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卵巢组织玻璃化冷冻及移植技术的影响因素
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作者 王琳 徐键(审校) 《国际生殖健康/计划生育杂志》 2025年第1期47-53,共7页
卵巢组织玻璃化冷冻及移植技术是保留生育功能的重要手段,尤其适用于需要接受性腺毒性治疗的年轻肿瘤女性和青春期前儿童。该技术涉及多个影响冷冻及移植效果的因素。在冷冻保护剂的选择上,成分、浓度及平衡时间均对冷冻效果有显著影响... 卵巢组织玻璃化冷冻及移植技术是保留生育功能的重要手段,尤其适用于需要接受性腺毒性治疗的年轻肿瘤女性和青春期前儿童。该技术涉及多个影响冷冻及移植效果的因素。在冷冻保护剂的选择上,成分、浓度及平衡时间均对冷冻效果有显著影响。卵巢组织的加工处理和冷冻载体的选择也是影响冷冻移植效果的关键因素之一。在解冻复苏过程中,需精细控制冷冻保护剂的去除速率,以防细胞受损。移植部位的选择可根据患者的实际需求决定。移植初期的缺血缺氧和氧化应激是导致卵泡丢失的重要因素,可通过使用促血管生成因子、干细胞、抗氧化剂等改善移植效果。除此之外,患者年龄、移植次数、妊娠方式等临床因素也会影响移植后的妊娠率。这些因素为优化卵巢组织冷冻移植的成功率提供了科学依据和实践指导,为未来的研究和临床实践提供了新的思路和方向。 展开更多
关键词 低温保存 组织保存 组织移植 卵巢 氧化性应激 玻璃化冷冻 生育力保存
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兔卵巢组织玻璃化冷冻的实验研究 被引量:6
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作者 晁岚 邓晓惠 +4 位作者 于璇 于红玲 徐安然 郝春燕 傅庆诏 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2007年第11期849-852,共4页
目的:探讨玻璃化冷冻法保存兔卵巢组织的效果。方法:随机将25只新西兰雌兔分为对照组(5只)、慢速冷冻组(10只)和玻璃化冷冻组(10只),比较各组冻融前后卵巢组织学、超微结构、卵泡凋亡(原位末端标记法,TUNEL)和子宫系膜内移植后卵巢功能... 目的:探讨玻璃化冷冻法保存兔卵巢组织的效果。方法:随机将25只新西兰雌兔分为对照组(5只)、慢速冷冻组(10只)和玻璃化冷冻组(10只),比较各组冻融前后卵巢组织学、超微结构、卵泡凋亡(原位末端标记法,TUNEL)和子宫系膜内移植后卵巢功能的恢复情况。结果:新鲜组织、慢速冷冻复苏组织和玻璃化冷冻复苏组织中正常形态卵泡比例分别为87.36%、81.96%和82.72%,两冷冻组正常卵泡比例均低于对照组,差异有统计学意义?P(0.05),但玻璃化冷冻组与慢速冷冻组差异无统计学意义(P>0.05)。3组间卵泡凋亡比率分别为21.4%、13.5%和17.1%,差异无统计学意义(P>0.05);3组移植后兔动情周期出现率均为100%,动情周期出现天数差异无统计学意义?P>0.05);移植存活的卵巢组织内可见各级形态正常的卵泡发育。结论:玻璃化冷冻可有效保存卵巢组织的结构和功能,是一种简单、可行的兔卵巢组织冷冻保存法。 展开更多
关键词 卵巢 玻璃化冷冻 低温保存
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促卵泡刺激素对小鼠卵巢玻璃化冻存的抗凋亡作用 被引量:3
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作者 陈杰 王燕蓉 +1 位作者 常青 于泊洋 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期540-542,共3页
目的:观察小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)在小鼠卵巢组织玻璃化冻存过程中的抗凋亡作用。方法:将4周龄C57BL/6J雌性小鼠卵巢组织,分为新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0. 3 IU/ml FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),玻璃化冻存... 目的:观察小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)在小鼠卵巢组织玻璃化冻存过程中的抗凋亡作用。方法:将4周龄C57BL/6J雌性小鼠卵巢组织,分为新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0. 3 IU/ml FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),玻璃化冻存条件为小鼠卵巢入培养液在37℃二氧化碳培养箱培养60 min,接着入1.5 mol/L乙二醇中预渗透平衡8 min,再移入EG5.5-30玻璃化液渗透平衡3.5 min,之后投入-196℃的液氮罐中保存1 d,全过程在22~24℃下进行。每组20枚卵巢,10枚进行HE染色后的正常卵泡百分比计数,10枚进行免疫组织化学法观察。结果:与对照组(CG)比较,玻璃化冻存对照组(VCG)正常卵泡百分比显著降低,active caspase-3的表达量显著升高(P<0.05);与玻璃化冻存对照组(VCG)比较,0.3 IU/ml FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH)组的正常卵泡百分比明显升高,active caspase-3的表达量显著降低(P<0.05)。结论:小鼠卵巢玻璃化冻存全程添加FSH干预可有效抵抗凋亡执行蛋白active caspase-3的表达,有利于卵巢组织形态结构的保护。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 FSH 玻璃化冻存 active CASPASE-3
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小鼠卵巢玻璃化冻存过程中FSH干预对VEGF及VEGFR-2表达的影响 被引量:7
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作者 陈杰 张宁 +7 位作者 王燕蓉 裴秀英 黑常春 马会明 常青 马文智 蔡玉芳 孙苗 《宁夏医科大学学报》 2013年第3期236-239,243+228,共6页
目的通过在玻璃化冻存不同时段给予小鼠卵巢组织重组人促卵泡刺激素(rFSH)干预,观察rFSH对VEGF以及VEGFR-2表达的影响,探索卵巢玻璃化冻存过程中最佳的FSH保护途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(... 目的通过在玻璃化冻存不同时段给予小鼠卵巢组织重组人促卵泡刺激素(rFSH)干预,观察rFSH对VEGF以及VEGFR-2表达的影响,探索卵巢玻璃化冻存过程中最佳的FSH保护途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3IU.mL-1FSH干预玻璃化冻存组,包括全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(BG-FSH)以及冻存后添加FSH组(AG-FSH)。通过形态学技术观察正常卵泡百分比;采用免疫组织化学技术观察卵巢不同细胞VEGF以及VEGFR-2的表达;通过Western-blot方法观察并分析不同玻璃化冻存时段的FSH干预对卵巢VEGF以及VEGFR-2蛋白表达量的影响。结果正常卵泡百分比、VEGF及VEGFR免疫组织化学和Western-blot检测结果组间比较差异均有统计学意义。其中,OG-FSH组各项检测指标均高于其他各组(P<0.05),且BG-FSH、AG-FSH组与FCG相似,高于VCG组(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH干预有利于提高正常卵泡数,以及VEGF、VEGFR-2蛋白的表达。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 FSH 玻璃化冻存 VEGF VEGFR-2
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玻璃化深低温保存小鼠卵巢组织的研究 被引量:2
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作者 王艳 韩颖 +5 位作者 王捷熙 刘安 权国波 刘敏霞 杨超 扈文博 《制冷学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期28-32,共5页
对小鼠卵巢组织进行玻璃化深低温保存的初步研究,探索合适的玻璃化保护剂及保存方法。取3周龄小鼠卵巢组织,采用不同保护剂进行玻璃化深低温保存,-196℃液氮保存一周后复温,进行组织切片HE染色观察,筛选合适的玻璃化保护剂;对保存后的... 对小鼠卵巢组织进行玻璃化深低温保存的初步研究,探索合适的玻璃化保护剂及保存方法。取3周龄小鼠卵巢组织,采用不同保护剂进行玻璃化深低温保存,-196℃液氮保存一周后复温,进行组织切片HE染色观察,筛选合适的玻璃化保护剂;对保存后的小鼠卵巢组织进行自体移植体内培养2周后,取出卵巢组织进行形态学观察及基因表达研究,采用RT-PCR方法检测到了在原始卵泡向初级卵泡发育过程中特异表达的AMH基因及在各个阶段的卵泡中均表达的KL基因。结果表明采用高浓度渗透性保护剂(二甲基亚砜、乙酰胺、丙二醇)的玻璃化保护液对小鼠卵巢组织保存效果较好,说明采用玻璃化技术保存卵巢组织的方法可行,并可采用检测基因表达的方法验证深低温保存卵巢组织的效果。 展开更多
关键词 细胞生物学 小鼠卵巢 玻璃化 AMH基因 KL基因
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两种冷冻方法对人卵巢组织冻存效果的分析 被引量:3
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作者 张娜 张聪 +3 位作者 张辉 贾新转 张轶 唐岚 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2018年第4期285-287,291,共4页
目的:比较程序化冷冻与玻璃化冷冻人卵巢组织的冻存效果。方法:收集19例人卵巢组织标本,每例分成2份,1份应用程序化方法冷冻,另1份应用玻璃化方法冷冻,复苏后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下。38只重症联合免疫缺陷(SCID)裸鼠(移植... 目的:比较程序化冷冻与玻璃化冷冻人卵巢组织的冻存效果。方法:收集19例人卵巢组织标本,每例分成2份,1份应用程序化方法冷冻,另1份应用玻璃化方法冷冻,复苏后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下。38只重症联合免疫缺陷(SCID)裸鼠(移植宿主)随机分为2组:A组19只,移植程序化冷冻复苏的人卵巢组织;B组19只,移植玻璃化冷冻复苏的人卵巢组织。以去除移植宿主双侧卵巢日为D0,移植人卵巢组织日为D21,整个实验过程中,每日通过阴道脱落细胞学检查观察移植宿主动情周期变化,分别于D0、D21、D42、D63取裸鼠静脉血,酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清AMH浓度。结果:切除卵巢后移植宿主动情周期消失,D63共有14只裸鼠恢复动情周期,2组间差异无统计学意义(A组8只,B组6只,P>0.05),但A组恢复时间显著少于B组[(16.38±1.60)d vs.(18.33±1.21)d,P<0.05]。2组间AMH水平在D0、D21、D42、D63差异均无统计学意义(P>0.05),但A组、B组D21 AMH水平均显著低于D0,差异有统计学意义(P<0.05)。恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63逐渐回升但未恢复至D0水平,未恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63均未回升但仍低于D0。结论:程序化冷冻和玻璃化冷冻均能有效保存卵巢组织。在冷冻的卵巢组织经解冻-移植后宿主恢复动情周期方面,程序化冷冻要优先于玻璃化冷冻,但仍需进一步研究。 展开更多
关键词 卵巢 低温保存 抗苗勒管激素 程序化冷冻 玻璃化冷冻 生育力
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FSH干预对小鼠玻璃化冻融移植卵巢血流重建的影响 被引量:4
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作者 吴昊 蔡玉芳 +8 位作者 张红 孙苗 裴秀英 杨延周 马会明 马文智 常青 于佳 王燕蓉 《宁夏医科大学学报》 2014年第5期478-482,F0003,共6页
目的观察小鼠卵巢玻璃化冻融中卵泡刺激素(FSH)干预对移植48h卵巢血流重建的影响及相关机制。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG),0.3IU·mL-1FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG),采用卵巢异体肾被... 目的观察小鼠卵巢玻璃化冻融中卵泡刺激素(FSH)干预对移植48h卵巢血流重建的影响及相关机制。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG),0.3IU·mL-1FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG),采用卵巢异体肾被膜下移植技术,于移植48h通过卵巢形态学观察、荧光血管灌注、EdU检测细胞增殖情况、免疫组织化学及western-blot方法观察并分析血流重建的影响因素。结果小鼠玻璃化冻融卵巢移植48h,与VCG比较,FSH-VG血流灌注较广,且达到卵巢近中央部;FSH-VG组正常卵泡百分比明显高于VCG组(P<0.01),VCG组闭锁卵泡百分比明显高于FSH-VG组(P<0.01),增殖细胞主要为卵巢间质细胞。FSH-VG组CD34、PCNA蛋白表达高于VCG(P<0.01)。结论玻璃化冻融过程中的FSH干预可加速小鼠卵巢冻融后移植的血流重建,CD34及PCNA表达上调。 展开更多
关键词 小鼠卵巢 FSH 玻璃化冻存 卵巢异体异位移植 血流重建
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组织玻璃化冻存技术:优势与尚未完全解决的问题 被引量:3
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作者 张源 曾敏 翟博 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第23期3751-3755,共5页
背景:玻璃化冷冻保存是一种应用前途广阔的低温冷冻方法,通过使用高浓度的玻璃化冻存试剂将生物材料进行玻璃态转变,从而实现活性保存。目的:就玻璃化冻存的生物学原理及玻璃化冻存试剂的分类,卵巢、皮肤与角膜等医学组织标本的玻璃化... 背景:玻璃化冷冻保存是一种应用前途广阔的低温冷冻方法,通过使用高浓度的玻璃化冻存试剂将生物材料进行玻璃态转变,从而实现活性保存。目的:就玻璃化冻存的生物学原理及玻璃化冻存试剂的分类,卵巢、皮肤与角膜等医学组织标本的玻璃化冻存进行综述。方法:以“tissue;vitrification;cryopreservation”为英文检索词;“组织;玻璃化;冷冻保存”为中文检索词,检索1994年1月至2019年10月PubMed数据库及万方医学网相关文献。按照纳入与排除标准筛选后,对最终纳入的45篇文献进行归纳总结。结果与结论:玻璃化冻存可以防止细胞内外冰晶形成,避免了冰晶给细胞带来的多种损伤,有效保留了细胞的生物活性与基本功能。玻璃化冻存试剂主要分为渗透性和非渗透性2种,其操作简便、高效,唯一的缺点是高浓度的冻存试剂对细胞具有一定的毒性损伤。为了降低对组织整体损伤风险,可以混合使用多种低毒冻存试剂。目前玻璃化冻存技术已经成功应用于多种细胞,但组织冻存的技术难题尚未完全解决。 展开更多
关键词 组织 玻璃化 冷冻保存 冻存试剂 卵巢 皮肤 角膜
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玻璃化冻融不同时段rFSH联合rLH干预对小鼠卵巢VEGF及Cx37表达的影响 被引量:3
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作者 陈杰 王燕蓉 +2 位作者 常青 黑常春 孙苗 《宁夏医科大学学报》 2019年第2期114-120,共7页
目的通过在玻璃化冻存的不同时段给予小鼠卵巢组织重组人卵泡刺激素(recombinant follicle-stimulating hormone,rFSH)与重组人黄体生成素(recombinant luteinizing hormone,rLH)共同干预,观察对冻融小鼠卵巢组织的形态学、血管内皮生... 目的通过在玻璃化冻存的不同时段给予小鼠卵巢组织重组人卵泡刺激素(recombinant follicle-stimulating hormone,rFSH)与重组人黄体生成素(recombinant luteinizing hormone,rLH)共同干预,观察对冻融小鼠卵巢组织的形态学、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及缝隙连接蛋白(connexin-37,Cx37)表达的影响。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、冻存全程添加rFSH+rLH组(OG-rFSH+rLH)、冻存前添加rFSH+rLH组(BG-rFSH+rLH)以及冻存后添加rFSH+rLH组(AG-rFSH+rLH),干预组浓度均为0.15IU·mL^(-1) rFSH+0.15IU·mL^(-1) rLH。通过形态学、免疫组织化学技术观察并分析各组卵巢组织形态结构及VEGF、Cx37蛋白表达量的改变;通过Realtime PCR技术检测并分析各组VEGF及Cx37 mRNA的表达变化。结果正常卵泡百分比在VCG组最低,OG-rFSH+rLH组最高(P<0.05),在BG-rFSH+rLH组低于OG-rFSH+rLH组,高于FCG组、VCG组及AG-rFSH+rLH组(P<均0.05);干预组VEGF蛋白表达量由高到低依次为OG-rFSH+rLH组、BG-rFSH+rLH组、AGrFSH+rLH组,且均高于VCG组(P<0.05);Cx37蛋白表达量及VEGF mRNA表达量均为OG-rFSH+rLH组最高,VCG组最低(P<0.05);Cx37 mRNA表达量在OG-rFSH+rLH组最高,VCG组最低,FCG组高于VCG组,低于BG-rFSH+rLH组和AG-rFSH+rLH组(P均<0.05)。结论玻璃化冻存过程添加rFSH+rLH的干预模式提升卵泡存活率、VEGF、Cx37蛋白及mRNA的表达,最佳干预效果依次为全程干预、冻存前时段干预及冻存后时段干预。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 重组人卵泡刺激素 重组人黄体生成素 血管内皮生长因子 缝隙连接蛋白 玻璃化冻存
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小鼠卵巢玻璃化冻存不同时段FSH干预对Cx43表达的影响 被引量:2
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作者 陈杰 王燕蓉 +5 位作者 裴秀英 张晓光 孙苗 常青 马春骥 盛优静 《宁夏医学杂志》 CAS 2012年第9期827-829,共3页
目的通过在玻璃化冻存不同阶段给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)干预,观察FSH对缝隙连接蛋白Connexin-43(Cx43)表达的影响,从而寻找最佳的FSH干预途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0... 目的通过在玻璃化冻存不同阶段给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)干预,观察FSH对缝隙连接蛋白Connexin-43(Cx43)表达的影响,从而寻找最佳的FSH干预途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3 IU/mL FSH干预玻璃化冻存组,包括全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(FG-FSH)以及冻存后添加FSH组(LG-FSH)。通过形态学、免疫组织化学技术及Western-blot技术观察并分析各组卵巢组织Cx43蛋白表达情况。结果正常卵泡百分比为玻璃化冻存数量最低,全称FSH干预玻璃化冻存组最高(P<0.05),全程添加FSH组(OG-FSH)最高,而其他组间正常卵泡百分比间的比较差异无统计学意义。各组间Cx43蛋白表达量从高到低,依次为全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(FG-FSH)、冻存后添加FSH组(LG-FSH)、新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG),且差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH更有利于卵巢组织形态结构的保持以及Cx43蛋白的表达。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 FSH 玻璃化冻存 CX43
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小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH干预对血管生成相关因子表达的影响 被引量:2
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作者 张红 马文叶 +12 位作者 杨延周 裴秀英 常青 马会明 马文智 孙苗 于佳 蔡玉芳 王红燕 黑常春 赵承军 孔斌 王燕蓉 《宁夏医科大学学报》 2015年第7期735-740,封2,共7页
目的在小鼠卵巢玻璃化冻融过程中给予重组人卵泡雌激素(r FSH)干预,通过观察其对卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSH-R)及与血管生成相关的Integrinαvβ3、Angpt-2、Kindlin-2蛋白表达的影响,提供FSH干预对卵... 目的在小鼠卵巢玻璃化冻融过程中给予重组人卵泡雌激素(r FSH)干预,通过观察其对卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSH-R)及与血管生成相关的Integrinαvβ3、Angpt-2、Kindlin-2蛋白表达的影响,提供FSH干预对卵巢血管生成相关因子影响的依据。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3IU·m L-1FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG)。对3组卵巢内各级卵泡进行计数;通过免疫组化方法观察并分析各组FSH-R、Angpt-2、Kindlin-2在卵巢不同细胞中的定位;观察粘附分子Integrinαvβ3在各组卵巢细胞中表达,并进行亚基表达量的分析。结果FSH-VG组的原始卵泡、初级卵泡、正常卵泡及总卵泡数均高于VCG组,但低于FCG组(P均<0.05),闭锁卵泡数VCG组高于FCG及FSH-VG组(P均<0.05);FSH-R与Angpt-2阳性表达呈现FSH-VG与VCG组均低于FCG组(P<0.05),但FSH-VG组高于VCG组(P<0.05);Kindlin-2阳性表达在FSH-VG组与FCG组之间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于VCG组(P<0.01或<0.05);Integrinβ3蛋白表达量FCG与FSH-VG组间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于VCG组(P<0.05),Integrinαv的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冻融过程中添加FSH可以上调FSH-R及粗血管生成的相关因子Integrinβ3、Angpt-2和Kindlin-2蛋白的表达,提高正常卵泡数。 展开更多
关键词 小鼠卵巢 RFSH 玻璃化冻存 FSH-R Integrin ΑVΒ3 Angpt-2 Kindli
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卵巢组织玻璃化冷冻研究进展 被引量:2
12
作者 赵硕 邓晓惠 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2013年第1期45-49,共5页
卵巢组织冷冻是保存女性生殖功能的重要方法之一。近20年来,玻璃化冷冻法作为一种新兴的生物冷冻保存方法,在冷冻人类及动物的卵巢组织中取得了很大进步。相对于传统的程序化冷冻,玻璃化冷冻方法较简单,耗资少。然而,玻璃化冷冻法方案... 卵巢组织冷冻是保存女性生殖功能的重要方法之一。近20年来,玻璃化冷冻法作为一种新兴的生物冷冻保存方法,在冷冻人类及动物的卵巢组织中取得了很大进步。相对于传统的程序化冷冻,玻璃化冷冻方法较简单,耗资少。然而,玻璃化冷冻法方案尚无与程序化冷冻方案一样的统一标准。综述国内外新型的玻璃化冷冻方法的研究进展,探讨如何选择合适的冷冻方法。 展开更多
关键词 卵巢 组织固定 低温保存 玻璃化冷冻
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家兔卵巢组织玻璃化冷冻保存的实验研究 被引量:1
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作者 覃颖 李慕军 《生殖医学杂志》 CAS 2018年第10期994-999,共6页
目的采用直接覆盖玻璃化冷冻(DCV法)和半麦管法玻璃化冷冻(HS法)处理家兔卵巢组织,探讨两种冷冻方法对卵泡组织形态学及超微结构的影响。方法将10只健康雌性新西兰家兔的卵巢组织块随机分配组成新鲜对照组、DCV法和HS法玻璃化冷冻组3个... 目的采用直接覆盖玻璃化冷冻(DCV法)和半麦管法玻璃化冷冻(HS法)处理家兔卵巢组织,探讨两种冷冻方法对卵泡组织形态学及超微结构的影响。方法将10只健康雌性新西兰家兔的卵巢组织块随机分配组成新鲜对照组、DCV法和HS法玻璃化冷冻组3个实验组,观察和比较各组间卵巢内卵泡的组织形态学和超微结构变化。结果 (1)与对照组卵巢组织中的原始卵泡及初级卵泡的形态正常率(分别为88.11%和72.86%)相比,冷冻复苏后的原始卵泡及初级卵泡形态正常率在DCV法(分别为72.66%和55.08%)和HS法(分别为71.73%和56.18%)均显著降低(P<0.05),且初级卵泡的形态正常率均显著低于原始卵泡(P<0.05),但两个冷冻组间无显著差异(P>0.05);(2)观察卵泡超微结构的改变:两种玻璃化冷冻法主要损伤的是细胞浆中的线粒体,细胞核也会出现核固缩现象。结论 DCV法和HS法玻璃化冷冻均能保存家兔卵巢组织内的卵泡,但冷冻所导致的原始卵泡和初级卵泡损伤仍不可避免,其中初级卵泡损伤更明显。这两种冷冻法处理后的卵泡组织形态学无显著性变化,但在一定程度上会损伤卵泡中各组成部分的细胞超微结构。 展开更多
关键词 卵巢 玻璃化 卵泡 超微结构 家兔
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胎儿卵巢组织玻璃化冻存效果的研究 被引量:3
14
作者 王国平 蔡玉芳 +3 位作者 王红燕 梁雪云 王燕蓉 崔岫 《宁夏医学院学报》 2007年第3期228-230,236,F0003,共5页
目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与... 目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与新鲜培养后移植组、添加抗氧化剂培养后移植组相比动情周期恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但高于新鲜移植组(P<0.005);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于两种培养组(P<0.05);在卵泡计数上,实验组每高倍视野的卵泡计数明显高于新鲜移植组(P<0.005),与培养后移植组间的差异无统计学意义(P>0.05)。移植后18周,组织学观察见大量窦卵泡,而培养组仅偶见窦卵泡。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织,且不影响卵泡继续发育的潜能。 展开更多
关键词 胎儿卵巢组织 玻璃化冻存 异种异位移植
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两种玻璃化冷冻方法在大鼠卵巢组织冷冻中的应用效果观察
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作者 李冬秀 耿杨柳 +4 位作者 吴小华 于晓惠 张敏 徐清华 许鹏宇 《解放军医药杂志》 CAS 2015年第5期9-12,共4页
目的比较直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification,DCV)及常规玻璃化冷冻(conventional vitrification,CV)在大鼠卵巢组织冷冻中的应用效果。方法将雌性Wistar大鼠30只随机分为A、B、C组,每组10只,切除大鼠双侧卵巢组织。A组为... 目的比较直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification,DCV)及常规玻璃化冷冻(conventional vitrification,CV)在大鼠卵巢组织冷冻中的应用效果。方法将雌性Wistar大鼠30只随机分为A、B、C组,每组10只,切除大鼠双侧卵巢组织。A组为对照组,B组和C组分别应用CV和DCV冻存2周。复苏后观察3组卵泡的形态,并用末端脱氧核酰转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记实验(TUNEL)检测各组卵泡的凋亡率。结果 A组各级卵泡形态正常;B组卵泡形状不规则,卵母细胞核固缩;C组较大的窦状卵泡损伤。除C组原始卵泡外,B组和C组形态正常的各级卵泡比例均低于A组(P<0.05);C组形态正常的各级卵泡比例高于B组(P<0.05)。B、C组卵泡凋亡率高于A组,且C组低于B组(P<0.01)。结论 DCV较CV卵巢组织效果更好,可以有效保存卵巢组织中的原始卵泡。 展开更多
关键词 卵巢 玻璃化作用 低温保存 大鼠 Wistar
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大鼠卵巢组织冷冻复苏及自体异位移植研究
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作者 李冬秀 耿杨柳 +3 位作者 吴小华 于晓惠 张敏 徐清华 《解放军医药杂志》 CAS 2015年第5期6-8,20,共4页
目的探讨直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification,DCV)在冷冻大鼠卵巢组织中的效果,并对自体异位移植后卵巢组织存活状况及内分泌情况进行分析。方法性成熟的Wistar大鼠50只随机分为A、B、C、D组,A和B组各20只,C和D组各5只。A... 目的探讨直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification,DCV)在冷冻大鼠卵巢组织中的效果,并对自体异位移植后卵巢组织存活状况及内分泌情况进行分析。方法性成熟的Wistar大鼠50只随机分为A、B、C、D组,A和B组各20只,C和D组各5只。A组为新鲜卵巢组织移植;B组卵巢组织经DCV冷冻保存2周复苏后移植;C组为去势对照;D组为假手术对照。自体异位移植6周后检测大鼠血清中雌二醇(E2)水平,计算卵泡密度,观察移植卵巢组织形态学及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况。结果大鼠卵巢组织移植存活的卵巢组织周围可见血管供应,移植失败的卵巢组织呈纤维化状态,与周围组织血供不明显。B组卵巢组织移植存活率低于A组(P<0.05)。B组卵巢组织中卵泡密度均低于A、D组,且A组低于D组(P<0.05)。A、B组血清E2水平高于C组,低于D组(P<0.05)。A、B组卵巢组织PCNA阳性率均低于D组,且B组低于A组(P<0.05)。结论大鼠卵巢组织经DCV法冻融自体异位移植后部分卵泡能存活并可恢复内分泌功能。 展开更多
关键词 卵巢 玻璃化作用 低温保存 移植物存活 移植 自体 大鼠 Wistar
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小鼠卵巢玻璃化冻存全程添加FSH、FSH+LH对Cx43表达的影响
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作者 陈杰 常青 +7 位作者 杨延周 裴秀英 马文智 马会明 黑常春 于佳 孙苗 王燕蓉 《宁夏医科大学学报》 2015年第12期1391-1395,封4,共6页
目的通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)、FSH和促黄体生成素(LH)共同干预,观察FSH及FSH+LH干预对冻存卵巢卵泡缝隙连接蛋白(connexin-43,Cx43)表达的影响,从而判断最佳的激素保护方法。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵... 目的通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)、FSH和促黄体生成素(LH)共同干预,观察FSH及FSH+LH干预对冻存卵巢卵泡缝隙连接蛋白(connexin-43,Cx43)表达的影响,从而判断最佳的激素保护方法。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG),玻璃化冻存对照组(VCG),0.3IU·m L^(-1)FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),以及0.15IU·m L^(-1)FSH+0.15IU·m L^(-1)LH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH+LH)。通过免疫组织化学法、Western blot技术及荧光定量PCR检测,观察并分析各组卵巢组织Cx43蛋白表达量。结果免疫组织化学及Western blot检测结果表明Cx43蛋白表达量在OG-FSH+LH组最高,其次为OG-FSH组、CG组及VCG组(P<0.05),各组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);荧光定量PCR检测结果显示Cx43mRNA表达量从高到低依次为OG-FSH+LH组、OG-FSH组、CG组及VCG组(P<0.05),且各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH+LH的干预方式更有利于冻融卵巢组织缝隙连接蛋白Cx43蛋白的表达。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 促卵泡刺激素 促黄体生成素 玻璃化冻存 缝隙连接蛋白
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不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响
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作者 李跃萍 黄元华 闫庆峰 《昆明医学院学报》 CAS 2011年第4期26-29,共4页
目的研究不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响.方法将9~12周龄小鼠的卵巢组织取出,在冷冻液中平衡后,分别以闭合麦管、开放麦管与冷冻环为冷冻载体快速深低温冻存,解冻后行自体双肾被膜下移植,观察动情周期、移植21 d后取存活... 目的研究不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响.方法将9~12周龄小鼠的卵巢组织取出,在冷冻液中平衡后,分别以闭合麦管、开放麦管与冷冻环为冷冻载体快速深低温冻存,解冻后行自体双肾被膜下移植,观察动情周期、移植21 d后取存活移植物固定,观察单位高倍视野下卵泡数、测定小鼠血清雌激素水平,对比冻存效果.结果移植后各组均有移植物存活,移植物内可见各级处于不同发育阶段的卵泡.闭合麦管、开放麦管与冷冻环组的移植物存活率分别为78.5%、78.5%、84.6%;单位高倍镜下的卵泡数分别为4.0±0.8、4.5±0.7、4.6±0.9;小鼠血清雌激素水平分别为(10.4±0.8)pg/mL、(11.0±1.6)pg/mL、(12.5±1.1)pg/mL.其中,冷冻环组在移植物存活率及小鼠血清雌激素水平与闭合麦管组相比存在显著性差异.结论采用冷冻环做载体能明显提高冻融移植后卵巢组织的存活率与雌激素分泌功能,明显提高对小鼠卵巢组织的保存效果. 展开更多
关键词 小鼠 卵巢组织 玻璃化冻存 自体移植
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卵巢组织玻璃化冷冻的研究进展
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作者 王劲松 左琴 +1 位作者 范涛 李保文 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第12期71-74,81,共5页
玻璃化冷冻法是在急速降温过程中使溶液行成一种无冰晶的玻璃化状态,可以最大程度避免冰晶形成对细胞膜及细胞骨架结构的损伤。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡方法、冷冻载... 玻璃化冷冻法是在急速降温过程中使溶液行成一种无冰晶的玻璃化状态,可以最大程度避免冰晶形成对细胞膜及细胞骨架结构的损伤。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡方法、冷冻载体等。卵巢组织结构较复杂,尚未形成统一的玻璃化冷冻程序。提出了目前存在的问题。 展开更多
关键词 卵巢 玻璃化冷冻 影响因素
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小鼠卵巢玻璃化冻存过程中FSH干预对卵泡形态及整合素αvβ5表达的影响
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作者 贺晓亮 陈杰 +6 位作者 张红 吴昊 王燕蓉 马文智 于佳 孙苗 张宁 《宁夏医学杂志》 CAS 2013年第9期777-779,I0001,共4页
目的观察促卵泡刺激素(FSH)对整合素αvβ5(αvβ5 Integrin)表达的影响,以便提供FSH干预可提高卵巢玻璃化冻存效率的有关依据。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为:新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻融对照组(VCG)、0.3 IU·mL-1FSH干预玻... 目的观察促卵泡刺激素(FSH)对整合素αvβ5(αvβ5 Integrin)表达的影响,以便提供FSH干预可提高卵巢玻璃化冻存效率的有关依据。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为:新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻融对照组(VCG)、0.3 IU·mL-1FSH干预玻璃化冻融组(FSH-VG),通过形态学、免疫组织化学技术观察并分析各组正常卵泡百分比及卵巢组织整合素αvβ5蛋白表达情况。结果正常卵泡百分比、αvβ5蛋白表达为FSH-VG最高,与VCG比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠卵巢玻璃化冻存中的FSH干预有助于卵泡结构的维持及整合素αvβ5蛋白的表达。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 促卵泡刺激素 玻璃化冻存 整合素αvβ5
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