防御假单胞ZF509的分离鉴定及其对甜瓜细菌性果斑病的防治效果研究

为了筛选对瓜类果斑病(acterial fruit blotch,BFB)具有良好拮抗效果的生防细菌,本研究从黑龙江马铃薯根际土壤中分离得到一株对西瓜噬酸菌Acidovorax citrulli具有显著抑制效果的生防菌株ZF509。经形态学观察、生理生化特征、Biolog测定和多基因系统发育树分析,鉴定菌株ZF509为防御假单胞Pseudomonas protegens。经抑菌谱分析,菌株ZF509对4种病原细菌、8种病原真菌具有显著拮抗作用。经酶活检测和抑菌物质分析,ZF509具有溶磷能力,可分泌蛋白酶,合成生物膜,产生氢氰酸,具备2-羟基、2,4-DAPG、藤黄绿脓菌素以及吡咯菌素4种抑菌物质的合成编码基因。盆栽试验结果表明,接种ZF509的处理果斑病发病的病情指数显著降低,防效可达73.46%,显著优于对照药剂噻霉酮处理。综上所述,菌株ZF509对瓜类细菌性果斑病具有良好的生防潜力和应用前景。

19种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病菌的杀菌活性评价

瓜类细菌性果斑病是由西瓜噬酸菌引起的一种种传病害,在生产上的危害极为严重,可造成大面积的减产甚至绝产,但目前在生产中还缺乏有效的防治药剂。为筛选出高效防治细菌性果斑病的杀菌剂,在室内筛选了19种杀菌剂的离体活性成分,并对高活性杀菌剂进行毒力评价和活体盆栽验证。室内研究结果表明,0.3%四霉素水剂等8种杀菌剂离体杀菌活性显著,毒力强度依次为0.3%四霉素水剂>1%申嗪霉素悬浮剂>5%噻霉酮悬浮剂>20%辛菌胺醋酸盐水剂>20%丙硫唑悬浮剂>4%春雷霉素水剂>0.4%蛇床子素水剂>0.5%小檗碱水剂。活体盆栽试验结果表明,0.5%小檗碱水剂、20%丙硫唑悬浮剂、4%春雷霉素水剂和5%噻霉酮悬浮剂这4种药剂对甜瓜细菌性果斑病有较好的防治效果,其中0.5%小檗碱水剂对甜瓜细菌性果斑病的保护和治疗作用最强,在供试质量浓度为100 mg·L^(-1)时的保护和治疗防效分别为79.66%和73.24%。上述研究试验表明,0.5%小檗碱水剂、20%丙硫唑悬浮剂、4%春雷霉素水剂和5%噻霉酮悬浮剂可作为田间防治甜瓜细菌性果斑病的有效候选药剂。

海南省东方市甜瓜细菌性果斑病病原鉴定

细菌性果斑病严重影响甜瓜生产,为确定其病原菌种类,从海南省东方市种植基地采集大量疑似细菌性果斑病的甜瓜样本,进行病原菌分离纯化,并按柯赫法则对获得的菌株进行致病性测定。通过菌落形态观察、生理生化测定及16S rDNA序列比对分析,对分离病原菌进行鉴定。结果表明,大田采集的所有甜瓜病果中均分离到培养性状一致的细菌,细菌分离率为100%;所有分离菌株均对甜瓜果实具有致病性,该病原菌革兰氏反应呈阴性,其菌落形态及生理生化测定结果与已报道的西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)一致;BLAST比对与A. citrulli菌株的同源性可达100%,系统发育分析也进一步证实该病菌为A. citrulli。研究结果确定了甜瓜果斑病的致病菌,为该病的有效防治提供了依据。

13种药剂种子处理对瓜类细菌性果斑病的防治效果

瓜类细菌性果斑病是西瓜、甜瓜等瓜类作物的重要细菌性病害。为筛选防控果斑病的有效药剂,本研究比较了13种药剂浸种带菌西瓜种子不同时间对果斑病的防治效果及对种子发芽的影响;并通过“先喷药后接种”和“先接种后喷药”,比较了13种药剂对西瓜苗期果斑病的预防和治疗效果,同时测定了助剂8.6%聚乙二醇对13种药剂的增效作用。药剂浸种试验结果表明,带菌种子在10%阿苯达唑750倍液、2%春雷霉素300倍液中浸种12 h,对果斑病的防效均达到100%,发芽率比清水浸种分别高16.20百分点和16.34百分点;杀菌剂1号200倍液处理12 h的防效较好,为85.58%,且促进种子萌发。苗期喷施药剂的试验结果表明,13种药剂对果斑病的预防效果均好于治疗效果,预防效果和治疗效果都超过60%的药剂有7种,以10%阿苯达唑600倍液对果斑病的防效最好,预防效果和治疗效果分别为87.58%和75.70%,与8.6%聚乙二醇混配后分别提高至94.12%和81.31%,增效作用显著。本研究结果为后续田间试验和大面积推广应用提供了技术支撑。

瓜类细菌性果斑病菌拮抗细菌的筛选及其抑菌作用

从土壤中筛选出抑制哈密瓜细菌性果斑病的拮抗菌株,明确其分类地位,测定其生长条件及防病效果。采用梯度稀释法及平板对峙法进行菌株的分离及筛选,综合形态学观察、生理生化测定以及分子鉴定等多方面对菌株进行鉴定,确定生防菌种属,并测定其最适生长条件,利用平板对峙法测定其抑菌作用,并分别采用针刺接种法、叶面喷施法对生防菌的离体叶片和盆栽防病试验进行测定。本研究从土样中共分离出196株细菌,经对峙筛选发现有20株细菌具有抑菌效果,其中编号为131、791的两株细菌对哈密瓜细菌性果斑病病原菌具有较好的平板拮抗效果,抑菌圈直径分别为(19.03±0.13)mm,(17.55±0.29)mm。经鉴定菌株131为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),菌株791为贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)。菌株131的最适生长条件为NB培养基,培养18 h,温度37℃,pH 7,接种量为2%。菌株791的最适生长条件为KB培养基,培养18 h,温度37℃,pH 6,接种量为1%。菌株131和791对哈密瓜细菌性果斑病的离体叶片防效分别为83.33%和87.53%,室内盆栽防效分别为69.86%和77.99%,同时也对多种病原真菌具有抑制作用。菌株131和791均为对哈密瓜细菌性果斑病具有较好防效的芽孢杆菌(Bacillus),对瓜类作物细菌性果斑病的防治提供了理论补充,奠定了果斑病害生物防治的基础。

防治甜瓜细菌性果斑病种传病原菌的杀菌剂筛选

选择16种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病菌进行抑菌环试验,筛选到5种具有不同程度抑菌效果的杀菌剂,并选用其中抑菌效果较好的3种杀菌剂(杀菌剂1号200倍液、萎锈·福美双100倍液和0.3%四霉素250倍液)处理甜瓜带菌种子。结果表明:杀菌剂处理后,PCR检测结果仍为阳性,但在杀菌剂1号200倍液处理的甜瓜带菌种子中未分离到致病活菌,0.3%四霉素250倍液处理后种子的带菌量明显减少,而萎锈·福美双100倍液则无明显杀菌效果。杀菌剂1号200倍液和0.3%四霉素250倍液处理对种子发芽无明显影响,而苗期发病率与对照相比均显著降低。

荧光假单胞菌2P24防控瓜类果斑病机制初探

为初步解析荧光假单胞2P24对瓜类细果斑病的防控机制,测试其次生代谢物2,4-DAPG、MPC对西瓜嗜酸菌Acidovorax citrulli生长的影响,并比较分析2P24及其突变株△phlD(丧失2,4-DAPG合成能力)及△gacS(丧失2,4-DAPG、HCN、蛋白酶合成能力)的病害防控效果和对甜瓜生理生化指标的影响。结果表明,2,4-DAPG及MPC对病原菌的生长、游动性及生物膜的形成均具有抑制作用;与2P24相比,△phlD对病原菌的生长抑制降低,△gacS丧失生长抑制作用。△phlD及△gacS病害相对防治率分别下降了44.3%和77.1%。2P24对于西瓜、甜瓜幼苗有明显的促生作用,可显著提高幼苗株高和鲜重,同时发现2P24可在病原菌接种后诱导甜瓜抗性相关酶SOD、CAT、POD活性提升及3个相关抗性基因MELO3C023441、MELO3C022146及MELO3C004303的表达。本研究结果为瓜类果斑病的生物防治研究提供了参考和理论依据。

10种杀菌剂处理对西瓜细菌性果斑病的防治效果

【目的】西瓜细菌性果斑病是一种危害范围广、毁灭性强的种子传播病害,是西瓜生产的主要病害之一。为筛选出能够有效防治西瓜细菌性果斑病的药剂,选择生产上常用的10种杀菌剂进行了防效测定。【方法】防效测定采用室内平板抑菌试验、盆栽防效测定。【结果】室内平板抑菌试验结果显示,3%中生菌素可湿性粉剂、3%噻霉酮水分散粒剂、1.5%噻霉酮水乳剂、2%春雷霉素水剂、20%噻菌铜悬浮剂和20%噻森铜悬浮剂对该病菌具有抑制作用,其中抑菌效果较好的为3%中生菌素可湿性粉剂和3%噻霉酮水分散粒剂。盆栽防效测定结果显示,在接种处理14 d后,3%中生菌素可湿性粉剂和3%噻霉酮水分散粒剂对西瓜细菌性果斑病的防治效果可达90%。【结论】3%中生菌素可湿性粉剂和3%噻霉酮水分散粒剂具有较好的抑菌效果,在生产上可推荐其用于西瓜细菌性果斑病的防治。

哈密瓜细菌性果斑病病原菌鉴定

20 0 0年在内蒙古和新疆的哈密瓜上发现一种新细菌病害—哈密瓜细菌性果斑病 ,从病叶和病果上分离到 33个细菌菌株 ,接种哈密瓜、西瓜和甜瓜后 ,发病症状与自然发病症状完全一致 ,而且从接种病株上又重新分离到了此病原细菌 ,这 33个细菌菌株经柯赫法则证明均为该病的致病菌。各菌株致病力无明显差异。经革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、生理生化反应、细胞化学成分分析(糖、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、mol% G+ C)、DNA- DNA杂交 ,确认该病原菌为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp. citrulli Willems et al. 1992 ) =类产碱假单胞菌西瓜亚种 (Pseudomonaspseudoalcaligenes subsp.citrulli Schaad et al.1978)。该病菌除侵染哈密瓜外 ,人工接种尚能侵染多种葫芦科及番茄。

巢式PCR快速检测西瓜细菌性果斑病菌

【目的】建立nested-PCR方法,快速检测西瓜种子中的燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli,Aac),为西瓜细菌性果斑病(bacterial fruit blotch of watermelon,WFB)的防控提供技术支持。【方法】根据Aac BOX短重复序列的PCR产物设计两对引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2,建立以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,以5μL样品处理液于99℃高温裂解10 min,再放置冰上冷却5 min,以所释放病原DNA为模板进行PCR扩增,采用50μL反应体系:5μL 10×PCR buffer(25 mmol·L-1MgCl2),4μL dNTP(D4030RA,2.5 mmol·L-1),引物(5μmol·L-1)各3μL,0.4μL Taq DNA酶(DR001B,5 U·μL-1),通过退火温度优化,反应条件为:引物BX-L1/BX-R5各3μL进行第一轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s;65℃,45s;72℃,1 min;35个循环;72℃,延伸7 min;取扩增后的产物1μL为模板,以引物BX-L1/BX-S-R2各3μL进行第二轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s,66℃,45 s,72℃,1 min,30个循环,72℃,7 min。在此条件下对梯度Aac菌悬液、模拟带菌种子提取液进行特异性、灵敏性及重复性检验,对不同带菌率的西瓜种子提取液进行检测。【结果】引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2在检测不同来源的Aac菌株时都产生了预期大小的片段,并且对其近源种燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种(A.avenae subsp.cattleyae)、魔芋假单胞菌(A.avenae subsp.konjaci)及其不相关菌株未扩增出目标片段。以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,对Aac纯菌液和模拟带菌种子提取液的最低检测限4.7×101cfu/mL,比direct-PCR灵敏度高出1 000倍。当西瓜种子带菌率在0.1%—0.5%时,nested-PCR阳性检测率为66.7%;当种子带菌率为1%—10%时,nested-PCR的阳性检测率为83%—100%。【结论】以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR方法,能够快速、高效检测携带微量Aac的西瓜种子,检测结果重现性高。

福建省西瓜细菌性果斑病的病原鉴定

2004年在福建种植的西瓜上发现一种新细菌病害———西瓜细菌性果斑病.从病叶和病果上分离到20个细菌菌株,接种西瓜后,发病症状与自然发病症状完全一致,而且从接种病株上又重新分离到了相同细菌,这20个细菌菌株经柯赫氏法则证明均为该病的致病菌.各菌株间致病力无明显差异.挑选其中的14个菌株经革兰氏染色、菌体形态、培养性状、生理生化特性等测试,确认该病原菌为燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenaesubsp.citrulli).该病菌除侵染西瓜外,人工接种尚能侵染多种葫芦科及番茄、玉米、大豆等作物.

种子引发处理对无籽西瓜幼苗生长的影响和对细菌性果斑病菌消毒的效果

种子出苗率低和传带细菌性果斑病菌是制约三倍体无籽西瓜生产的主要原因。本试验利用KMnO4、CuSO4和ZnSO4的不同浓度溶液对无籽西瓜种子进行不同时间引发处理,通过滤纸发芽试验,观测其对种子发芽和幼苗生长的促进作用;借助平板法测定引发溶液对细菌性果斑病菌FC247的抑制作用,免疫凝聚试纸条和传统PCR检测引发处理对种子人工接菌FC247的消毒效果。结果表明:0.1%CuSO4溶液引发处理4 h和0.2%ZnSO4溶液引发处理24 h,分别比未引发处理的无籽西瓜种子发芽率提高71.1%和73.3%,并能显著提高发芽整齐度和幼苗素质;同时,引发溶液对细菌性果斑病菌有显著抑制作用,并对人工接菌种子表现出一定程度的消毒效果。

哈密瓜细菌性果斑病菌快速检测方法的建立

【目的】哈密瓜细菌性果斑病在中国为新发生的病害,其病原菌为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.Citrulli),危害瓜果造成品质下降。该病为典型的种传细菌性病害,因此种子检疫成为防治此病害的重要手段。【方法】通过实验,将生物学、免疫学和分子生物学检测技术有机结合,建立了一套针对哈密瓜果斑病的种子带菌检测方法Bio-IMS-Real-timePCR。【结果】经过人工模拟种子带菌检测实验,结果表明该方法可成功地检测出1000粒种子中的1粒带菌种子(带菌量约为1.04×105CFU/种子,经计算,可以检测的最初浓度为2CFU·ml-1ASCM培养液),且信号较强。【结论】该检测方法的建立,大大提高了对哈密瓜细菌性果斑病菌检测的精度,也为生产实践中哈密瓜果斑病的防治提供了重要的技术支持。

哈蜜瓜种子带细菌性果斑病菌检测技术的研究

哈蜜瓜细菌性果斑病是世界性的检疫对象之一 ,主要以种子带菌进行远距离传播 ,本文通过温室育苗、室内分离和PCR(聚合酶链式反应 )技术对哈蜜瓜种子带菌情况和主要带菌部位进行了检验 ,结果表明 :3种方法都可以对种子带菌情况进行检测 ,分离检测和PCR检测还可以确定种子的带菌部位 ,PCR技术具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等特点。另外检测结果也表明种子带菌以种皮为主 ,种仁的带菌量较少。

广西甜瓜细菌性果斑病病原鉴定及16S rDNA序列分析

【目的】对广西区内疑似甜瓜细菌性果斑病的病原菌进行分离鉴定,明确引起该病害的病原菌,为甜瓜细菌性果斑病的抗病育种及综合防治提供理论依据。【方法】分别采集南宁市和贺州市疑似甜瓜细菌性果斑病的病叶(编号:WM0922)和病果(编号:XD0611)样品,对样品进行分离纯化,并通过测定分离菌株的致病性、观察菌落形态和培养性状、测定其生理生化性状及比对分析16S rDNA序列,对供试病原菌进行鉴定。【结果】从编号WM0922的病叶上分离得到5株菌株,经致病性测定有3株菌株(WM0922-2、WM0922-3和WM0922-4)具有致病性;从编号XD0611的病果上分离得到8株菌株,经致病性测定有4株菌株(XD0611-5、XD0611-6、XD0611-7和XD0611-8)具有致病性;择优选取具有代表性的菌株WM0922-3和XD061 1-7进行后续试验,发现二者均可侵染葫芦子叶,革兰氏反应均为阴性,培养性状及生理生化测定结果一致,对比分析16S rDNA基因序列,与Acidororax citrulli的相似性均在99%以上。【结论】引起甜瓜细菌性果斑病的病原菌为燕麦嗜酸菌西瓜亚种(A.avenae subsp.citrulli)。

西瓜细菌性果斑病的发生与病原菌鉴定

首次报道了西瓜细菌性果斑病在吉林省的发生。从不同来源病株上的不同发病部位分离出有致病性的2个菌株(W1和W2),通过对其形态学、培养性状、生理生化性状和寄主范围的测定,并根据其在西瓜上引起病害的症状特点,将其确定为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovoraxavenaesubsp citrulliWillemsetal )。

西瓜细菌性果斑病菌在不同场所存活期的检测

选择西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax avenae subsp.citrulli,Aac)的抗利福平菌株RifAac,通过人工模拟接种试验,采用选择性平板分离、菌落PCR(Bio-PCR)和常规PCR方法,观察该病原细菌在西瓜种子、土壤、病残体和田水中的存活期。结果表明,果斑病细菌在种子表面可存活4～5个月,在田水中可存活2个月,在不含植物残体的土壤中可存活8个月,在含西瓜残体的土壤中可以存活12个月以上。

药物浸种处理防治西瓜嫁接苗细菌性果斑病试验

【目的】筛选防治西瓜嫁接苗细菌性果斑病（BFB）的种子处理有效药剂,为防治BFB提供科学依据。【方法】先以17种药剂的200倍液对西瓜种子进行浸种处理,依据嫁接苗BFB的发病率初步筛选防治BFB的有效药剂;以初选有效药剂进行不同浓度、不同混合组合及不同浸种方法处理对嫁接苗BFB的防治效果试验。【结果】初试结果表明,2%春雷霉素处理西瓜嫁接苗BFB病株率较低,可用于下一步试验。复试结果表明,2%春雷霉素100、200、300、400、500倍液浸种处理有籽西瓜种子,嫁接后12d嫁接苗BFB发病率分别为1.0%、36.7%、94.3%、95.7%、98.1%;2%春雷霉素200倍＋乐无病、72%农用链霉素、72%农用硫酸链霉素800倍液浸种处理有籽西瓜种子,嫁接后12d嫁接苗BFB发病率为1.0%~2.4%;2%春雷霉素100、200、300、400倍液处理西瓜干种子,嫁接后12d有籽西瓜嫁接苗BFB发病率为0.5%~5.7%,无籽西瓜嫁接苗BFB发病率为8.1%~11.4%;2%春雷霉素400倍＋乐无病、72%农用链霉素、72%农用硫酸链霉素1000倍液处理西瓜干种子,嫁接后12d有籽西瓜嫁接苗BFB发病率为1.0%~2.0%,无籽西瓜嫁接苗BFB发病率为6.7%~9.5%。【结论】2%春雷霉素可作为防治西瓜嫁接苗BFB的首选特效药,推荐浓度为2%春雷霉素400倍或以2%春雷霉素400倍搭配其他杀菌剂使用。

西瓜细菌性果斑病症状描述和病原菌鉴定

描述了近年来海南省乐东、东方等县西瓜种植区发生的一种细菌性病害在西瓜果实和叶片上的危害症状，测定了病原菌的形态、染色反应、培养性状、生理生化特性和寄生范围，将病原菌鉴定为Acidovoraxavenaesubsp．citrulli（schaad，etal．）willems，etal．

海南甜瓜细菌性果斑病病原菌鉴定

通过田间采集病样,分离到致病性细菌菌株LD101206,采用柯赫氏法则对分离物进行致病性测定,通过对其形态学、培养性状、生理生化性状和16S rRNA基因序列分析,将菌株LD101206鉴定为燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli Willems)。