儿童呼吸道流感嗜血杆菌分离株耐药性与ftsI基因分型研究

目的调查呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离株的耐药性与ftsI基因的关系。方法 2011年6月—2012年9月,收集呼吸道感染患儿呼吸道标本中分离到的流感嗜血杆菌,用微量肉汤稀释法测定常用抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);用Nitrocefin纸片法检测细菌的β内酰胺酶;用聚合酶链反应(PCR)技术对分离株进行ftsI基因分型;比较不同ftsI基因型菌株对常用抗菌药物的耐药性。结果473株流感嗜血杆菌中产β内酰胺酶菌株占51.8%(245/473),ftsI基因突变率为33.4%(158/473);β内酰胺酶基因阴性氨苄西林耐药型菌株(gBLNAR)以GroupⅠ/Ⅱ型为主(113/154),68.1%(77/113)的该型菌株对氨苄西林敏感,85.4%(35/41)的gBLNAR GroupⅢ菌株对氨苄西林不敏感;gBLNAR菌株对头孢克洛、头孢呋辛、头孢曲松和阿莫西林-克拉维酸等β内酰胺类抗生素MIC90和耐药率明显高于gBLNAS(敏感)菌株(P<0.01),对左氧氟沙星、阿奇霉素和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑等非β内酰胺类抗菌药物的MIC90和耐药率与gBLNAS菌株相比差异无统计学意义(P>0.05);gBLNAR GroupⅢ菌株对β内酰胺类抗生素的MIC90和耐药率高于gBLNAR GroupⅠ/Ⅱ菌株(P<0.01),两者对非β内酰胺类抗菌药物的MIC90和耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。结论呼吸道感染患儿呼吸道流感嗜血杆菌分离株发生ftsI基因突变的情况较为常见,突变以GroupⅠ/Ⅱ型为主,明显影响氨基青霉素类和某些第二代头孢菌素的抗菌活性。

青霉素结合蛋白3编码基因ftsI在多重耐药鲍曼不动杆菌中表达及碳青霉烯类诱导对其表达的影响

目的研究青霉素结合蛋白3(penicillin-binding protein 3,PBP3)编码基因ftsI在多重耐药鲍曼不动杆菌(Multidrug resistant Acinetobacter baumannii,MDR-AB)中表达情况,探明碳氢霉烯诱导对MDR-AB中ftsI表达的影响。方法收集2019年1月~6月成都市郫都区人民医院临床分离的38株MDR-AB菌株,PCR扩增ftsI基因,产物进行测序,将MDR-AB菌株与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)ftsI基因序列翻译成氨基酸序列进行同源建模和可视化比对分析。然后再分别用亚胺培南、美罗培南和多尼培南对菌株进行诱导,qRT-PCR检测ftsI的表达情况。结果38株MDR-AB均携带ftsI基因,测序结果与Genbank中ATCC 17978标准菌株ftsI序列显示99.54%同源,将菌株MDR-AB 1与SDF株的ftsI基因序列翻译成氨基酸序列后,发现SDF菌株多出251号位赖氨酸、252号位苏氨酸、253号位甘氨酸和254号位缬氨酸,同源建模和可视化分析发现两者ftsI基因编码蛋白空间结构明显不同。MDR-AB菌株经三种碳氢霉烯类抗生素诱导后,ftsI基因相对表达量均下降,其中亚胺培南组和美罗培南组相对于未处理组ftsI基因表达下调差异有统计学意义(t=5.314,5.424,均P<0.05)。结论MDR-AB普遍携带ftsI基因,其ftsI编码蛋白空间结构与SDF菌株存在明显差异,这可能是AB产生耐药的一个重要因素。碳氢霉烯类诱导可导致ftsI基因表达下调,以亚胺培南、美罗培南诱导效果最明显。

儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌的耐药性和基因分型

目的研究儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌的耐药性和该菌ftsI基因分型与耐药表型的关系。方法收集2016年第一季度住院患儿鼻咽吸出物中分离到的流感嗜血杆菌141株;用纸片扩散法检测细菌对抗菌药物的耐药性;用Nitrocefin纸片法检测细菌的β内酰胺酶;用PCR技术对分离菌株进行ftsI基因检测;比较不同基因型菌株对抗菌药物的耐药情况。结果141株流感嗜血杆菌β内酰胺酶检出率为40.4%(57/141)、氨苄西林耐药率为53.2%(75/141)。检出ftsI基因突变率为72.3%(102/141),以Ⅲ型为主(72/102,70.6%)。β内酰胺酶基因阴性氨苄西林耐药型菌株(g BLNAR)对氨苄西林和头孢呋辛的耐药率高于β内酰胺酶基因阴性氨苄西林敏感型菌株(g BLNAS)(P<0.05)。结论儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌ftsI基因突变率高,以Ⅲ型为主。ftsI基因突变增加了流感嗜血杆菌对氨苄西林和头孢呋辛的耐药性。

猪胸膜肺炎放线杆菌ftsl基因的克隆及分析

为探讨App Ftsl结构和功能,筛选猪胸膜肺炎放线杆菌的药物靶点提供科学依据。试验根据GenBank中APP的ftsI基因序列设计引物进行PCR扩増后运用软件进行序列分析。结果:APP的ftsI蛋白基因全长1746bps,编码584个氨基酸。与GenBank中胸膜肺炎放线杆菌血清1、2、3、4、5型基因组的fteI序列进行比较,具有95%的同源性。APP fteI与猪胸膜肺炎放线杆菌属于进化的同一分支,与其他一些细菌具有高度同源性。结论:APP FtsI可能成为猪胸膜肺炎放线杆菌一个新的广谱药物靶点。

新生儿流感嗜血杆菌分离株β-内酰胺类最低抑菌浓度与β-内酰胺类分子耐药机制研究

目的研究新生儿下呼吸道流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)分离株β-内酰胺类抗生素耐药趋势变化与分子耐药机制。方法对19株新生儿Hi分离株进行再鉴定,通过PCR法测菌株P6、fucK和Cap基因进行血清学分型,用肉汤微量稀释法检测氨苄西林、阿莫西林克拉维酸和头孢呋辛最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);对TEM-1、ROB-1和ftsI基因进行测序和变异分析。结果(1)19株Hi经P6、fucK和Cap基因检测证实均为无荚膜型,即不可分型流感嗜血杆菌(non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)。(2)与2003至2004年比较,2013至2014年新生儿下呼吸道NTHi分离株氨苄西林、阿莫西林克拉维酸和头孢呋辛的MIC值明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)2003至2004年(n=9)和2013至2014年(n=10)产β-内酰胺酶菌株均为3株,10年间比较差异无统计学意义(P>0.05);BLA基因检测显示6株产β-内酰胺酶均为TEM-1型,未检测出ROB-1型菌株。(4)2003至2004年仅出现1株基因型β-内酰胺酶阳性氨苄西林耐药(gBLPAR),2013至2014年出现基因型β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药(gBLNAR)1株、基因型β-内酰胺酶阴性氨苄西林中介(gBLNAI)3株、gBLPAR 3株、基因型β-内酰胺酶阳性阿莫西林克拉维酸耐药(gBLPACR)1株。(5)2013至2014年ftsI基因出现了11个氨基酸替代模式,而2003至2004年仅出现5个氨基酸替代模式;10年间比较ftsI基因S357N、S385T、N526K、T532S变异率显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。1株2014年分离的耐氨苄西林、阿莫西林克拉维酸和头孢呋辛的gBLNAR/gBLNACR菌株同时出现D350N、S357N、M377I、S385T、L389F、A502T、N526K变异。结论新生儿下呼吸道NTHi感染患儿或将迅速面临β-内酰胺类抗生素多重耐药的严峻挑战。