制备工艺的优化;采用琼脂糖凝胶CL-4B柱分离脂质体和游离药,HPLC法测定FSLI的包封率;运用Zeta PALS粒径电位分析仪测定脂质体的平均粒径及Zeta电位,透射电镜观察脂质体的形态;运用动态透析法考察FSLI在不同pH环境中的药物释放情况,并考察FSLI在不同pH、37℃水浴中的粒径随时间的变化情况。结果:制得的FSLI为圆形或类圆形的大单室脂质体,平均粒径为(155.2±1.92)nm,Zeta电位为-(29.36±3.21)mV,平均包封率为(90.7±1.70)%。FSLI在pH 7.4的中性环境中药物释放缓慢24 h累积释放度为2.76%而在pH 5.5的酸性环境中药物释放显著加快24 h累计释放度均达到93.2%表现出非常强的pH敏感性能。FSLI在pH 7.4的中性环境中不具有融合性能而在pH 5.5的酸性环境中粒径迅速增大脂质体发生融合。结论:采用改良硫酸铵梯度法制备的FSLI,能获得较高的包封率,并具有良好的pH敏感性能。

叶酸脂质体对乳腺癌4T1细胞的体内靶向性研究

目的探讨叶酸脂质体对乳腺癌4T1细胞的体内靶向性,为开展叶酸介导的靶向性抗肿瘤药物的研究奠定基础。方法采用薄膜分散法结合冷冻超声法制备叶酸脂质体,原子力显微镜(AFM)确定叶酸脂质体的粒径大小和表征叶酸脂质体的表面形态结构。采用鼠源4T1细胞建立小鼠原位乳腺癌模型,原位皮下分别注射包封钙黄绿素的叶酸脂质体和脂质体,用荧光显微镜定性观察和荧光定量法测定叶酸脂质体与脂质体对肿瘤细胞的富集量。结果叶酸脂质体富集于原发性和转移性乳腺癌细胞的数量明显高于脂质体(P<0.05)。结论通过细胞表面叶酸受体的介导作用,叶酸脂质体能明显富集于表达叶酸受体的乳腺癌细胞上,即具有肿瘤靶向性;本研究为开展叶酸介导的靶向性抗肿瘤药物的研究提供了依据。

靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体的制备及其体外抗肿瘤活性

目的制备具有靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,并对其进行表征,再进一步考察其体外抗肿瘤活性。方法合成叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯并用红外光谱和质谱进行表征,采用薄膜分散法制备靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,用透射电镜、激光粒度仪、高速离心法分别测定脂质体的形状、粒径、电位、包封率,MTT法考察脂质体对肿瘤细胞的抑制作用。结果经红外光谱及质谱分析证实,成功合成了靶向材料叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯;制备的靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体在透射电镜视野中粒径大小均一,约160 nm,Zeta电位约4.0 mV,包封率达90%以上;体外细胞毒性显示,叶酸修饰的蟾酥提取物长循环脂质体的IC_(50)值为0.46μg/mL,普通长循环脂质体的IC_(50)值为0.76μg/mL。结论成功合成叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯靶向材料并构建了靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,可靶向性抑制肿瘤细胞生长。

叶酸受体靶向多烯紫杉醇膜修饰脂质体的抗肿瘤活性

研究叶酸受体靶向多烯紫杉醇膜修饰脂质体(FA-PDCT-L)的体内外抗肿瘤活性。采用有机溶剂注入法制备FA-PDCT-L并利用透射电镜、粒径zeta电位测定仪考察其理化性质。采用CCK-8法检测多烯紫杉醇注射液(DCT-I)、未修饰DCT脂质体(DCT-L)和FA-PDCT-L在不同孵育时间对MCF-7及A549肿瘤细胞的生长抑制作用,并进行体外溶血性实验;将荷瘤小鼠随机分为DCT-I、DCT-L、FA-PDCT-L和对照组(生理盐水),10 mg.kg 1.d 1尾静脉注射给药,实验结束后测定各组小鼠体重、瘤重,并计算抑瘤率,进行生存分析。结果显示:FA-PDCT-L对MCF-7和A549的IC50值在各时间点均显著低于DCT-I组及DCT-L组,且在体外4 h内未见溶血现象。与对照组相比,DCT-I、DCT-L和FA-PDCT-L组小鼠瘤重均减少,其中FA-PDCT-L的作用最为显著,抑瘤率为79.03%(P<0.05);FA-PDCT-L生存曲线和中位生存时间显著高于DCT-I和DCT-L。该研究表明FA-PDCT-L具有良好的抗癌活性,有望成为肿瘤治疗中DCT的优良载体。

靶向熊果酸脂质体的体内分布及其对裸鼠移植瘤的治疗作用

目的研究叶酸受体靶向性熊果酸脂质体的体内组织分布及肿瘤靶向作用。方法以叶酸靶向材料叶酸-聚乙二醇-胆固醇的半琥珀酸盐作为靶向分子,再用聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(m PEG-DSPE)对脂质体表面进行结构修饰,利用薄膜分散法制备长循环脂质体(F-PEG-L-UA);测定裸鼠心、肝、脾、胃、肾及肿瘤组织的药物含量,考察熊果酸体内的分布差异,比较叶酸受体靶向作用和单纯给药在组织分布的不同;并构建裸鼠口腔癌皮下移植瘤模型观察F-PEG-L-UA对裸鼠口腔癌的抑制作用。结果与游离熊果酸相比,熊果酸脂质体明显增加药物在体内长循环的时间,在肝、肾和肿瘤组织中药物浓度明显高于其他组织,说明熊果酸集中分布于肝脏和肾脏进行代谢,并且具有良好的肿瘤靶向性。F-PEG-L-UA与其他各组相比较,肿瘤生长受到明显抑制,其瘤体积减少约50%(P<0.05);而游离熊果酸和非靶向组的瘤体积没有得到有效控制。结论本实验制备的F-PEG-L-UA具备高效的肿瘤靶向性,是一种有效的抗肿瘤药物传递系统。