沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的:探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2(Frat2)通过Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法:选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-Time RT-qPCR)法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4μmol·L^-1 Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、c-myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3β)蛋白表达水平。结果:与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05);空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低(P<0.05),G 0/G 1期细胞百分率升高(P<0.05),S期和G 2/M期细胞百分率降低(P<0.05),PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低(P<0.05),G 0/G 1期细胞百分率升高(P<0.05),S期和G 2/M期细胞百分率降低(P<0.05),PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

炎症性肠病患者血浆Frat1水平及其临床意义

背景:进展期T细胞淋巴瘤常见重排蛋白1(Frat1)作为Wnt信号转导通路的激活蛋白在胚胎发育、肿瘤发生等过程中发挥作用,而Wnt信号通路异常与炎症性肠病(IBD)的发病相关。目的:探讨活动性IBD患者血浆Frat1水平及其临床意义。方法:纳入2009年6月～2010年5月上海华东医院42例克罗恩病(CD)患者、55例溃疡性结肠炎(UC)患者和56名正常对照者,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆Frat1水平,以受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆Frat1水平对IBD的诊断价值,应用Pearson相关分析研究血浆Frat1水平与临床疾病活动性的相关性。结果:UC患者血浆Frat1水平显著低于正常对照组(6.55 pg/ml对17.81 pg/ml,P<0.001),CD患者血浆Fratl水平与正常对照组相比差异无统计学意义(P=0.8995)。ROC曲线分析表明血浆Frat1水平对鉴别UC患者和正常对照者无意义(P=0.2736)。UC患者血浆Frat1水平与红细胞沉降率(P=0.5994)、C反应蛋白(P=0.4685)和Mayo评分(P=0.3663)之间均无相关性结论:UC患者血浆Frat1水平降低,可能与UC的发生存在潜在的联系。

FRAT1与肿瘤的相关性研究进展

众所周知,癌基因、抑癌基因以及信号转导通路在细胞癌变中起重要作用。Wnt/β-catenin信号转导通路是一个十分保守的信号通路,其靶基因c-myc、cylinD1等与细胞增殖、凋亡调控有关。研究发现,原癌基因FRAT1是Wnt/β-catenin信号通路的正向调节因子,其异常表达与人类多种疾病密切相关。目前研究证实FRAT1的表达与人类多种肿瘤的恶性程度、临床分期及预后相关,研究FRAT1与肿瘤的相关性有望为肿瘤的早期诊断及治疗提供新的潜在靶点。

Frat1过表达与非小细胞肺癌的不良预后相关

目的 Frat1蛋白在食管癌、卵巢癌、中枢神经系统肿瘤中有异常表达,但是在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况研究甚少,其表达情况与患者预后之间是否存在相关性等尚不清楚。方法用免疫组化SP法对100例原发性NSCLC患者手术标本中Frat1的表达进行检测。结果 Frat1蛋白在肺癌组织中的表达明显增强,Frat1的阳性表达与分化程度(P=0.022)、淋巴结转移(P=0.016)和TNM分期正相关(P=0.011),并且Frat1阳性表达患者的术后生存时间(41.651±4.445个月)明显低于阴性者(74.222±6.844个月,P=0.035)。结论 Frat1在NSCLC中过表达,与肺癌的侵袭和转移等恶性表型有关,Frat1的异常表达提示NSCLC患者的不良预后。