VEGF对小鼠卵巢类固醇合成相关基因表达的影响及其机制

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对小鼠卵巢类固醇合成相关基因表达的影响及其机制。方法利用四环素可逆调节VEGF表达的转基因小鼠模型,采用聚合酶链反应(PCR)法鉴定小鼠基因型,通过喂食强力霉素将20只小鼠分为VEGF表达正常组(Dox+)与VEGF表达抑制组(Dox-)(n=10)。采用Western blotting检测卵巢组织中VEGF蛋白的表达情况;荧光定量PCR检测VEGF、VEGF受体2(KDR)及已知在卵泡发育中发挥作用的基因卵泡刺激素(FSH)、抑制素B(INHBB)mRNA的表达情况。HE染色观察卵巢组织的变化。取小鼠卵巢组织提取总RNA进行转录组测序,并通过FPKM、log2FC值分析相关差异基因。结果与Dox+组比较,Dox-组VEGF mRNA和蛋白水平明显降低,KDR mRNA水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与Dox+组比较,Dox-组卵泡发育障碍,并出现闭锁卵泡。根据测序结果分析筛选出两组小鼠的卵泡发育相关基因、类固醇合成相关基因具有明显差异(P<0.05);富集分析发现小鼠卵巢中VEGF主要参与调控卵巢类固醇生成等通路。荧光定量PCR结果显示,与Dox+组相比,Dox-组小鼠卵巢组织中卵泡发育相关基因(INHBB、FSHR)明显上调(P<0.05),类固醇合成的关键基因(StAR、CYP11A1、3β-HSD)明显下调(P<0.05),定量结果与测序结果基本一致。结论VEGF抑制可使小鼠卵泡发育障碍,其可能的机制是通过下调卵巢类固醇合成相关基因FSH、INHBB的表达从而阻碍胆固醇代谢来实现的。

小鼠卵泡颗粒细胞在生殖衰老过程中基因、蛋白表达变化研究

为研究生殖衰老对小鼠卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)发育的影响,本试验对课题组前期的转录组与蛋白质组数据进行了分析,这些数据来自于6周龄(年轻组)、10月龄(衰老组)的健康雌性昆明(KM)小鼠。结果显示,转录组数据与蛋白组数据得到的差异基因与差异蛋白的符合程度并不高,共筛选出95个基因和蛋白同时在转录水平和蛋白水平发生上调,有22个基因在转录水平和蛋白水平发生下调,采用qPCR与Westernblot方法对其中的相关基因的表达水平进行了验证。结果表明,与年轻组相比,衰老组卵泡颗粒细胞的凋亡相关基因Ndrg1和Sting1表达显著上升(P<0.05),抗氧化相关基因Gpx7、生长因子相关基因Gdf9、Bmpr1b与激素合成、分泌相关基因Esr2、Lhcgr表达显著下降(P<0.05)。综上说明机体发生生殖衰老后卵泡颗粒细胞的凋亡水平上升,抗氧化功能下降,激素作用途径受损。

颗粒细胞增殖或凋亡在家禽卵泡发育中的调控作用

作为影响家禽繁殖功能的重要器官,卵巢生理生殖活动活跃,可产生大量卵泡,而在家禽生殖过程中,绝大多数卵泡都闭锁或退化吸收。家禽卵巢中卵泡的生长和闭锁不仅受激素系统的调控,还受到卵巢内的激素类固醇、生长因子、细胞因子和细胞内蛋白等分子调控。除此之外,颗粒细胞也已被证明在卵泡生长过程中发挥着重要作用。文章讨论了影响卵泡生长和闭锁的因素,重点阐述了颗粒细胞的调节作用。

卵泡液中TGFβ1和性激素水平的测定及临床意义

目的探讨控制性超排卵(COH)周期取卵(OPU)日卵泡液中转化生长因子β1(TGFβ1)及性激素的含量与卵母细胞成熟、受精和妊娠结局的关系。方法酶联免疫反应法测定90例COH周期OPU日卵泡液中TGFβ1和性激素的含量,卵泡液按相应卵母细胞的成熟度、受精情况和妊娠结局分组。结果成熟组卵泡液中TGFβ1、促黄体生成素(LH)和孕酮水平高于未成熟组[(2824.4±1414.4)pg/mlvs(2015.0±1191.7)pg/ml,(0.71±0.35)mIU/mlvs(0.54±0.21)mIU/ml,(3837.1±942.8)ng/mlvs(3188.1±617.4)ng/ml,均为P<0.05];受精组卵泡液中TGFβ1、LH和孕酮浓度均明显高于非受精组;妊娠组卵泡液中TGFβ1和LH浓度明显高于非妊娠组[(3547.4±1536.3)pg/mlvs(2169.2±1180.4)pg/ml,(0.74±0.25)mIU/mlvs(0.52±0.29)mIU/ml,均为P<0.05]。雌二醇浓度各组间无显著差异。结论COH周期OPU日卵泡液中适量的LH和孕酮促进卵母细胞的成熟;TGFβ1和LH浓度与相应卵泡的卵母细胞成熟及其后的受精和妊娠结局有关。

不育妇女卵泡液血管内皮生长因子水平与妊娠结局相关性

目的 探讨卵泡液血管内皮生长因子 (VEGF)与妊娠结局的相关性。 方法 对 50例首次接受体外受精治疗的不育妇女 ,按其定量酶联免疫法测定卵泡液VEGF水平 ,编制频数分布表 ,分为 4组 ,记录患者卵母细胞质量、受精率、卵裂率及优质胚胎的百分比。 结果 (1 )卵泡液VEGF水平 450～ 50 9、51 0～ 70 9、760～ 1 0 0 9、1 0 1 0～ng/L时的受精率分别为 (49± 1 8) %、(71± 1 9) %、(52± 1 5) %、(3 4± 1 2 ) % ;卵裂率分别为 (68± 1 6) %、(84± 1 1 ) %、(71± 2 6) %、(71± 2 4) % ;优质胚胎比例分别为 (2 3±1 1 ) %、(74± 2 1 ) %、(50± 1 2 ) %、(2 2± 1 4 ) % ;妊娠率分别为 0 %、55%、45%、0 %。 (2 )相关分析结果 ,卵泡液VEGF水平越高卵细胞越成熟 ,但过高导致卵细胞退化 (r=0 .58,P<0 .0 5)。 结论 卵泡液VEGF水平过低或过高会导致卵母细胞质量、受精率、卵裂率及优质胚胎比例下降 ,导致临床妊娠率降低 ,卵泡液VEGF水平在 51 0～ 760ng/L 。

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集及卵泡闭锁相关因子GDF-9表达的影响

目的:观察补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)大鼠始基卵泡募集及卵泡闭锁相关因子生长分化因子-9(Growth differentiation factor-9,GDF-9)表达的影响。方法:应用Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9基因表达水平;采用Western Blot法检测各组大鼠卵巢内GDF-9蛋白表达水平。应用TUNEL法检测各组大鼠卵巢内细胞凋亡情况。结果:与空白组比较,模型组卵巢内的GDF-9 mRNA与蛋白表达水平明显减少;与模型组比较,治疗组卵巢内的GDF-9基因与蛋白表达明显增加。结论:补肾调冲方可通过调节GDF-9 mRNA与蛋白的表达,促进POF大鼠始基卵泡募集,促进生长卵泡发育,抑制卵泡异常闭锁,从而达到促进排卵,调节卵巢功能,治疗POF的目的。

表皮生长因子对胎鼠卵巢卵泡体外发育和类固醇激素分泌的影响

表皮生长因子 (EGF)是参与卵巢功能调节的一个重要肽类因子。关于 EGF对小鼠胚胎期卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的作用至今未见报道。本研究以单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和 5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标 ,利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究了 EGF对胎鼠卵巢卵泡发育和类固醇激素分泌的作用。结果发现 :1EGF处理组胎鼠卵巢总卵泡数、生长卵泡数和卵巢内 5个最大卵母细胞平均直径从培养第 7天起即显著高于 ITS对照组直至培养结束 ;2 EGF在培养后期显著促进胎鼠卵巢分泌睾酮 ,但对雌二醇的基础分泌无影响 ;3EGF处理组胎鼠卵巢在培养过程的后期引起贴壁的卵巢边缘脱离培养板底壁发生卷边现象 ,丧失卵母细胞皮质 -髓质生长模式。结果提示 :EGF在胎鼠卵巢原始卵泡生长起始中起重要作用 ;同时 EGF促进胎鼠卵巢小腔前卵泡 /卵母细胞进一步生长、发育和体外存活 ;

评估经阴道超声检查对女性不孕症患者卵泡发育及排卵的价值

目的:评估经阴道超声检查对女性不孕症患者卵泡成长发育及排卵的诊断价值。方法:选取本院2010年1月至2014年3月收治的女性不孕症患者140例,随机分为观察组和对照组各70例。观察组采用经阴道超声方法监测卵泡成长发育及排卵;对照组使用排卵测试纸和检测基础体温方法监测不孕女性患者的排卵情况。结果:对照组卵泡成熟比率为65.7%,观察组卵泡成熟比率为70.0%,有差异但无统计学意义(P>0.05);观察组受孕率(48.6%)高于对照组(24.3%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组中,受孕成功患者卵泡成熟比例高、无卵泡闭锁及卵泡黄素化、子宫内膜厚度不匀比例小,与未受孕成功的患者比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组中,受孕成功患者卵泡增长速度快、成熟卵泡的直径大、子宫内膜厚度低,与未受孕成功的患者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经阴道超声方法能实时监测女性不孕症患者的卵泡成长发育及排卵情况,有效的帮助患者找寻不孕症的病因并指导患者顺利受孕,提高了不孕症女性受孕的成功率,具有临床应用意义。

经阴道彩色多普勒观测卵巢动脉PI、RI值和卵泡发育的关系

应用超九彩色多普勒超声诊断议,采用经阴道彩色多普勒探头,观察了66例妇女的卵巢动脉血流PI、RI值的变化和卵泡发育的关系,其结果表明随着卵泡的发育,卵巢动脉舒张期血流有规律的增加,而PI和RI值明显下降。PI、RI的变化和卵巢新生血管增加血管阻力下降有关,此技术在探寻不明原因的不孕及预测排卵有重要意义。

影响牛卵母细胞体外发育能力的因素

本文重点从三个方面探讨了影响卵母细胞成熟发育 能力的制 约因素：①通过分析卵母细胞核成熟和胞质成熟的过程及成熟时各细胞器的状态，指出在体 外培养系统中卵母细胞的核成熟，并不代表胞质的成熟，推迟卵母细胞减数分裂的恢复能够有 效促使胞质成熟；②针对母牛卵巢的功能结构和形态变化、卵泡发育程度及母牛发情周期的 不同阶段等有关内容的实验材料，分析了卵泡发育过程中的几种关键因素对卵母细胞发育能 力的影响，为了获得较多具有发育潜力的卵母细胞，提出了采集母牛卵巢的适宜情期阶段；③ 根据卵母细胞发育的不同的阶段，提出采取不同培养液能提高卵母细胞的发育力。

高脂饮食诱导的肥胖对SD大鼠卵泡发育及IGF-1/PI3K/Akt通路的影响

目的探讨高脂饮食诱导的肥胖对SD大鼠卵泡发育及胰岛素生长因子/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(IGF-1/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法实验于2017年1月-2018年1月在武汉市第一医院中心实验室进行。选取20只清洁级雌性SD大鼠,随机数字表法分为正常饮食组(10只)与高脂饮食组(10只)。正常饮食组普通饮食喂养,高脂饮食组高脂饮食喂养,10周后检测2组大鼠血脂水平;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠卵巢组织形态;采用放射免疫法检测血清卵泡发育相关激素水平;采用ELISA法检测血清炎性因子及卵巢组织中氧化应激指标;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测IGF-1/PI3K/Akt通路相关蛋白表达水平。结果与正常饮食组相比,高脂饮食组大鼠发育不良卵泡比率升高(χ^2/P=41.848/0.000),体质量、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,睾酮(T)水平,白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)及卵巢组织中丙二醛(MDA)、酸性磷酸酶(ACP)水平均显著升高(t=14.495、10.878、5.914、4.351、4.183、7.977、17.253、4.362、4.490、8.400,P<0.01);雌激素(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)水平及卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平均显著降低(t=8.357、7.140、4.422、2.859、3.558、6.535、2.781,P<0.01);卵巢组织IGF-1、p-Akt、p-PI3K蛋白表达水平均显著升高(t=7.597、7.806、7.662,P<0.01)。结论高脂饮食诱导的肥胖可能抑制卵泡优势发育,其可能作用机制与IGF-1/PI3K/Akt通路激活有关。

卵泡膜细胞与卵巢功能的调控

卵泡膜细胞作为卵巢中组成卵泡的3种主要细胞之一,在卵巢的各项功能如甾体合成、卵泡发育和卵泡闭锁中都发挥了一定的作用。卵泡膜细胞起源于卵巢中类似成纤维细胞样的基质细胞,其可分泌雄激素,与卵泡刺激素(FSH)相互作用促进颗粒细胞增殖,促进卵泡的发育。有研究认为应当把卵泡膜细胞在基底膜外开始分化作为卵泡生长的起点。某些卵泡膜细胞源性生长因子可促进有丝分裂,阻止颗粒细胞凋亡,在卵泡闭锁过程中发挥重要的调控作用。故探讨卵泡膜细胞在卵巢功能调控中的作用有临床实际意义。

生长分化因子-9与卵泡发育和卵巢早衰

生长分化因子-9是重要的卵母细胞源性生长因子。其在促进卵母细胞生长与分化以及颗粒细胞增殖、卵丘膨胀、抑制颗粒细胞和卵泡膜细胞分化的过程中起重要作用。卵巢早衰是病因不清又无有效治疗手段的复杂疾病。研究认为,卵巢内始基卵泡形成数目的减少、已形成的卵泡闭锁速度加快和对促性腺激素刺激不敏感是造成卵巢早衰的主要病因。生长分化因子-9参与了这一过程。

催乳素及生长因子对体外培养的鸡卵泡膜细胞增殖的调节作用

目的和方法：本文利用建立的鸡卵泡膜细胞无血清培养，研究了一些激素及生长因子对鸡卵泡膜细胞增殖的调节作用。结果：ＰＲＬ能刺激体外培养的鸡卵泡膜细胞增殖，并具有剂量依从关系，其中１０００ｎｇ／ｍｌ的ＰＲＬ达到最大刺激效果，使膜细胞增殖３５５％；ＬＨ、ＥＧＦ、Ｉｎｓ、ＣＴ和Ｔｆ亦均能刺激鸡卵泡膜细胞增殖，且具有剂量依赖关系。

卵泡液中血管内皮生长子和甾体激素水平对卵母细胞成熟和受精的影响

目的探讨卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期取卵日卵泡液中血管内皮生长因子(VEGF)和甾体激素水平与卵母细胞成熟和受精的关系。方法收集在本中心接受ICSI治疗的男方因素不育患者取卵日卵泡液105例,采用电化学发光法(ECLIA)检测卵泡液中雌二醇(E_2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测VEGF水平。卵泡液按照相应卵母细胞成熟度及激素VEGF水平分别进行分组。结果成熟组卵母细胞对应的卵泡液中VEGF水平高于未成熟组(P<0.05),而低于退化组(P<0.05);卵泡液VEGF水平在500～650 ng/L时卵母细胞成熟率、受精率最高(P<0.05);E★水平在退化组显著低于成熟组(P<0.05);P水平三组比较均无显著性差异(P>0.05);T水平在未成熟组和退化组均显著高于成熟组(P<0.05);10≤P/E_2≤30组卵子成熟率最高(91.11%)(P<0.05)。结论卵泡液中,VEGF水平在500～650 ng/L时卵母细胞成熟率、受精率较高。卵母细胞的成熟及退化与卵泡液中甾体激素环境关系密切,卵泡液P/E_2 10～30范围时卵母细胞成熟率较高。

血管生长调节因子与卵巢发育的关系

旨在探讨血管内皮生长因子(VEGF-120)、促卵泡激素(FSH)、2-甲氧基雌二醇(2-ME2)、4-羟基雌二醇(4-OHE2)对卵泡生成的影响。通过对比试验,将试验组分别腹腔注射上述4种药品,一段时间后,HE染色统计分析卵巢中不同大小卵泡数量的变化、卵泡周围血管发育情况及定量分析VEGF、FLK-1表达情况。结果表明,VEGF-120组和FSH组大卵泡数增加,血管发育良好,VEGF和FLK-1基因表达增加;2-ME2和4-OHE2组大卵泡数减少,血管发育情况较差。综合分析发现,血管簇发育良好的卵泡生长状态良好,卵泡的生长与血管的发育存在一定关联。

生长分化因子9与卵泡发育研究进展

生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF-9)属于TGF-β超家族,其在卵泡的发育过程中发挥着重要的作用。作者将对GDF-9基因的结构和功能,GDF-9的表达与调控及其对卵泡发育和颗粒细胞增殖的影响等方面进行详细的阐述,进而分析GDF-9基因与哺乳动物繁殖性能的关系。

PCOS患者卵泡液内IGF-Ⅰ的水平对卵母细胞成熟的影响

目的:探讨PCOS患者卵泡液内胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的水平与卵母细胞发育成熟的关系。方法:选取因PCOS接受IVF治疗的患者41例为PCOS组、同期因输卵管因素接受治疗的患者37例为对照组。在取卵日根据卵泡直径进行分组,分为≤14mm组和>14mm组,每例患者留取不同直径3～4个卵泡的卵泡液。分别检测PCOS组和对照组患者卵泡液内IGF-Ⅰ的水平,并分析其与卵母细胞成熟和受精的关系。结果:PCOS组IGF-Ⅰ、雌二醇(E2)、睾酮(T)的水平显著高于对照组(P<0.05),与卵泡直径不相关。在卵泡直径≤14mm组,PCOS患者卵母细胞成熟率和受精率明显高于对照组(P<0.05)。在卵泡直径>14mm组,PCOS组与对照组间卵母细胞成熟率和受精率无差异性。PCOS组卵泡液内IGF-Ⅰ水平和E2、T呈正相关(P<0.05)。结论:PCOS患者促排卵过程中卵泡液内IGF-Ⅰ水平的升高与卵泡直径无相关性,而卵泡液内高IGF-Ⅰ水平可影响PCOS患者小于14mm卵泡的卵母细胞成熟和受精。

阴道超声在卵泡发育不良中监测卵泡生长发育的应用价值

目的探讨阴道超声在卵泡发育不良中监测卵泡生长发育的应用价值。方法选取我院2012年1月～2014年12月收治的卵泡发育不良患者80例，依据受孕情况将患者分为受孕组（n=40）和未受孕组（n=40）两组。月经第8天到第18天定期应用德国西门子ACUSON X300超声诊断仪对两组患者进行监测，每1～2天1次，然后对两组患者不同月经周期的卵泡大小、子宫内膜厚度、卵巢动脉搏动指数（Pulsation index，PI）、阻力指数（Resistance index，RI）值进行统计分析。结果受孕组患者月经周期8d、11d、13d、15d、17d的卵泡大小、子宫内膜厚度均显著高于未受孕组（P〈0．05），卵巢动脉PI、RI值均显著低于未受孕组（P〈0．05）。结论阴道超声在卵泡发育不良中监测卵泡生长发育的应用价值高，能够对临床进行有效指导，使其对治疗方案进行及时调整，从而促进患者受孕几率的显著提升，值得在临床推广应用。

多囊卵巢综合征患者卵泡液中胰岛素样生长因子Ⅰ的表达

目的测定多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者取卵日卵泡液中胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin like growth factorⅠ,IGF-Ⅰ),雌二醇(estradiol,E2)及睾酮(testosterone,T)浓度的表达,探讨其在PCOS发病过程中可能的作用机制。方法对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的PCOS患者(50例)和非PCOS患者(52例)的卵泡液进行IGF-I、E2、T水平测定并分析其表达水平的差异。结果 PCOS患者卵泡液IGF-I、E2、T的水平均高于非PCOS患者(P<0.05)。PCOS患者与非PCOS患者卵泡液中IGF-I水平与E2、T的水平均呈正相关(P<0.01或P<0.05)。结论 IGF-I作为卵巢内局部重要的自分泌-旁分泌调节因子,可能参与了PCOS的发病过程。