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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒fp25k基因的改造及用于稳定转化Sf9昆虫细胞系
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作者 谷琳珠 张传溪 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期308-314,共7页
【目的】苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后,会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变,这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因(few polyhedra,fp2... 【目的】苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后,会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变,这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因(few polyhedra,fp25k)突变失活有关。杆状病毒的fp25k基因突变后产生的包涵体(多角体)衍生病毒粒子变少而出芽型病毒粒子增加,会降低外源基因在杆状病毒表达系统中的表达。本研究拟改造fp25k并构建能持续表达FP25K蛋白的转基因昆虫细胞,以克服杆状病毒fp25k基因易突变导致的表达系统缺陷。【方法】本实验通过改造杆状病毒fp25k基因在细胞传代过程中容易产生突变的位点,得到mfp25k,并将mfp25k构建到pIZT/V5-His载体上,重组载体转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选逐步淘汰未成功转化的Sf9细胞。【结果】成功改造AcMNPV的fp25k基因的TTAA位点,得到pIZT-mfp25k重组载体。重组载体成功转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选后获得基因组中带有mfp25k的Sf9-mfp25k稳定的转基因细胞系。用AcMNPV的fp25k突变型病毒AcP2感染转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系与正常Sf9细胞,发现转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系表达的FP25K蛋白可弥补病毒fp25k基因突变的缺陷。【结论】建立的Sf9-mfp25k转基因昆虫细胞系通过细胞表达FP25K蛋白,可以弥补因杆状病毒fp25k基因突变产生的缺陷。研究结果为构建稳定的杆状病毒-昆虫细胞表达系统提供了新途径。 展开更多
关键词 ACMNPV fp25k fp25k修饰 转基因昆虫细胞 杆状病毒表达系统
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棉铃虫多核衣壳型多角体病毒fp25 K基因的克隆及分析
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作者 唐平 王永杰 +3 位作者 李轶女 张寰 易咏竹 秦启联 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第34期14982-14984,共3页
[目的]克隆棉铃虫多核衣壳型多角体病毒(HearMNPV) fp25 K基因,为深入研究杆状病毒的进化机制提供依据。[方法]通过半补齐法建立HearMNPV的质粒基因组文库,对插入片段进行鉴定和序列分析获取HearMNPV fp25 K基因。[结果]HearMNPV fp25 ... [目的]克隆棉铃虫多核衣壳型多角体病毒(HearMNPV) fp25 K基因,为深入研究杆状病毒的进化机制提供依据。[方法]通过半补齐法建立HearMNPV的质粒基因组文库,对插入片段进行鉴定和序列分析获取HearMNPV fp25 K基因。[结果]HearMNPV fp25 K基因的读码框由588个核苷酸组成,编码195个氨基酸;该基因上游具有晚期调控保守序列ATAAG,是一个晚期表达基因;HearMNPV fp25 K存在5个α-螺旋,8个β-折叠;HearMNPV与蓓带夜蛾核型多角体一致性最高,达97.0%,与舞毒蛾多核衣壳型多角体的FP’同源性最低,仅为19.3%。HearMNPV与GroupⅠNPVs、GroupⅡNPVs及GVs的fp25K同源基因间氨基酸平均相似性分别为55.6%、69.4%和29.3%,推测其与Ⅱ类NPVs的亲缘关系较近。[结论]该研究为杆状病毒分子进化、生物防治奠定了基础。 展开更多
关键词 棉铃虫多核衣壳型多角体病毒 fp25 K基因 序列分析
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与宿主昆虫液化相关的杆状病毒基因及其蛋白 被引量:5
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作者 金利容 刘凯于 胡秋婷 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期76-80,共5页
昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾... 昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(AcMNPV)中能特异性降解昆虫细胞内的肌动蛋白。几丁质酶不仅参与了虫体体表面几丁质的降解,同时还参与V-CATH蛋白前体的加工过程,起分子伴侣的作用。对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的研究表明其FP25K基因表达产物通过影响组织蛋白酶的释放与分泌而参与虫体液化。简要综述了此3种基因及其表达产物的结构、功能与特性,并讨论了它们在生产上的应用前景。 展开更多
关键词 宿主液化 组织蛋白酶基因 几丁质酶基因 fp25K基因
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AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究 被引量:2
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作者 林广云 王珣章 +3 位作者 龙綮新 邓日强 庞义 余奇理 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期64-74,共11页
对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株AcMNPVTKmt513的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白也不具... 对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株AcMNPVTKmt513的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白也不具有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明,经提纯后的突变多角体对虫体无感染力,而感染了突变株病毒的细胞只有弱的感染力。序列测定结果证实,其fp25基因无突变发生,且fp25基因在Sf9细胞中的转录也无异常,从而排除了突变与fp25基因有关。比较了26种NPV及GV的多角体蛋白及颗粒体蛋白的氨基酸序列,发现第25位的甘氨酸是绝对保守的。利用Prosis电脑软件对突变株病毒的多角体蛋白进行了二级结构预测并与野生型病毒作了比较,发现突变株病毒多角体蛋白的二级结构与野生型的比较,α螺旋数上升,β折叠数下降,同时,亲水性及抗原性都发生了改变。两种病毒的多角体蛋白通过SDSPAGE分析,其迁移率没有差别。 展开更多
关键词 ACMNPV fp25基因 多角体蛋白
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