五种常见嗜尸性蝇类的分子鉴定

为了解决法医学人员对于嗜尸性蝇类的鉴定难题,对中山市、广州市及西安市5种常见嗜尸性蝇类共17个样本,对其线粒体COⅠ基因的348bp大小片段进行了RFLP和DNA序列分析,采用ABI377测序仪测序,DNASTAR软件预测限制性位点,DdeⅠ,DraⅠ和HinfⅠ3种限制性内切酶消化,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测酶切结果,MEGA3.0软件包进行序列分析和构建系统发育树。结果表明:采用mtDNA扩增结合银染技术和DNA序列分析,均可以方便快捷地进行上述三地5种常见嗜尸性蝇类的种类鉴定。本文结果为法医昆虫学中嗜尸性昆虫DNA鉴定数据库的建立提供了数据资料。

四季尸食性蝇类参与尸体软组织分解过程初探

目的观察了解四季尸食性蝇类参与尸体软组织分解过程的规律。方法在室外自然环境中设置尸体,分别在春、夏、秋、冬季节,用肉眼观察尸体每一时段的变化及尸食性蝇类参与尸体分解的现象。结果在4个不同的季节中,尸体软组织分解过程中尸食性蝇类参与种类及虫态各不相同。通过观察获得尸体变化各阶段的大体历期,尸体变化各阶段常见的尸食性蝇种及虫态资料。结论观察所得资料可为推测晚期尸体的死亡时间提供参考。

利用嗜尸性蝇类生活史推测死亡时间

目的积累一些嗜尸性蝇类生活史的资料及群落组成的季节性变动规律。方法采用动物尸体作诱饵,分别对自然飞到诱饵上繁殖生长的8种嗜尸性蝇类的生活史及群落组成的季节性变动规律进行观察研究。结果夏季高温时段蝇类群落组成物种较为丰富,冬季低温时段蝇类种群较为单一。常见8种嗜尸性蝇类虫态经历时间在气温高时较短,气温低时较长。结论嗜尸性蝇类生活史及群落组成的季节性变动规律可为推测死亡时间提供依据。

福建省常见尸食性蝇类的COⅠ及16S rDNA序列鉴定

目的利用线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)以及16S核糖体脱氧核糖核酸(ribosomal deoxyribonucleic acid,rDNA)基因片段序列对福建省常见尸食性蝇类种属进行分子鉴定,探讨两种遗传标记的鉴别效力。方法收集福建9个地区案件现场捕获的常见尸食性蝇类样本22只,经形态学鉴定后提取DNA,扩增COⅠ及16S rDNA基因片段,测序后上传GeneBank数据库,使用BLAST、MEGA 10.0软件进行序列比对、同源性分析以及种内和种间遗传距离分析,并采用非加权组平均法(unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)分别构建福建省常见尸食性蝇类COⅠ及16S rDNA基因片段序列的系统发育树。结果经形态学鉴定,共收集到3科5属6种常见尸食性蝇类。基因序列分析结果显示,16S rDNA基因片段序列的种间遗传距离均数为1.8%~8.9%,种内遗传距离均数为0.0%~2.4%;COⅠ基因片段序列的种间遗传距离均数为7.2%~13.6%,种内遗传距离均数为0.0%~6.3%。结论COⅠ和16S rDNA基因片段序列均能够对不同蝇种的种属进行鉴别,16S rDNA对于福建省常见丽蝇科尸食性蝇类的种属鉴别价值更高。

药(毒)物对尸食性蝇类生长发育影响的研究进展

药(毒)物对尸食性蝇类生长发育影响是法医昆虫毒理学领域里一个十分重要的研究方向,其研究结果可对与药(毒)物相关死亡案件的死亡时间作出修正。随着近年来全球毒品及药物滥用情况的日趋严重,其所导致的死亡案件也越来越多。这类案件常常需要应用尸食性蝇类生长发育历期来推算死后经历时间(postmortem interval,PMI)。为了阐明该领域的研究进展以及未来研究的焦点和难点,本文在阐述法医昆虫毒理学概念和特点的基础上,按照不同的药(毒)物分类,对近年来药(毒)物对尸食性蝇类生长发育影响在国内外的研究进展进行了综述。研究表明,某些药(毒)物对尸食性蝇类生长发育具有一定的影响,且这种影响存在种属差异。目前,该领域的研究尚限于宏观现象观察阶段,其研究范围在不断拓宽,既有的研究也在进一步深化,但还有许多问题有待进一步探讨。

洛阳地区9种嗜尸性丽蝇28S rRNA和COⅠ基因序列分析

目的评价9种嗜尸性丽蝇的细胞核28S核糖体核糖核酸(ribosomalribonucleic acid,rRNA)和线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因序列在常见嗜尸性丽蝇种属鉴定中应用的可行性,为推断死亡时间提供技术支持。方法收集洛阳地区常见嗜尸性丽蝇标本23只,经形态学鉴定后,提取腿部DNA,扩增并测序细胞核28S rRNA和线粒体COⅠ基因片段,通过BLAST搜索进行序列比对,并分析所得序列的碱基组成,建立种内及种间进化分歧率,用邻接法构建系统发育树。结果形态学鉴定23只嗜尸性丽蝇归属于5属9种。获得28S rRNA中715bp和COⅠ基因中637bp的序列,在线BLAST比对结果显示相似度达99%以上,系统发育树显示9种蝇类可以较好聚类,与形态学鉴定结果一致。28S rRNA基因序列的种内差异为0,种间差异为0.001～0.033;COⅠ基因序列的种内差异为0～0.008,种间差异为0.006～0.101。结论联合28S rRNA和COⅠ靶基因序列片段可以有效区分本研究中的9种嗜尸性丽蝇,但对于近缘种的判定需要更多遗传标记的开发和联合应用。

洛阳地区常见嗜尸性丽蝇的COI序列分析

目的：应用多态性较高的线粒体细胞色素C氧化酶辅酶I（ CO I）对洛阳地区常见丽蝇科嗜尸性蝇类大头金蝇和丝光绿蝇进行序列分析,以期为嗜尸性蝇类的分子鉴定提供依据。方法收集洛阳地区常见大头金蝇和丝光绿蝇标本8只,经形态学分类鉴定后,Chelex-100法提取样本DNA,扩增目的片段后测序,使用相应软件对所得序列分析,建立种内及种间进化分歧率,并构建系统发育树。结果8个样本扩增获得CO I的长度为647 bp, CO I种间平均进化分歧率0.116,种间范围0.114-0.117,种内范围0-0.002。结论 CO I基因可以较好区分所涉及的蝇种,获得的基因序列是蝇类基因库的有益补充。

北京地区尸生性蝇类研究及其在法医鉴定中的应用

为提供法医学尸体死亡时间鉴定的准确性，对北京地区人尸上蝇类区系进行了系统调查（1994～1996）。发现本地区共有双翅目尸生性蝇类3科、12属、14种。其中常见种有红头丽蝇、丝光绿蝇、大头金蝇、肥须亚麻蝇、急钓亚麻蝇、棕尾别麻蝇和家蝇7种。对其常见种的幼虫进行不同温度和湿度下培养，观察常见环境因素，如日历期、风雨天气等因素对其生长发育速率的影响。结果表明，蝇类幼虫在其适宜生长发育的温度范围内，随着温度的升高发育速率加快，历期缩短；在同一温度和同一饲养条件下，发育速率因种而异；平均温度在28℃左右时，蝇类幼虫发育最快，尤其是1～2龄幼虫，时间为1天左右，且较稳定。这些数据对法医学推断死亡时间具有参考价值。

北京地区尸食性蝇类调查

目的了解北京地区目前尸食性蝇类数目及常见尸食性蝇类的季节分布。方法采用动物尸体或组织诱捕和饲养的方法采集尸食性蝇类标本,对其进行分类保存后进行观察和统计。结果北京地区尸食性蝇类为4科9亚科21属46种,其中有12种是北京新记录种。尸食性蝇类具有区域性分布和季节性分布的特性。结论北京地区尸食性蝇类及常见的尸食性蝇类季节分布数据,可为相关研究提供参考依据。

中国常见幼虫尸食性蝇种调查

为了进一步明确中国幼虫尸食性蝇类种类,1997年至今,在全国不同实验场地定点放置动物尸体或动物组织收集在上孳生的蝇类幼虫或蛹,待发育羽化出成虫后分类;同时随时收集在野外死亡的动物尸体及刑事案件中人尸体上孳生的蝇类幼虫,待发育羽化出成虫后分类鉴定。结果显示,常见幼虫尸食性蝇类有5科33属79种,其中35种为首次记述成虫和幼虫食性为尸食性,为后续尸食性蝇类研究提供一个明确的指向。

广州及杭州6种嗜尸性蝇类生长发育规律的观察分析

目的观察杭州和广州两地常见嗜尸性蝇类发育历期,为法医学应用昆虫学知识推断死亡时间提供基础数据。方法于杭州和广州两个地区,采集丝光绿蝇(Lucilia sericata Meigen)、大头金蝇(Chrysomyia megacephala Fabrious)、绯颜裸金蝇(Achoetandrus rufifacies Macquart)、棕尾别麻蝇(Boettcherisca peregrina Robinean-Desvoidy)、家蝇(Musca domestica Linnaeus)和巨尾阿丽蝇(Aldrichina grahami Aldrichnia)共6种常见蝇种的卵,采用不同温度下恒温饲养及密集取样方法,观察分析6种常见蝇种的发育历期时间。结果广州地区观察的丝光绿蝇、大头金蝇和绯颜裸金蝇,总体上在低温下发育历期较长,高温下较短,其中大头金蝇和绯颜裸金蝇耐寒能力较差。杭州地区观察的丝光绿蝇、大头金蝇、棕尾别麻蝇、家蝇和巨尾阿丽蝇,总体发育历期总趋势与广州相似,但较广州地区表现出更好的耐寒性。结论本文所获数据可为相关地区实际案例的侦破提供依据或参考。

四种常见尸食性蝇类活动与产卵习性

目的 明确常见尸食性昆虫成虫的活动习性和产卵习性 ,为法医实践中死后间隔时间的判断提供借鉴 ; 方法 在自然温度、室内恒温及包括夜晚、雨天等 2 6种不同环境条件对丝光绿蝇、大头金蝇、巨尾阿利蝇、棕尾别麻蝇成虫活动与产卵 (产仔 )习性进行了观察 ; 结果 昆虫成虫的活动与产卵习性在不同环境条件下往往不同 ,不同种类之间也存在差异 ,在利用昆虫发生规律为法医实践提供死亡时间等信息时 ,应具体问题具体分析。

mtDNA COI和ND5基因用于鉴别常见嗜尸性蝇类

目的对蝇类mtDNA 523bp COI和347bp ND5基因片段进行序列分析,评价其在以嗜尸性蝇类种属鉴定中应用的可行性。方法从广州(广东省)、湛江(广东省)、韶关(广东省)、沈丘(河南省)及蜂蛹寨(四川省)采集7种嗜尸性蝇类标本,进行形态学种属鉴定,取其腹部肌肉提取DNA,利用基因特异性引物对线粒体COI、ND5基因进行PCR扩增,产物经纯化后进行测序,MEGA 3.0软件对DNA序列进行碱基组成、进化分歧率和系统发育分析。结果进化分歧率ND5基因种内小于1.83%,种间大于2.62%;种间与种内进化分歧率范围间没有交叉;COI基因种间在0.48%～14.8%之间,种内在0.24%～8.3%之间,种内进化分歧范围与种间进化分歧范围存在交叉。结论 ND5基因片段可在种水平有效鉴别常见嗜尸性蝇类,也可鉴别近缘种。而单独运用COI基因不能有效进行种属鉴定。