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禽腺病毒流行株FAdV-4-AH-F41的分子特征及对细胞因子的诱导作用
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作者 魏宁波 刘琪 +6 位作者 徐良 杨侃侃 曹影丽 宋祥军 邵颖 涂健 祁克宗 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第4期10-20,27,共12页
【目的】分析1株血清4型禽腺病毒(FAdV-4)流行株的分子特征及其感染对细胞因子的影响。【方法】采集安徽省某禽类养殖场疑似心包积水-肝炎综合症的鸡肝脏组织样本,用鸡肝癌细胞(LMH)对病原进行分离,采用PCR、透射电镜(TEM)观察和间接免... 【目的】分析1株血清4型禽腺病毒(FAdV-4)流行株的分子特征及其感染对细胞因子的影响。【方法】采集安徽省某禽类养殖场疑似心包积水-肝炎综合症的鸡肝脏组织样本,用鸡肝癌细胞(LMH)对病原进行分离,采用PCR、透射电镜(TEM)观察和间接免疫荧光试验(IFA)对分离的毒株进行鉴定。采用分段扩增后拼接的方法克隆分离毒株的全基因组,对其进行遗传进化分析和序列重组分析。基于柯赫法则,用分离毒株接种无特定病原体(SPF)鸡,检验其致病性。采用实时荧光定量PCR法,检测分离毒株对LMH细胞天然免疫相关细胞因子环鸟苷酸-腺苷酸(cGAS)、干扰素刺激因子(STING)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、干扰素-α(IFN-α)、IFN-β、干扰素调节因子7(IRF7)、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ-α、MHCⅡ-β等11种细胞因子的诱导作用。【结果】分离鉴定到1株FAdV,其在LMH细胞中培养未出现明显细胞病变效应;病毒粒子直径为70~90 nm,符合FAdV-4的结构特征;免疫荧光试验结果显示,在接种分离毒株的LMH细胞内可观察到亮红色荧光,而对照细胞没有荧光;将该毒株命名为FAdV-4-AH-F41。采用分段扩增后拼接的策略获得了FAdV-4-AH-F41全基因组序列(43708 bp);遗传进化分析和序列重组分析发现,FAdV-4-AH-F41与FAdV-4株核苷酸相似性为99.6%;存在3个重组事件,第1个重组事件发生在30453-30674 bp,第2个发生在36884-36988 bp,第3个发生在43401-43715 bp。致病性试验显示,FAdV-4-AH-F41是导致鸡心包积水-肝炎综合症的病原。实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照(DMEM/F12处理)相比,用FAdV-4-AH-F41处理后LMH细胞中11种免疫因子的表达量水平均有提升,其中cGAS、IL-6、IRF7、MHCⅡ-β差异达极显著水平(P<0.01),IL-1β、IFN-α、MAVS差异达显著水平(P<0.05),STING、IL-8、IFN-β、MHCⅠ-α差异不显著。【结论】成功分离1株重组血清4型禽腺病毒,感染LMH细胞会诱导强烈的天然免疫反应。 展开更多
关键词 禽腺病毒4 鸡肝癌细胞 致病性 细胞因子
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绿原酸对FAdV-4的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响 被引量:6
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作者 崔淹鸽 李京帅 +1 位作者 李银聚 张春杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4718-4724,共7页
试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4... 试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD_(50)为1.36×10^(7)拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC_(50)),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC_(50)为28.6μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53)μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log_(2)拷贝/mg,107μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。 展开更多
关键词 绿原酸 禽腺病毒血清4型(fadv-4) 炎性因子 信号分子 鸡胚
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FAdV-4 NP株F1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 陈媛 屈贵蜀 +2 位作者 彭尧舜 许丽惠 王全溪 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2019年第5期614-618,共5页
根据FAdV-4 NP株F1蛋白编码框的主要抗原位点,设计一对特异性引物,经PCR扩增、测序,分析表达效率后,进行密码子优化,以合成的新序列作为模板,构建重组表达质粒pET-32a-F1,将质粒转化到BL21中,筛选诱导条件,Western blot鉴定表达产物,将... 根据FAdV-4 NP株F1蛋白编码框的主要抗原位点,设计一对特异性引物,经PCR扩增、测序,分析表达效率后,进行密码子优化,以合成的新序列作为模板,构建重组表达质粒pET-32a-F1,将质粒转化到BL21中,筛选诱导条件,Western blot鉴定表达产物,将待纯化蛋白依次经过不同浓度的咪唑洗脱,纯化重组蛋白,最后将纯化后的蛋白免疫新西兰黄兔,收集血清并用间接ELISA法测定抗体效价.结果表明,所设计的特异性引物扩增了一条约699 bp的片段.PCR验证和酶切鉴定表明,pET-32a-F1被成功构建,并能够高效表达.重组质粒pET-32a-F1诱导的最佳IPTG浓度为0.3 mmol·??L^-1,最佳诱导时间为5 h,最佳诱导温度为37℃,咪唑洗脱浓度为80 mmol·??L^-1时,能获得较单一的洗脱蛋白.此外,本试验制备的F1多克隆抗体的效价可达1∶1 024 000. 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4 F1 基因 原核表达 密码子优化 多克隆抗体
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GPV·MDPV和FAdV-4三重PCR检测方法的建立
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作者 戴银 胡晓苗 +6 位作者 赵瑞宏 张丹俊 潘孝成 沈学怀 尹磊 周学利 侯宏艳 《安徽农业科学》 CAS 2021年第15期183-184,187,共3页
[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核... [目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验。[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100%。[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) 禽腺病毒4型(fadv-4) 三重PCR检测
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FAdV-4感染对白羽肉鸡外周血细胞、血液生化指标和炎症因子的影响 被引量:1
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作者 黄瑞玲 何晴 +5 位作者 陆芍华 严梦涵 许丽惠 王全溪 黄翠琴 黄其春 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2022年第5期662-667,共6页
采用Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)人工感染白羽肉鸡,于感染3、6、12、24 h时检测并分析FAdV-4对肉鸡外周血细胞、血液生化指标和炎症因子的影响.结果表明,3~24 h时,被FAdV-4感染的时间越长,肉鸡外周血细胞病毒载量越高.对于外周血细胞,... 采用Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)人工感染白羽肉鸡,于感染3、6、12、24 h时检测并分析FAdV-4对肉鸡外周血细胞、血液生化指标和炎症因子的影响.结果表明,3~24 h时,被FAdV-4感染的时间越长,肉鸡外周血细胞病毒载量越高.对于外周血细胞,肉鸡红细胞数与病毒载量呈负相关,感染6 h时较未攻毒组显著减少(P<0.05);白细胞数与病毒载量呈正相关,感染6 h时较未攻毒组显著增加(P<0.05);感染12、24 h时,血小板数较未攻毒组显著增加(P<0.05).对于血液生化指标,感染3~24 h时,肉鸡血液中的血糖浓度较未攻毒组显著升高(P<0.05),甘油三酯浓度较未攻毒组显著下降(P<0.05);感染6、24 h时,总蛋白含量较未攻毒组显著下降(P<0.05).对于炎症因子,感染3~24 h时,肉鸡外周血中组胺和缓激肽的含量较未攻毒组显著增加(P<0.05);感染6 h时,白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和P物质的含量与未攻毒组的差异不显著(P>0.05),感染3、12、24 h时较未攻毒组显著增加(P<0.05);人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)只在感染24 h时较未攻毒组显著增加(P<0.05).可见,感染FAdV-4后,白羽肉鸡的红细胞数、血脂浓度和总蛋白含量下降,白细胞数和血糖浓度升高,极大地促进外周血炎症因子的释放,产生了严重的炎症反应. 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒血清4 外周血细胞 血液生化指标 炎症因子
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Baculovirus-expressed FAdV-4 penton base protein protects chicken against hepatitis-hydropericardium syndrome 被引量:2
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作者 ZHANG Jun-qin WEI Yan-ming +3 位作者 HUANG Kun SUN Xiao-mei ZOU Zhong JIN Mei-lin 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第11期2598-2604,共7页
Hepatitis-hydropericardium syndrome(HHS)is an infectious disease caused by fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4).Several structural and non-structural proteins of FAdV-4 have been expressed in Escherichia coli and baculo... Hepatitis-hydropericardium syndrome(HHS)is an infectious disease caused by fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4).Several structural and non-structural proteins of FAdV-4 have been expressed in Escherichia coli and baculovirus expression system to develop candidate subunit vaccines.However,the protective efficiency of baculovirus-expressed penton base protein has not been assessed.In this study,two recombinant capsid proteins,penton base and fiber-2,were constructed.And then,penton base and fiber-2 were administrated alone or together to specific pathogen-free(SPF)chickens at 14 days of life and boosted at 28 days of life.At 42 days of life,the immunized groups and the control group were challenged with FAdV-4 virulent strain.Results show that inoculating penton base or penton base+fiber-2 provided 100%protection to the chickens.All groups vaccinated with the recombinant protein produced detectable antibodies and showed no apparent lesions.Thus,baculovirus-expressed penton base protein is a promising candidate subunit vaccine. 展开更多
关键词 fowl adenovirus SEROTYPE 4 hepatitis-hydropericardium SYNDROME PENTON base subunit vaccine BACULOVIRUS expression system
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鸡cGAS基因的克隆、表达特性分析及FAdV-4感染前后亚细胞定位变化
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作者 曹影丽 刘琪 +6 位作者 柴震震 杨侃侃 梁月巧 宋祥军 邵颖 涂健 祁克宗 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期453-460,共8页
cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功... cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功能,探究在鸡肝癌(LMH)细胞中过表达chcGAS以及FAdV-4感染前后细胞定位的变化情况。本研究针对chcGAS序列设计引物进行PCR扩增,并分析该基因序列与其他物种之间的同源性以及预测该基因的结构域,构建重组质粒pET-32a-chcGAS进行原核表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用激光共聚焦观察FAdV-4感染LMH细胞前后chcGAS细胞定位变化。结果表明,本试验克隆得到大小为1317 bp的chcGAS基因,与其他物种同源性为50.5%~84.4%,SDS-PAGE分析结果显示,chcGAS蛋白主要以可溶性蛋白质的形式在上清液处表达,目的蛋白质相对分子质量为75000,与预期大小相符。亚细胞定位结果显示,FAdV-4感染可导致定位于细胞核膜上的chcGAS蛋白转移到细胞质中。本研究结果为进一步研究FAdV-4与cGAS-STING信号通路的关联调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 cGAS 血清4型禽腺病毒(fadv-4) 序列分析 原核表达 亚细胞定位
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基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 李鹏 雷梦瑶 +9 位作者 冯丽丽 王振伟 管春晓 郑洪双 王俊茹 王利平 李炎锦 吴欣媛 刘兴友 金前跃 《河南农业科学》 北大核心 2024年第7期133-141,共9页
Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,... Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4 Penton蛋白 间接ELISA 抗体检测
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一株鹅源禽腺病毒4型的分离及致病性
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作者 王艳 高亚东 +1 位作者 蒋成辉 曾巧英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4232-4240,共9页
2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hep... 2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH):1)观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),取培养液负染、电镜观察病毒粒子形态;2)靶标4型禽腺病毒(serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)的衣壳蛋白编码基因hexon基因进行PCR诊断,对扩增基因序列进行遗传演化分析;3)以5×10^(5.5)TCID_(50)/羽的剂量皮下注射感染10日龄健康泰州鹅,进行动物回归感染以确证其致病性。结果显示,将病料上清接种LMH细胞48~72 h后CPE明显,细胞圆缩、间隙变大、随后碎裂、逐渐脱落,电镜观察见二十面体无囊膜病毒粒子;PCR检测FAdV-4阳性,分离纯化病毒,命名为YNKM2023株;hexon基因的遗传演化分析显示,分离株与国内已有的鸡、鸭FAdV-4流行毒株相似性高达99.8%~99.9%,与印度分离株相似性为99.5%~99.6%。接种感染后,泰州鹅未出现典型的临床症状,但感染后3 d开始出现HPS的特征性病变,感染后6 d检测到中和抗体。综上,本研究成功分离到鹅源FAdV-4/YNKM2023株,该毒株与国内已有的鸡鸭流行毒株高度同源,尚未发生明显的基因漂移。分离株可以感染鹅,病毒可以在雏鹅体内复制引起组织器官病变并产生免疫应答,对鹅表现出一定的致病性,这有助于了解FAdV-4在鹅群的流行情况及其对雏鹅的致病性。 展开更多
关键词 鹅源 禽腺病毒4型(fadv-4) 分离 致病性
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表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建 被引量:1
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作者 徐贞琦 蒋蕙如 +8 位作者 郭艺文 谢泉 殷楠 李拓凡 万志敏 邵红霞 秦爱建 张俊 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期47-53,共7页
为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光... 为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白 CRISPR-Cas9 重组血清4型禽腺病毒 表达
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血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量:1
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作者 陈乐乐 王凯莉 +5 位作者 刘成 杜旭升 曹胜亮 李玉保 路建彪 司振书 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期7-11,共5页
为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检... 为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 六邻体环1区 重组蛋白 胶体金检测方法
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表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒构建及其免疫效果评估
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作者 万志敏 李亚锋 +9 位作者 孙建文 姜文杰 赵喆泓 汤婷 谢泉 李拓凡 邵红霞 秦爱建 钱琨 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期25-33,共9页
为构建H7N9亚型禽流感病毒和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的二联疫苗候选株,试验通过CRISPR/Cas9和Cre-Loxp系统,以课题组前期构建的表达EGFP蛋白的重组病毒FAdV4-EGFP为载体,构建能够稳定表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的重组血清4... 为构建H7N9亚型禽流感病毒和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的二联疫苗候选株,试验通过CRISPR/Cas9和Cre-Loxp系统,以课题组前期构建的表达EGFP蛋白的重组病毒FAdV4-EGFP为载体,构建能够稳定表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的重组血清4型腺病毒;并通过PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、Westernblot试验以及SPF鸡保护性试验等方法,探究此重组病毒体外生物学特性并评估其为鸡提供的保护力。结果显示:研究成功构建能稳定表达H7N9禽流感亚型病毒HA蛋白的重组血清4型腺病毒,命名为FAdV4-H7;FAdV4-H7能在LMH细胞高效复制,并能在LMH细胞传代15次后仍能稳定表达HA蛋白;FAdV4-H7不仅高度致弱,而且能诱导机体产生高滴度针对H7N9亚型禽流感病毒HI抗体和FAdV-4的中和抗体,能为SPF鸡提供足够保护来抵抗致死性FAdV-4感染。研究表明,试验成功构建了重组病毒FAdV4-H7,为H7N9亚型禽流感病毒和FAdV-4的联防联控提供了二联苗候选疫苗株。 展开更多
关键词 H7N9亚型禽流感病毒 HA蛋白 重组血清4型腺病毒 CRISPR/Cas9 疫苗
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禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的转录组学功能分析
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作者 冯慧霞 刘梦渊 +5 位作者 王晨阳 李炜 孙子龙 席义博 张鼎 杨勃 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1281-1290,共10页
禽腺病毒血清4型(FAdV-4)是引起禽肝炎-心包积液综合征的重要病原,严重危害我国养禽业的发展。研究表明,FAdV-4六邻体(Hexon)蛋白是决定病毒毒力和致病性的重要因素之一。为了进一步探究Hexon蛋白在FAdV-4感染中的重要作用,本试验以鸡... 禽腺病毒血清4型(FAdV-4)是引起禽肝炎-心包积液综合征的重要病原,严重危害我国养禽业的发展。研究表明,FAdV-4六邻体(Hexon)蛋白是决定病毒毒力和致病性的重要因素之一。为了进一步探究Hexon蛋白在FAdV-4感染中的重要作用,本试验以鸡肝癌细胞(LMH)为研究模型,利用转录组测序技术对外源表达Hexon所诱导的差异表达基因进行筛选。结果显示,与对照组相比,外源表达Hexon试验组共筛选到445个差异基因表达上调,36个差异基因表达下调。其中,BAG3、JUN、IL8L1、CCL4和THBS1等基因之前已被报道与FAdV-4感染相关,但HSPB9、HSP90AA1、HSPA8、HSPA2、DCN、ELOVL3和SBK2等基因在FAdV-4感染中的作用还未被揭示。GO富集分析结果显示,下调的差异基因主要与早期内体和蛋白酶体附属复合体相关,而上调的差异基因主要与质膜、细胞外表面区域和超分子纤维相关。KEGG通路富集分析结果显示,差异表达基因主要富集在MAPK、Wnt和VEGF等信号通路。此外,通过蛋白质相互作用网络分析发现,HSP90AA1、HSPA8、JUN和DCN等多个关键蛋白位于整个网络中心且已被报道与多种病毒复制密切相关。综上所述,本研究通过转录组测序筛选出一系列由外源表达Hexon诱导的差异表达基因,为控制FAdV-4感染提供了新的靶点和理论依据。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4 六邻体蛋白 鸡肝癌细胞 转录组测序
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禽腺病毒血清4型实时荧光RAA检测方法的建立
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作者 张宗淑 李会会 +6 位作者 陈曦 李静 张子闯 时国强 翟向和 王春光 张铁 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第20期69-74,共6页
为了快速准确地诊断禽心包积液-肝炎综合征(hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS),试验根据禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)的六邻体(Hexon)基因保守序列设计特异性引物和探针,将重组酶介导等温核酸扩增技术(r... 为了快速准确地诊断禽心包积液-肝炎综合征(hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS),试验根据禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)的六邻体(Hexon)基因保守序列设计特异性引物和探针,将重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)与荧光探针结合,通过对反应条件(温度和时间)进化优化建立一种用于检测FAdV-4的实时荧光RAA方法,对该方法进行特异性、敏感性、重复性试验,并分别采用该方法、普通PCR方法和实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR)方法检测56份鸡肝脏样本,并计算该方法与其他两种方法的符合率。结果表明:建立的实时荧光RAA方法在40℃条件下反应15 min即可完成检测;仅可检测出FAdV-4,与禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)、传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)均无交叉反应,特异性较强;对FAdV-4的最低检测限为1×10~1拷贝/μL,是普通PCR方法的100倍,与RFQ-PCR方法相当,敏感性较高;重复性试验中的组内重复性试验和组间重复性试验的变异系数(coefficient of variation,CV)均小于10%,重复性良好;对56份临床样品进行检测,该方法与RFQ-PCR方法和普通PCR方法的符合率分别为100%、96.43%。说明成功建立了FAdV-4的实时荧光RAA检测方法,该方法操作简便、快速,特异性较强,敏感性较高,重复性良好,可用于HHS的早期诊断。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4 心包积液-肝炎综合征 重组酶介导等温核酸扩增 荧光探针 六邻体基因
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血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化 被引量:1
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作者 万丽军 王盛 +12 位作者 谢芝勋 任红玉 谢丽基 范晴 罗思思 李孟 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 李小凤 韦悠 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2081-2090,共10页
【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、2... 【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、24、36、48、60、72、84和96 h的细胞样品,通过实时荧光定量PCR技术检测感染病毒后不同时间点IFN-α和IFN-β及ISGs基因在转录水平上表达量的动态变化规律。【结果】LMH细胞感染FAdV-448 h时出现典型的细胞病变;在感染12 h后,FAdV-4快速增殖,60 h时达到峰值;感染病毒后各时间点,与对照组相比,IFN-α基因转录水平表达量均显著下调(P<0.05);与对照组相比,在感染后12和24 h,IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05),在36 h时迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降且趋于稳定,但仍显著高于对照组(P<0.05);ISG 12、IFIT 5及DDIT 4基因在感染前期变化不大,在感染后36 h时迅速上调,在感染后96 h达到峰值(P<0.05);ZFP 313、IFITM 3及Viperin基因在感染前期表达量变化不大,随后在36 h迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降,但仍显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,CD 47、OAS和PKR基因均呈现下调表达。【结论】在FAdV-4感染LMH细胞后,IFN及多种ISGs在转录水平呈现规律性变化,与病毒在LMH细胞中复制存在一定的联系,表明这些天然免疫因子可能在抗FAdV-4反应中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒(fadv-4) LMH细胞 干扰素 干扰素刺激基因 转录
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乳杆菌胞外多糖纳米佐剂对鸡血清4型禽腺病毒亚单位疫苗的免疫增强作用
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作者 张硕 姬贺龙 +2 位作者 丁晨晨 宋素泉 闫丽萍 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第11期72-79,共8页
为了开发安全有效的新型兽用疫苗佐剂,将乳杆菌胞外多糖与季铵化壳聚糖自组装制备出两种纳米颗粒佐剂(NPs 7-4和NPs 8-2),研究其对蛋白抗原的免疫增强效果。纳米颗粒佐剂与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton base)亚单位疫苗颈... 为了开发安全有效的新型兽用疫苗佐剂,将乳杆菌胞外多糖与季铵化壳聚糖自组装制备出两种纳米颗粒佐剂(NPs 7-4和NPs 8-2),研究其对蛋白抗原的免疫增强效果。纳米颗粒佐剂与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton base)亚单位疫苗颈部皮下免疫接种7日龄SPF鸡21 d后肌肉注射JS株FAdV-4,测定组织器官病毒载量和泄殖腔排毒量,白油佐剂作为对照。结果显示:两种纳米颗粒佐剂对Penton base亚单位疫苗均具有缓释作用;与白油佐剂组相比,NPs 8-2佐剂组极显著提高了免疫鸡的血清特异性抗体水平(P<0.001),而NPs 7-4佐剂组抗体水平无显著差异(P>0.05);攻毒保护试验结果表明,与白油佐剂相比,NPs 8-2佐剂组提高了疫苗的攻毒保护率,组织脏器损伤明显减轻,组织病毒载量和泄殖腔排毒量显著减少(P<0.05),而NPs 7-4佐剂组免疫增强作用不显著。综上,NPs 8-2佐剂能有效增强血清4型禽腺病毒Penton base亚单位疫苗的免疫效果,减少抗原蛋白用量,产生较好的免疫保护效果,其免疫增强效果明显优于传统白油佐剂。 展开更多
关键词 乳杆菌胞外多糖 纳米佐剂 血清4型禽腺病毒 免疫效果
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禽腺病毒4型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
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作者 刘文健 王帅雯 +5 位作者 吉梅 刘萌 汤智辉 张硕 宋素泉 闫丽萍 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第6期101-109,共9页
旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株... 旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株;以制备的单克隆抗体为捕获抗体和酶标检测抗体,通过优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件,建立特异性检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法。结果:本研究成功筛选到3株能够稳定传代的杂交瘤细胞株1H2、2A9和3E1,其分泌的抗体均与FAdV-4全病毒具有良好的反应性,可识别不同抗原表位;进一步发现,以1H2为捕获抗体、2A9为酶标检测抗体,能够建立检测Fiber-2蛋白的ELISA方法;该方法具有良好的重复性,批内重复及批间重复试验变异系数均小于10%;敏感性高,Fiber-2蛋白检测限为0.078 ng/μL;特异性好,不与FAdV-4的其他结构蛋白及鸭腺病毒3型的Fiber-2蛋白发生反应。综上,本研究成功制备了3株Fiber-2蛋白单克隆抗体,并建立了定量检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法,为后续FAdV-4基础研究和Fiber-2亚单位疫苗研究奠定了物质基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备
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作者 罗昕雨 赵磊 +5 位作者 陈玉晴 缪欣怡 石家鑫 顾有方 李文超 刘欣超 《安徽科技学院学报》 2024年第2期25-30,共6页
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,... 目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 Fiber-1基因 重组蛋白 多克隆抗体
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血清4型禽腺病毒的检测方法及疫苗研究进展 被引量:1
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作者 张颖 《安徽农学通报》 2024年第12期63-67,共5页
血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)以感染3~6周龄的肉鸡为特征,主要引起心包液-肝炎综合征,其传播范围广,给养禽业造成的损失较大。禽腺病毒有12种血清型,因血清型众多,给血清4型禽腺病毒的诊断及防控带来一定的困难... 血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)以感染3~6周龄的肉鸡为特征,主要引起心包液-肝炎综合征,其传播范围广,给养禽业造成的损失较大。禽腺病毒有12种血清型,因血清型众多,给血清4型禽腺病毒的诊断及防控带来一定的困难。本文对血清4型禽腺病毒的分子生物学检测方法(聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR和环介导等温扩增)、血清学检测方法及其他检测技术,以及灭活疫苗、弱毒疫苗、基因工程疫苗及生物制品的最新研究进展进行了综述,为血清4型禽腺病毒的检测和疫苗的研究提供参考。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 检测方法 疫苗 分子生物学 肉鸡
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禽腺病毒血清4型感染的LMH细胞mRNA表达谱分析
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作者 杨筱竹 冯慧霞 +3 位作者 候晓兰 席义博 段利强 杨勃 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期56-63,共8页
禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的禽肝炎-心包积液综合征已严重危害我国养禽业的发展,迫切需要深入了解FAdV-4的致病机制并制定有效的防控方案。论文旨在利用高通量测序技术分析禽腺病毒血清4型感染鸡肝癌(Leghorn male hepatocellular,L... 禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的禽肝炎-心包积液综合征已严重危害我国养禽业的发展,迫切需要深入了解FAdV-4的致病机制并制定有效的防控方案。论文旨在利用高通量测序技术分析禽腺病毒血清4型感染鸡肝癌(Leghorn male hepatocellular,LMH)细胞后差异表达的mRNA,以探究mRNA在FAdV-4感染过程中的作用及其调控机制。结果显示,与对照组相比,FAdV-4感染48 h共筛选到2604个上调的差异表达基因,2883个下调的差异表达基因。其中,GNB3、NECTIN4、SFRP4、FABP2、PLPP3、GALR1L和MBL 2等基因之前并没有被报道过与FAdV-4感染相关。通过GO和KEGG分析得知,差异表达基因主要富集在从细胞表面位点和信号受体结合至细胞周期调节、MAPK信号通路、细胞黏附分子作用等;其中,显著下调的差异基因还富集到多种代谢途径中,提示病毒感染会影响宿主细胞的代谢水平。本研究为深入解析FAdV-4感染宿主细胞的致病机制提供了相关的理论基础及科学依据。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4 LMH细胞 高通量测序 MRNA
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