大黄的炮制对生大黄、熟大黄5种游离蒽醌含量的影响测定

目的:采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定生、熟大黄中的5种游离蒽醌的含量及差异,探讨中药炮制前后物质基础的变化规律。方法:使用色谱柱为Thermo BDS HYPERSII C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸(85∶15)水溶液为流动相,检测波长为256 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在0.0207~0.414(R^(2)=0.9999)、0.1721~3.442(R^(2)=0.9996)、0.0203~0.406(R^(2)=0.9999)、0.148~2.96(R^(2)=0.9998)、0.164~3.28(R^(2)=0.9993)的线性范围内呈良好线性关系;生大黄经炮制后,芦荟大黄素含量下降约8.26%,大黄酸下降约9.21%;而大黄素含量增加约16.44%,大黄酚增加约16.12%,大黄素甲醚增加约20.01%,说明炮制工艺对大黄各成分影响不同。结论:大黄炮制后,其5种游离蒽醌的含量受到不同程度的影响,该方法可作为大黄及其不同炮制品的质量控制方法。

大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的影响

目的:探讨重症急性胰腺炎对肾脏的影响,并观察大黄游离蒽醌对肾脏的保护作用。方法:雄性大鼠72只,随机分为假手术对照组、重症急性胰腺炎模型组、生大黄水煎液干预组和大黄游离蒽醌干预组4个组,生大黄组和大黄游离蒽醌组在胰腺炎建模前12h和建模后2h分别给予生大黄水煎液和大黄游离蒽醌灌胃。各组分别于术后6h、12h和24h后三个时间点处死大鼠取肾脏组织,HE染色法观察肾脏组织的病理组织学改变,酶联免疫吸附法测定肾脏组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)水平,髓过氧化物酶法检测肾脏组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:胰腺炎模型组与假手术组相比三个时间点TNF-α(0.358±0.016 vs 0.190±0.005 P<0.05;0.390±0.010 vs 0.204±0.005 P<0.05;0.396±0.005 vs 0.198±0.003 P<0.05)和IL-1(0.334±0.004 vs 0.179±0.004 P<0.05;0.342±0.005 vs 0.176±0.003P<0.05;0.365±0.005 vs 0.174±0.004P<0.05)水平,以及肾组织MPO酶活性(0.860±0.014 vs 0.539±0.009 P<0.05;0.867±0.010 vs 0.610±0.005 P<0.05;0.870±0.013 vs 0.545±0.009 P<0.05)均明显升高,差异有显著性。生大黄组和大黄游离蒽醌组与胰腺炎组相比较均显著抑制12h和24h肾组织TNF-α(0.286±0.008 vs 0.390±0.010 P<0.05;0.295±0.008 vs 0.396±0.005 P<0.05)和IL-1(0.254±0.005 vs 0.342±0.005 P<0.05;0.267±0.004 vs 0.365±0.005 P<0.05)水平,显著抑制6h和12h肾组织MPO酶活性(0.730±0.008 vs 0.860±0.014 P<0.05;0.730±0.010 vs 0.867±0.010 P<0.05);生大黄组和大黄游离蒽醌组之间的差异无显著性。结论:大黄水煎液和大黄游离蒽醌均能抑制胰腺炎时机体的炎症反应从而减轻对肾脏的损伤作用,大黄游离蒽醌与大黄水煎液的疗效相当。

大黄游离蒽醌抑制NLRP3/Caspase-1通路改善大鼠重症急性胰腺炎肝损伤的研究

目的:探究大黄游离蒽醌通过抑制NLRP3/Caspase-1通路对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤的保护作用。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、SAP模型对照组、大黄游离蒽醌22.5、45、90 mg/kg组和生大黄900 mg/kg组。除正常对照组外,3.5%牛磺胆酸钠逆行注射到胰胆管内制备SAP大鼠模型,正常对照组注射等体积生理盐水。各药物组灌胃给药,12 h/次,共3次,末次给药2 h后处死动物取材。另按照方案给药3次后,观察大鼠7 d死亡率。HE染色观察胰腺和肝脏的病理变化;检测血清淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力;ELISA法检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-18的水平;蛋白免疫印迹法检测肝组织TLR4、NLRP3、Pro-caspase-1和Caspase-1的蛋白表达。结果:SAP模型对照组大鼠7 d死亡率为41.67%,大黄游离蒽醌45、90 mg/kg组大鼠能够降低SAP模型大鼠的死亡率。与正常对照组相比,SAP模型对照组大鼠胰腺、肝脏病理评分显著增高,血清AMS、LPS、ALT和AST活力以及肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18含量显著上升(P<0.01),肝组织TLR4、NLRP3、Pro-caspase-1和Caspase-1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与SAP模型对照组相比,大黄游离蒽醌45、90 mg/kg组可明显降低胰腺和肝脏病理学评分,明显降低血清AMS、LPS、ALT和AST活力及肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18含量(P<0.05或P<0.01),肝组织TLR4、NLRP3、Pro-caspase-1和Caspase-1蛋白表达均显著下调(P<0.01)。结论:大黄游离蒽醌对SAP继发肝损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1通路的表达,减少肝组织促炎细胞因子的产生有关。