高效液相色谱法同时测定中药连翘药用及非药用部位中7种有效成分含量

[目的]建立同时测定连翘药用部位和非药用部位中连翘酯苷A、连翘酯苷B、紫云英苷、连翘苷、牛蒡子苷、槲皮素和牛蒡子苷元7种化学成分的高效液相色谱(HPLC)方法。[方法]采用反相高效液相色谱法,以AgilentEclipse Plus C18(4.6mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,检测波长为280 nm,体积流量为0.3 mL/min,柱温为30℃。[结果]连翘酯苷A、连翘酯苷B、紫云英苷、连翘苷、牛蒡子苷、槲皮素和牛蒡子苷元分离与线性关系良好,平均回收率分别为100%、99.1%、104%、104%、98.4%、99.0%、103%,RSD分别为2.27%、1.59%、1.94%、1.25%、2.97%、2.10%、2.67%。[结论]该方法分离度好,简便快速,可用于同时检测连翘药用及非药用部位中连翘酯苷A,连翘酯苷B,紫云英苷,连翘苷,牛蒡子苷,槲皮素和牛蒡子苷元的含量,为连翘资源全面质量评价提供依据。

UPLC-PDA法同时测定连翘中4种成分的含量

目的建立同时测定连翘中连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘苷、槲皮素4种化学成分的UPLC方法。方法采用Acquity UPLC BEH-C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱;以0.2%甲酸溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱(0~15 min,90%~70%A;15~25 min,70%~30%A);柱温35℃,流速0.3 ml/min,检测波长235 nm,进样量2μl。结果使用此种方法能够在25 min内实现了对连翘中4种化学成分的分离,连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷和槲皮素分别在0.42~2.10μg(r=0.9999),0.92~4.60μg(r=0.9999),1.02~3.06μg(r=0.9997),0.098~2.45μg(r=1.0000)范围内与色谱峰峰面积线性关系良好,加样回收率分别为93.48%(RSD=0.81%),97.79%(RSD=1.10%),97.53%(RSD=1.23%),96.29%(RSD=1.88%)。结论该方法操作简单,结果准确,专属性强,可用于连翘药材的质量控制。

复方金黄连颗粒中8种成分的含量测定及其主成分分析和聚类分析

目的:建立HPLC法同时测定复方金黄连颗粒中(R,S)-告依春、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,并结合聚类分析、主成分分析对其进行质量评价研究。方法:采用Waters Sun Fire C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃;乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.9 ml·min^(-1);检测波长:245 nm[检测(R,S)-告依春]和277 nm(检测连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素);采用SPSS Statistics17.0统计软件对复方金黄连颗粒中8种成分含量进行聚类分析和主成分分析。结果:(R,S)-告依春、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素分别在0.57~14.25μg·ml^(-1),1.99~49.75μg·ml^(-1),8.66~216.50μg·ml^(-1),3.39~84.75μg·ml^(-1),49.18~1 229.50μg·ml^(-1),16.46~411.50μg·ml^(-1),6.79~169.75μg·ml^(-1)和2.57~64.25μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999 1);平均加样回收率分别为98.05%,96.97%,99.57%,97.74%,100.10%,99.69%,99.26%和98.75%,RSD分别为1.48%,1.39%,0.96%,1.03%,0.69%,0.83%,1.11%和1.21%(n=9);10批样品聚类分析为2类;主成分1~3是影响复方金黄连颗粒质量评价的主要因子。结论:该方法操作简便、重复性好,可用于复方金黄连颗粒的质量控制和评价。

60Co-γ射线辐射灭菌对连翘药材指纹图谱及有效成分的影响

目的:探索60Co-γ射线辐照灭菌对连翘药材有效成分的影响及辐照前后指纹图谱的变化,为连翘辐照灭菌提供指导依据。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^(-1);检测波长:280 nm;柱温:30℃,建立连翘药材HPLC指纹图谱。采用SPSS 22.0软件比较3,6,10 k Gy剂量下60Co-γ射线辐照对连翘中芦丁、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘苷含量,及对指纹图谱相似度的影响。结果:芦丁、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷的进样量分别在0.046~2.297,0.030~1.465,0.294~14.553,0.091~4.504μg范围内线性关系良好(r≥0.999 1);平均回收率分别为99.24%(RSD=0.59%),100.49%(RSD=0.49%),97.61%(RSD=0.74%),102.25%(RSD=0.33%)(n=9)。当辐照剂量不超过6 kGy时,连翘药材中的芦丁、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘苷含量变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:60Co-γ射线辐照灭菌对连翘药材有效成分和指纹图谱无影响,可作为其有效灭菌手段。

HPLC一测多评法同时测定金蓝清瘟合剂中8种成分含量

目的:建立高效液相色谱一测多评法(HPLC-QAMS)同时测定金蓝清瘟合剂中(R,S)-告依春、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡子苷元、新西兰牡荆苷、藿香黄酮醇和广藿香酮的含量。方法:采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1。以连翘苷为内参物,建立其它7个成分的相对校正因子,计算各成分含量。结果:(R,S)-告依春、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡子苷元、新西兰牡荆苷、藿香黄酮醇、广藿香酮分别在1.34~26.80μg·mL^-1(r=0.9995)、2.66~53.20μg·mL^-1(r=0.9992)、9.57~191.40μg·mL^-1(r=0.9997)、3.59~71.80μg·mL^-1(r=0.9995)、0.93~18.60μg·mL^-1(r=0.9993)、1.74~34.80μg·mL^-1(r=0.9998)、0.81~16.20μg·mL^-1(r=0.9991)、1.22~24.40μg·mL^-1(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率及相对标准偏差(RSD)分别为98.77%(1.06%);99.96%(0.74%);100.00%(0.61%);99.21%(0.82%);96.98%(1.27%);97.95%(1.33%);98.00%(1.52%);97.74%(1.11%)。金蓝清瘟合剂中8种指标性成分含量一测多评法计算结果与外标法实测结果无明显差异。结论:该法简便、准确,可有效地控制金蓝清瘟合剂的质量。

HPLC法测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸

目的建立HPLC法同时测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸。方法 Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:275 nm(0~21.0 min检测连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷)和210 nm(21.0~55.0 min检测去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素、青蒿酸);柱温25℃;体积流量0.9 mL/min;进样量:10μL。结果连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸分别在3.47~69.40μg/mL(r=0.999 5)、18.78~375.60μg/mL(r=0.999 2)、6.64~132.80μg/mL (r=0.999 7)、2.57~51.40μg/mL (r=0.999 5)、4.86~97.20μg/mL(r=0.999 3)、4.23~84.60μg/mL(r=0.999 8)、0.79~15.80μg/mL(r=0.999 1)、2.16~43.20μg/mL(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率分别为98.76%、100.12%、99.34%、97.57%、98.29%、99.25%、96.87%、98.02%,RSD值分别为1.53%、0.89%、0.91%、1.38%、1.02%、0.83%、1.26%、1.15%。结论所建立的方法结果准确,可用于儿感退热宁口服液中多成分的质量控制研究。

高效液相一测多评法测定鼻炎片中羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷

目的建立高效液相一测多评(HPLC-QAMS)法测定鼻炎片中羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷。方法以乙腈-0.2%磷酸为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min;Agilent HC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃;检测波长203 nm(测定羧基苍术苷和苍术苷)、275 nm(测定连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷)和254 nm(测定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷)。进行专属性试验、线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验;以连翘苷为内参物,建立该成分与羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷间的相对校正因子,并计算鼻炎片中9种成分的含量,同时与外标法(ESM)的测定结果进行比较,验证该方法的可行性。结果建立了鼻炎片中9种成分的定量控制方法,方法学验证结果符合要求。鼻炎片中各成分的计算值与实测值无显著性差异。结论HPLC-QAMS法适用于鼻炎片的多指标成分质量评价模式,可以为鼻炎片质量控制方法的建立提供参考。

基于UHPLC-MS/MS技术的导赤丸中24个成分定量测定联合化学计量学质量评价

目的建立UHPLC-MS/MS法同时测定导赤丸中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A、盐酸小檗碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酚、栀子苷、西红花苷I、西红花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍药苷、连翘酯苷A和连翘苷的含量。方法采用Phenomenon C18柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;进样量为1μL;采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测(MRM)模式正、负离子同时扫描。结果24种成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9977);精密度、稳定性、重复性等均符合方法学要求,平均加样回收率为92.7%~107.9%,RSD均小于6.5%。15批样品中24种成分的平均质量分数在6.834~7667.200μg/g,聚类分析、主成分分析结果一致,均可将3个厂家的样品准确划分为3类。结论所建立的UPLC-MS/MS法24个成分含量测定方法重现性好,简便、准确、稳定,能客观、全面、有效地确定不同生产企业样品中主要成分的差异,可为导赤丸质量评价体系的完善提供依据。

基于HPLC指纹图谱、多指标成分含量测定及化学计量学的湿热痹片质量评价

目的建立指纹图谱和多指标定量与化学计量学相结合的湿热痹片质量评价方法。方法采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃;检测波长分别为303 nm(检测桑皮苷A、桑皮苷F、桑辛素M)和270 nm(检测连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ、苍术素);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723版)建立湿热痹片的HPLC指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;并对桑皮苷A、桑皮苷F、桑辛素M、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ、苍术素的含量测定方法进行方法学验证;基于指纹图谱共有峰峰面积测定结果,采用聚类分析和主成分分析等化学计量学方法对不同批次的湿热痹片进行质量评价。结果湿热痹片HPLC指纹图谱确认了16个共有峰,指认9个共有峰,10批湿热痹片样品相似度均大于0.95,相似度良好;9种成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(r2≥0.999 1),平均加样回收率分别为98.87%、97.44%、97.94%、98.39%、100.13%、99.06%、96.80%、98.44%、99.15%,RSD分别为1.42%、1.17%、1.30%、0.91%、0.86%、1.23%、1.08%、1.37%、0.79%;10批次样品中桑皮苷A、桑皮苷F、桑辛素M、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ、苍术素的质量浓度分别在0.192~0.289、0.057~0.095、0.113~0.158、0.309~0.375、1.537~1.916、0.478~0.596、0.049~0.072、0.279~0.354、0.629~0.759 mg/g。10批湿热痹片聚为2类;主成分1~6是影响湿热痹片质量评价的主要因子。结论所建立的方法操作便捷、结果准确、重复性好,可用于湿热痹片的质量控制和评价。

HPLC法同时测定胎盘灌流液中双黄连冻干粉中8种成分的含量

目的：建立同时测定胎盘灌流液中双黄连冻干粉中8种成分含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Zorbax-C18,流动相为乙腈-1%甲酸水溶液（梯度洗脱）,内标为葛根素,流速为1.0 ml/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10μl。结果：8种成分在各自的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 0）;日内精密度、日间精密度、重复性试验的RSD≤1.9%,稳定性试验的RSD≤7.3%,平均回收率为92.73%~112.37%,RSD为3.2%~8.2%（n=6）,平均基质效应为90.33%~105.78%,RSD为3.2%~8.0%（n=6）。结论：该方法快速、灵敏,专属性强,可用于同时测定胎盘灌流液中双黄连冻干粉中8种成分的含量。

高效液相色谱法测定蒙药连翘四味汤散中多指标成分的含量

目的:建立同时测定蒙药连翘四味汤散(连翘、拳参、麦冬、木通)中活性成分连翘苷、连翘酯苷A、没食子酸和木通苯乙醇苷B的含量测定方法。方法:采用RP-HPLC法,色谱柱为Promosil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-1.0%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),柱温40℃,检测波长为277 nm(连翘苷)、330 nm(连翘酯苷A和木通苯乙醇苷B)和272 nm(没食子酸),进样量为10μL。结果:连翘四味汤散中连翘苷的含量在0.038~0.051 mg·g^(-1)之间、连翘酯苷A的含量在0.127~0.135 mg·g^(-1)之间、没食子酸的含量在0.079~0.085 mg·g^(-1)之间、木通苯乙醇苷B的含量在0.009 6~0.010 3mg·g^(-1)之间。结论:该方法快速简便、稳定可靠,适用于连翘四味汤散的质量控制。

小儿退热洗剂HPLC指纹图谱及指标成分测定

目的建立小儿退热洗剂HPLC指纹图谱,并测定其中10种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、迷迭香酸、连翘苷)的含量。方法采用Kromasil 100-5 C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量1mL/min,柱温35℃,检测波长330nm,以连翘酯苷A为参照峰,建立11批样品的HPLC指纹图谱;基于指纹图谱色谱条件,在330、280nm检测波长下测定10种主要成分含量,并对11批制剂进行多指标含量测定。结果建立了HPLC指纹图谱,共标定22个共有峰,指认出13个色谱峰,11批制剂相似度在0.987~0.999。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、迷迭香酸、连翘苷分别在14.18~141.78、20.53~205.63、14.38~143.78、5.62~56.19、22.22~222.22、8.40~83.98、5.70~57.02、7.46~76.36、16.95~169.48、8.59~85.94μg/m L线性关系良好,平均加样回收率分别为109.51%、98.73%、99.41%、90.63%、92.73%、95.39%、91.87%、106.50%、95.23%、108.71%。11批制剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、迷迭香酸、连翘苷质量浓度分别在306.38~457.85、607.67~854.71、306.81~469.02、95.65~170.64、484.41~819.44、234.28~322.01、145.42~226.85、219.11~292.21、347.94~507.74、201.35~261.94 mg/mL。结论该方法准确简单,稳定可靠,可用于小儿退热洗剂质量控制。