大鼠抗小鼠重组Foxc2单克隆抗体的制备与检测应用

目的 :为了研究叉头框c2 (Foxc2 )在骨骼和主动脉发育上的作用。方法 :利用基因重组融合蛋白制作大鼠抗小鼠Foxc2单克隆抗体 (抗 Foxc2mAb) ,并利用蛋白质印迹和免疫荧光分析了Foxc2蛋白在小鼠肌胚细胞C2C12的表达和在小鼠胚胎的表达部位。结果 :用小鼠GST Foxc2融合蛋白免疫大鼠制得的抗 Foxc2mAb效价为 1∶5 0 0 0 ,并特异地与转染了CX Foxc2质粒的小鼠L细胞和人膀胱癌HTB9细胞产生的Foxc2蛋白结合。在骨成形蛋白 2 (BMP 2 )的诱导下 ,Foxc2蛋白在C2C12细胞中显著地增加 ,用反义Foxc2序列转染C2C12细胞可以明显地抑制Foxc2蛋白在这个细胞系中的表达。Foxc2蛋白表达主要定位于 11 5 dpc小鼠胚胎的生骨节和主动脉周围的间充质组织。结论 :应用大鼠抗小鼠基因重组Foxc2单克隆抗体研究Foxc2的作用 ,结果表明Foxc2蛋白在BMP 2的诱导下 。

慢病毒介导的RNA干扰FOXC2表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞功能影响

目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰叉头框C2(FOXC2)表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹法检测人正常永生化上皮Hecate细胞和皮肤鳞状细胞癌A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白的表达水平。将体外培养的A431细胞分为对照组(正常培养)、NC-shRNA组(LV-NC-shRNA慢病毒感染)和FOXC2-shRNA组(LV-FOXC2-shRNA慢病毒感染),采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平。结果:与Hecate细胞比较,A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与对照组比较,NC-shRNA组细胞中FOXC2 mRNA表达水平、细胞存活率、侵袭数目、克隆形成率、细胞凋亡率和FOXC2、p-AKT、CyclinD1、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组或NC-shRNA组比较,FOXC2-shRNA组细胞中FOXC2 mRNA表达水平、细胞存活率、侵袭数目、克隆形成率和FOXC2、p-AKT、CyclinD1、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低,而细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论:沉默FOXC2表达可抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制AKT信号通路活化有关。

FOXC2在肝外胆管细胞癌中的表达及其对肿瘤侵袭迁移和上皮间质转化的作用

目的:检测FOXC2在肝外胆管细胞癌(EHCC)中表达的临床意义,并初步探讨FOXC2在体外对EHCC肿瘤细胞增殖、侵袭迁移和上皮间质转化的作用。方法:免疫组织化学法检测FOXC2在EHCC组织和正常胆管组织中的表达;qRT-PCR检测FOXC2 m RNA在EHCC组织和正常胆管组织中的表达;分析FOXC2表达水平与患者临床病理因素和预后的关系。选择FOXC2高表达的HuCCT1细胞进行转染敲降FOXC2,CCK-8实验检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Westernblot检测上皮间质转化蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2的表达。结果:免疫组化结果表明,77例EHCC样本中68例(88.3%)FOXC2表达阳性。qRT-PCR检测结果表明FOXC2mRNA在EHCC组织的表达水平显著高于正常胆管上皮组织。FOXC2表达水平与EHCC患者肿瘤组织分化、临床病理分级、淋巴侵犯等相关;进一步分析发现,FOXC2高表达组患者预后较差,且FOXC2高表达是影响EHCC患者临床预后的独立危险因素。体外实验结果显示,敲降FOXC2显著降低HuCCT1细胞侵袭和迁移能力,但不改变细胞增殖活力;显著降低EMT蛋白N-cadherin、Vimentin和MMP-2的表达,促进E-cadherin的表达。结论:FOXC2在EHCC组织中的高表达促进肿瘤进展并与患者不良预后相关,可能与FOXC2促进EHCC癌细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化有关。

叉头框蛋白C2在妇科常见恶性肿瘤中的研究现状

妇科常见恶性肿瘤发病率及致死率近年来均有所上升,严重威胁女性健康,且发病人群有年轻化趋势,早期诊治可提高患者的生存率及生活质量。叉头框蛋白C2(Forkhead box protein C2,FOXC2),隶属于FOX蛋白家族中的FOXC亚家族,主要见于胚胎发育阶段,是肿瘤发生和疾病进展的关键因素,近年来在恶性肿瘤的表达、治疗及预后评估中有较广泛的应用。本文就FOXC2在常见的妇科恶性肿瘤中的研究现状进行综述。