沉默FOXK1基因对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨沉默叉头框K1(FOXK1)对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)数据库查询在胃癌组织和正常胃组织中FOXK1 mRNA表达水平;利用化学合成的si-FOXK1体外转染胃癌HGC-27细胞,实验分为空白对照组、nc-FOXK1组和si-FOXK1组,采用Western blotting法评估各组的转染效率,MTT法检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的增殖能力,克隆形成实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的克隆形成数,细胞划痕实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的迁移率,Transwell小室实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的细胞迁移数和细胞侵袭数,Western blotting法检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞中核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白[NF-κB p65和磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)]的表达水平。结果:GEPIA数据库查询,在胃癌组织中FOXK1 mRNA表达水平高于正常胃组织(P<0.05);Western blotting法检测,在胃癌HGC-27细胞中FOXK1蛋白表达水平高于人正常胃黏膜GES-1细胞(P<0.01);与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组FOXK1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);MTT法检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞的增殖能力降低(P<0.05);克隆形成实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞克隆形成数减少(P<0.05);细胞划痕实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌细胞的迁移率降低(P<0.05);Transwell小室实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);Western blotting法检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞中p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:FOXK1在胃癌HGC-27细胞中高表达,沉默FOXK1可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与NF-κB通路有关。

FOXK1、SATB2在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数及预后的相关性分析

目的探讨叉头框转录因子1(FOXK1)、特异AT序列结合蛋白2(SATB2)在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数及预后的相关性。方法以153例胃癌患者为研究对象,应用PT-PCR技术检测FOXK1、SATB2在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,比较胃癌组织及癌旁组织中FOXK1、SATB2表达水平,采用ROC曲线分析SATB2、SATB2表达水平对胃癌的诊断价值;收集患者临床资料,分析胃癌患者FOXK1、SATB2表达与临床病理参数的关系,并采用多元logistics回归分析影响胃癌患者FOXK1、SATB2表达的危险因素;分析胃癌患者FOXK1、SATB2表达与预后的关系分析,并绘制生存曲线。结果胃癌组织中FOXK1、SATB2阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05);FOXK1、SATB2表达联合检测诊断胃癌的AUC大于单独检测(P<0.05);FOXK1阳性在肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高方面的例数比例高于FOXK1阴性组,SATB2阳性在肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、分化程度高方面的例数比例高于SATB2阴性组(P<0.05);肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高是影响FOXK1表达的危险因素,肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、分化程度高是影响SATB2表达的危险因素(P<0.05);FOXK1阳性组生存率低于FOXK1阴性组,SATB2阳性组生存率低于SATB2阴性组(P<0.05)。结论胃癌组织的FOXK1、SATB2阳性表达率均较高,肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高是影响胃癌组织FOXK1、SATB2的危险因素,并且FOXK1、SATB2阳性表达患者预后较差。

乳腺癌组织中ELMO3,FOXK1的表达及其临床意义

目的:检测乳腺癌组织中吞噬和运动蛋白3(engulfment and cell mobility 3,ELMO3)、叉头框转录因子1(forkhead box k1,FOXK1)的表达情况,并探讨两者在乳腺癌组织中表达的相关性及与乳腺癌患者临床病理参数、预后的关系。方法:收集2013年1月至2018年1月惠州市第三人民医院乳腺癌患者手术标本80例,应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组织化学检测乳腺癌组织及癌旁组织中ELMO3与FOXK1的表达情况;并分析乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1表达的相关性,及其的表达与乳腺癌患者临床病理参数、预后的关系。结果:qRT-PCR检测ELMO3mRNA,FOXK1mRNA在乳腺癌组织中表达分别为1.16±0.48,1.34±0.60,在癌旁组织中表达分别为0.81±0.36,0.95±0.49;乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1表达水平均高于癌旁组织(均P<0.05),且乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1的表达呈正相关(r=0.423,P=0.037)。免疫组织化学检测EL MO3与FOX K1在乳腺癌组织中阳性表达分别为58例(72.52%),6 2例(7 7. 5 0%),在癌旁组织中阳性表达分别为2 8例(3 5. 0 0%), 2 9例(3 6. 2 5%),乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1阳性表达率均高于癌旁组织(均P<0.05)。ELMO3与肿瘤TNM分期、淋巴结转移显著相关,FOXK1与肿瘤组织TNM分期、淋巴结转移和组织分级显著相关(均P<0.05)。KaplanMeier生存曲线分析显示乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1高表达患者生存期较短。结论:乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1呈高表达,并与肿瘤发生发展及预后有关。ELMO3与FOXK1在乳腺癌组织中表达呈正相关,可能协同参与了乳腺癌的发生发展。ELMO3与FOXK1具有作为乳腺癌新的标志物、治疗靶标及评估预后的潜在价值。

胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达的临床意义及对预后的影响

目的探讨胃癌患者组织中叉头框转录因子(FOXK1)、脊椎蛋白2(SPON2)表达的临床意义及对预后的影响。方法前瞻性选取张家港市第一人民医院2017年1月至2019年12月收治的98例胃癌患者作为研究对象,所有患者行胃癌根治性切除术治疗并获取胃癌组织标本,术后均接受随访(12个月),依据随访期间预后情况分为预后良好组和预后不良组(复发、病死)。检测并比较2组FOXK1、SPON2表达,分析胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达对预后影响。结果98例胃癌患者中,预后不良患者17例,占17.35%;预后不良组FOXK1、SPON2阳性表达率高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);组间其他资料比较差异无统计学意义(P>0.05);经Logistic回归分析检验,结果显示,FOXK1、SPON2表达阳性可能与胃癌患者预后不良有关(OR>1,P<0.05);绘制ROC曲线图,结果显示,FOXK1阳性、SPON2阳性预测胃癌患者预后的AUC分别为0.805、0.803,均>0.80,有一定预测价值。结论胃癌患者预后不良可能与组织中FOXK1、SPON2阳性表达有关,二者阳性表达可能是胃癌患者的风险因子。

肺癌组织中FOXK1、SPON2蛋白表达变化及意义

目的观察肺癌组织中叉头框K1(FOXK1)、脊椎蛋白2(SPON2)蛋白表达变化,并探讨其临床意义。方法收集手术切除的81例肺癌及其癌旁组织标本,用免疫组化法检测组织中FOXK1与SPON2蛋白表达,用Spearman等级相关分析FOXK1与SPON2蛋白表达的相关性,分析FOXK1与SPON2蛋白阳性表达与患者临床病理参数及预后的关系。结果肺癌组织中FOXK1、SPON2蛋白阳性表达率均高于癌旁组织(P均<0. 05)。肺癌组织中FOXK1蛋白阳性表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0. 05),而与患者性别、年龄及肿瘤病理类型、分化程度、大小无关(P均> 0. 05); SPON2蛋白阳性表达与肿瘤病理类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0. 05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关(P均> 0. 05)。肺癌组织中FOXK1与SPON2的蛋白表达呈正相关(r=0. 588,P=0. 000)。肺癌组织中FOXK1、SPON2蛋白阳性表达患者的无进展生存率、无进展生存期均低于阴性表达患者(P均<0. 05)。结论肺癌组织中FOXK1、SPON2蛋白均呈高表达,二者可能协同参与了肺癌的发生发展,影响患者预后。

叉头盒K1缺失减轻缺血再灌注诱导的急性肾损伤

目的探讨叉头盒K1(forkhead box K1,FOXK1)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用及机制,以期为AKI的防治提供新的思路和靶点。方法构建3种AKI模型:按随机数字表法将30只雄性8~10周龄22~24 g无特定病原体野生型C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组(0.9%氯化钠水溶液0.1 ml/10 g,腹腔注射)、脂多糖组(脂多糖溶液10 mg/kg,腹腔注射)、顺铂组(顺铂溶液20 mg/kg,腹腔注射)、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)组及假手术组,每组6只,各组小鼠均于造模24 h后处死取材。肾功能情况通过检测血肌酐、血尿素氮水平;HE染色法观察各组肾组织病理学改变;Western印迹法检测肾组织FOXK1、肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,KIM1)以及自噬标志物p62、Beclin1和LC3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测Foxk1 mRNA表达水平。予以人肾小管上皮细胞(HK2细胞)缺氧24 h、复氧6 h构建缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)诱导AKI体外模型,检测HK2细胞上述指标表达水平。同时,在体内外构建Foxk1基因缺失的肾小管上皮细胞小鼠或HK2细胞,并诱导建立AKI模型,观察上述各指标表达变化。结果与生理盐水组相比,脂多糖组及顺铂组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高,KIM1蛋白表达较高(均P<0.05),FOXK1蛋白和mRNA表达无明显改变(均P>0.05);与假手术组相比,IR组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高,KIM1蛋白表达较高,FOXK1蛋白和mRNA表达均较低(均P<0.05)。与对照组比较,体外HR诱导的AKI细胞模型中FOXK1蛋白和mRNA表达均较低(均P<0.05)。体内实验中,与假手术组相比,IR组肾小管损伤较重,血肌酐、血尿素氮均较高,p62蛋白表达较低,KIM1、Beclin1和LC3蛋白表达均较高(均P<0.05),且与Foxk1flox/flox IR组相比,Foxk1cKO IR组肾小管损伤明显较轻,血肌酐、血尿素氮均较低,KIM1、p62蛋白表达均较低,Beclin1和LC3蛋白表达均较高(均P<0.05)。体外实验中,与shCtrl HR组比较,shFoxk1 HR组KIM1、p62蛋白表达均较低,Beclin1、LC3蛋白均较高(均P<0.05)。结论FOXK1在缺血性AKI模型中表达降低。Foxk1基因缺失通过介导自噬激活,减轻肾小管上皮细胞损伤,保护缺血性AKI。

miR-195通过靶向调控FOXK1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的影响

目的探究微小RNA-195(miR-195)通过靶向调控叉头框蛋白K1(FOXK1)对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的影响。方法体外培养胃癌MGC803细胞,将miR-195或miR-NC mimics、inhibitor对照序列通过Lipofectamine2000转染试剂转染入细胞内,并依次将其命名为miR-195 mimics组、mimics-NC组、miR-195 inhibitor组和inhibitor-NC组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中miR-195 mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western blot)方式检测FOXK1蛋白具体表达情况,采用CCK8方式检测细胞的具体增殖水平,细胞的具体侵袭能力分析采用Tranwell实验,细胞的具体转移能力采用划痕试验予以检测,miR-195与FOXK1靶向关系验证则采用荧光素酶实验。结果与inhibitor-NC组相比,miR-195 inhibitor组miR-195 mRNA表达降低,细胞增殖水平、Tranwell实验穿膜数、迁移距离、FOXK1蛋白表达均增大(P均<0.05);与mimics-NC组相比,miR-195 mimics组miR-195 mRNA表达升高,细胞增殖水平、Tranwell实验穿膜数、迁移距离、FOXK1蛋白表达均降低(P均<0.05);荧光素酶实验显示,miR-195可直接靶向作用于FOXK1蛋白。结论miR-195可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移,可能通过调控FOXK1表达而起作用。

叉头框蛋白K1在胶质瘤组织的表达及其临床意义

目的探讨叉头框蛋白K1(FOXK1)在胶质瘤组织的表达及临床意义。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测FOXK1在胶质瘤mRNA和蛋白表达水平;乘积极限法(Kaplan-Meier)分析FOXK1与患者临床病理参数关系;RNA干扰胶质母细胞瘤FOXK1的表达,Transwell迁移实验测定LN18细胞迁移能力,细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞计数测定T98G细胞增殖。结果RT-qPCR检测和Western blot结果表明FOXK1在胶质母细胞瘤(GBM)组织中mRNA和蛋白高表达。FOXK1的表达与胶质瘤患者性别无明显相关(P>0.05)、与年龄无明显相关(P>0.05),而FOXK1表达与WHO分级明显相关(P<0.01)。Kaplan-Meier分析显示高表达FOXK1的患者预后较差(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明FOXK1促进癌细胞转移,CCK-8细胞计数结果表明FOXK1促进胶质瘤细胞增殖。结论 FOXK1在胶质瘤患者中高表达,与胶质瘤发生和发展、转移相关。

叉头框K1-卷曲螺旋结构域蛋白43轴对大肠癌细胞迁移和上皮-间充质转化的影响

目的观察叉头框K1(FOXK1)-卷曲螺旋结构域蛋白43(CDC43)轴对大肠癌细胞迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法选取2017年9月到2019年9月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的103例大肠癌和对应的癌旁组织作为研究对象,采用免疫组织化学分析FOXK1蛋白表达水平;采用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统(CRISPR-Cas9)技术在SW480细胞中建立FOXK1敲除细胞系(FOXK1 KO组)和对照细胞系(对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞增殖;采用Tanswell分析两组细胞迁移;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞EMT。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织FOCK1表达水平(40.32±6.90)比较,大肠癌组织FOXK1蛋白表达水平显著增高(159.21±13.85),差异有统计学意义(t=4.918,P<0.05)。与对照组细胞FOXK1蛋白表达水平(1.09±0.21)比较,FOXK1 KO组细胞FOXK1蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(t=5.012,P<0.05)。与对照组细胞吸光度值(1.94±0.28)比较,FOXK1 KO组细胞吸光度值显著下调(1.07±0.19),差异有统计学意义(t=3.162,P<0.05)。Transwell结果显示,与对照组细胞迁移数量[(95.28±10.20)个]比较,FOXK1 KO组细胞迁移数量显著下降[(48.39±8.21)个],差异有统计学意义(t=3.091,P<0.05)。与对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平(0.26±0.08)比较,FOXK1 KO组细胞E-cadherin表达水平显著增高(1.05±0.11),差异有统计学意义(t=3.001,P<0.05)。与对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)(0.78±0.13)和波形蛋白(Vimentin)(1.15±0.19)表达水平比较,FOXK1 KO组细胞N-cadherin(0.31±0.11)和Vimentin表达水平显著下调(0.39±0.14),差异有统计学意义(t=2.891、2.318,P<0.05)。与对照组细胞CCDC43表达水平(1.20±0.22)比较,FOXK1 KO组细胞CCDC43蛋白表达水平显著下调(0.57±0.18),差异有统计学意义(t=2.581,P<0.05)。结论FOXK1在大肠癌中高表达,通过调控CCDC43蛋白水平调节大肠癌细胞增殖、迁移和EMT。