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The preparation of anti-hnRNP A2/B1 polyclonal antibody and its potential application in non-small cell lung cancer
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作者 Lejie Cao Yeshan Li +3 位作者 Meiqing Xu Runsheng Li Zubao Lei Xianwu Li 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2008年第5期249-253,共5页
Objective: In order to evaluate potential application for diagnosis and prognosis of non-small cell-lung cancer (NSCLC), as well as to determine its role in the pathogenesis of the disease, we prepared anti-human h... Objective: In order to evaluate potential application for diagnosis and prognosis of non-small cell-lung cancer (NSCLC), as well as to determine its role in the pathogenesis of the disease, we prepared anti-human hnRNPA2/B1 potyclonal antibody. Methods: Prokaryotic expression vector of pET28a (+)-hnRNP A2/B1 was constructed and bansformed into E.coli BL21. The recombinant protein induced by IPTG was purified and injected to rabbits for antibody preparation. Expression of hnRN P A2/B1 was examined in 45 tissues of NSCLC and 16 inflammatory pseudotumor tissues of lung by immunohistochemistry with the antibody. The commercial hnRNP A2/B1 monoclonal antibody was used as a controI.Results: (1) Polyclonal an-tibody against hnRNP A2/B1 with high title was obtained. (2) The positive staining in NSCLC tissues was 62.22%, which was substantially higher than that in normal tissues (40%, P = 0.035) or inflammatory pseudotumor tissues (31.25%, P=0.033). (3) Expression of hnRNP A2/B1 positively correlated with age and the history of smoking, whereas it negatively correlated with differentiation staging of tumors. (4) Follow-up study showed that the survival time of patients with positive staining was significantly shorter than that of patients without hnRNP A2/B1 expression (P=0.048). Conclusion: It is successful to make the recombinant protein and prepare the polyclonal antibody agonist human hnRNP A2/B1. It may be a valuable marker for the diagnosis and prognosis of NSCLC. Our results provide a basis for further study in clinical application. 展开更多
关键词 non-small cell lung cancer hnRNP A2/b1 polyclonal antibody monoclonal antibody immunohistochemistry
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伏马菌素B_1免疫检测方法的研究 被引量:34
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作者 郭云昌 刘秀梅 刘江 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期238-240,共3页
本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素B1(FB1)的快速、灵敏、简便的免疫检测方法—建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法(DC—ELISA法);其最低检出浓度为10ng/ml,线性范围在10ng... 本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素B1(FB1)的快速、灵敏、简便的免疫检测方法—建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法(DC—ELISA法);其最低检出浓度为10ng/ml,线性范围在10ng~5μg/ml。对新疆、安徽、黑龙江、哈尔滨四省市玉米样品中的FB1含量进行了测定,结果表明156份样品中有34份检出FB1,阳性率为21.79%,含量在0.18~31.32μg/g范围内,平均含量为12.04μg/g。 展开更多
关键词 伏马菌素b1 单克隆抗体 免疫检测
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抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:5
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作者 郭云昌 刘秀梅 刘江 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期297-299,共3页
选择钥孔虫戚血蓝蛋白( K L H)和牛血清白蛋白( B S A)作为半抗原伏马菌素 B1 ( F B1 )的载体蛋白,以戊二醛一步法分别制备免疫原 K L H F B1 和固相抗原 B S A F B1 蛋白结合物。用 K L H F... 选择钥孔虫戚血蓝蛋白( K L H)和牛血清白蛋白( B S A)作为半抗原伏马菌素 B1 ( F B1 )的载体蛋白,以戊二醛一步法分别制备免疫原 K L H F B1 和固相抗原 B S A F B1 蛋白结合物。用 K L H F B1 免疫 Balb/c 小鼠后,应用细胞融合技术,筛选后获得了1株稳定分泌抗 F B1 单克隆抗体的杂交瘤细胞株( F B1 4 G4 ),分泌的抗体属于 Ig G1 亚类。腹水的抗体效价为1v1×107 ,抗体与其它3种真菌毒素、 F B3 和2种载体蛋白均无交叉反应,与 F B2有轻微的交叉反应。 展开更多
关键词 伏马菌素b1 单克隆抗体 制备 鉴定
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腐马素B_1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
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作者 钟秋芳 肖希龙 +2 位作者 章红 William P.Norred F.Meredith 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期267-270,共4页
本研究采用戊二醛一步法制备免疫抗原FB1 KLH和包被抗原FB1 BSA ,免疫BALB/c小鼠 ,建立间接酶联免疫吸附法 (I ELISA)并测定血清效价。结果表明 :FB1 BSA最适包被浓度为 1μg/ml,抗体最适稀释度为 1∶10 0 0 0 ,血清效价可达 1∶12 80 ... 本研究采用戊二醛一步法制备免疫抗原FB1 KLH和包被抗原FB1 BSA ,免疫BALB/c小鼠 ,建立间接酶联免疫吸附法 (I ELISA)并测定血清效价。结果表明 :FB1 BSA最适包被浓度为 1μg/ml,抗体最适稀释度为 1∶10 0 0 0 ,血清效价可达 1∶12 80 0 0。第 4次免疫后 ,通过淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,融合率为 96 % ,阳性率为 98%。细胞上清抗体ELISA效价为 1∶3 2× 10 6,腹水抗体效价为 1∶8× 10 8。经鉴定 ,该株单抗的亚类为IgG1,分子量为 185 4KDa ,染色体数目介于 96~ 10 4之间 ,亲和常数为 1 16× 10 7M-1,与另三种常见的真菌毒素 (串珠镰刀菌素 ,T 2毒素 ,玉米赤霉烯酮 )和两种载体蛋白 (牛血清白蛋白 ,血蓝蛋白 )无交叉反应 。 展开更多
关键词 腐马素b1 单克隆抗体 制备 鉴定
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人神经菌毛素1 b结构域单克隆抗体的制备及其抑制血管生成作用 被引量:1
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作者 戴华 戴长松 +1 位作者 张海霞 沈颖 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期288-293,共6页
目的:制备抗人神经菌毛素1(human neuropilin 1,Hu NRP1)b结构域单克隆抗体(monoclonal antibodies,m Ab),为靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料。方法:运用杂交瘤技术,将Hu NRP 1 b结构域重组蛋白(TF-Hu NRP1b)免疫BALB/c鼠,共免疫3次,... 目的:制备抗人神经菌毛素1(human neuropilin 1,Hu NRP1)b结构域单克隆抗体(monoclonal antibodies,m Ab),为靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料。方法:运用杂交瘤技术,将Hu NRP 1 b结构域重组蛋白(TF-Hu NRP1b)免疫BALB/c鼠,共免疫3次,取免疫鼠的脾脏细胞与sp2/0细胞进行融合,采用间接免疫荧光法(immunofluorescent assay,IFA)筛选稳定分泌抗Hu NRP1bm A,以Western blot、IFA、流式细胞术分析m Ab的特异性。以MTT法及小室迁移实验分析m Ab抑制血管生成的能力。结果:获得1株稳定分泌抗Hu NRP1bm Ab的细胞株4F11。Western blot结果表明,本研究所获得的m Ab 4F11只与重组Hu NRP1b发生反应,与对照蛋白不发生反应;IFA及流式细胞分析结果表明,所获得的m Ab能够识别肿瘤细胞MDA-MB-231、Hep G2以及人脐静脉内皮细胞表达的天然Hu NRP1蛋白;MTT法及小室迁移实验表明,所获得的m Ab 4F11具有抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的能力。结论:成功制备出抗Hu NRP1b的m Ab,该m Ab的获得将为进一步研究Hu NRP1的功能及靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料。 展开更多
关键词 人神经菌毛素1 b结构域 单克隆抗体 血管生成
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Generation of human neutralizing monoclonal antibodies against the 2009 pandemic H 1N 1 virus from peripheral blood memory B lymphocytes 被引量:3
6
作者 Hao Wang Chi Ma Yanlai Lu Xu Ji Yongsheng Pang Fang Hua Lianxian Cui Denian Ba Wei He 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2013年第5期403-412,共10页
The 2009 H 1N 1 influenza pandemic demonstrated the significance of a global health threat to human beings. Although pandemic H 1N 1 vaccines have been rapidly developed, passive serotherapy may offer superior immedia... The 2009 H 1N 1 influenza pandemic demonstrated the significance of a global health threat to human beings. Although pandemic H 1N 1 vaccines have been rapidly developed, passive serotherapy may offer superior immediate protection against infections in children, the elderly and immune-compromised patients during an influenza pandemic. Here, we applied a novel strategy based on Epstein-Barr virus (EBV)-immortalized peripheral blood memory B cells to screen high viral neutralizing monoclonal antibodies (MAbs) from individuals vaccinated with the 2009 pandemic H1N1 vaccine PANFLU.1. Through a massive screen of 13 090 immortalized memory B-cell clones from three selected vaccinees, seven MAbs were identified with both high viral neutralizing capacities and hemagglutination inhibition (HAl) activities against the 2009 pandemic H 1N 1 viruses. These MAbs may have important clinical implications for passive serotherapy treatments of infected patients with severe respiratory syndrome, especially children, the elderly and immunodeficient individuals. Our successful strategy for generating high-affinity MAbs from EBV-immortalized peripheral blood memory B ceils may also be applicable to other infectious or autoimmune diseases. 展开更多
关键词 Epstein-barr virus HEMAGGLUTININ memory b cells neutralizing monoclonal antibody 2009 pandemicinfluenza HIN1 virus
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Preparation of Immunomagnetic Beads Enrichment Kit for Detection of Aflatoxin B1
7
作者 Wu Xiaosheng Wang Zhaoqin +5 位作者 Jia Fangfang Du Meihong Cui Tingting Cui Haifeng Cao Dongshan Wan Yuping 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2018年第3期1-3,共3页
Immunomagnetic beads enrichment kit for detection of aflatoxin B1(AFB1) was prepared through reaction of AFB1 and p-phenylenediamine. The catches of AFB1 by the kit were 25 ng/mg. Furthermore, AFB1 was conducted speci... Immunomagnetic beads enrichment kit for detection of aflatoxin B1(AFB1) was prepared through reaction of AFB1 and p-phenylenediamine. The catches of AFB1 by the kit were 25 ng/mg. Furthermore, AFB1 was conducted specific reaction with competitive drugs with similar structure or function to AFB1, including aflatoxin M1, T-2 toxin, ochratoxin A, zearalenone and patulin, and no cross reaction was observed. 展开更多
关键词 Aflatoxin b1(AFb1) monoclonal antibody Immunomagnetic beads enrichment kit
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黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究 被引量:24
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作者 谢珲 章先 +3 位作者 王歆 凡鹏程 时玉菲 方维焕 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2033-2040,共8页
【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤... 【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%-120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 单克隆抗体 间接竞争ELISA
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抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备和特性 被引量:3
9
作者 江涛 王玉平 +2 位作者 韩春卉 宫慧之 计融 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第6期558-561,共4页
目的 :建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisinB1,FB1)的酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立能分泌抗伏马菌... 目的 :建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisinB1,FB1)的酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果 :用伏马菌素B1 牛血清白蛋白 (FB1 BSA)偶联物免疫 8~ 10周龄雌性BALB/c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 / 0融合 ,经过 3~ 4次亚克隆建立了 1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株 ,命名为 5A9。将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔 ,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水 ,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化 ,得到单克隆抗体。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为 2 .5 6× 10 6,参考工作浓度为 3.2× 10 5。纯化后抗体的IgG含量为 10 .4g/L ,亲和常数为 8.3× 10 -8mol/L。该抗体与其他结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。结论 :制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体 ,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒。 展开更多
关键词 伏马菌素b1 抗体 单克隆 杂交瘤 ELISA试剂盒
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抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
10
作者 陈建玲 李文学 +2 位作者 董志宁 陈雯 朱伟 《热带医学杂志》 CAS 2012年第9期1062-1064,1079,F0004,共5页
目的建立抗伏马菌素B1(FB1)的单克隆杂交瘤细胞株,制备抗FB1的单克隆抗体(McAb)。方法采用FB1-KLH偶联物小剂量长周期免疫BALB/c小鼠后,采用细胞融合方法获得分泌抗FB1的杂交瘤细胞株,采用多次亚克隆的方法建立了4株稳定分泌抗FB1抗体... 目的建立抗伏马菌素B1(FB1)的单克隆杂交瘤细胞株,制备抗FB1的单克隆抗体(McAb)。方法采用FB1-KLH偶联物小剂量长周期免疫BALB/c小鼠后,采用细胞融合方法获得分泌抗FB1的杂交瘤细胞株,采用多次亚克隆的方法建立了4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株。腹水诱生法获得大量McAb,采用抗体亚类测定试剂盒鉴定抗体的亚类,SDS-PAGE测定抗体分子量,McAb的特异性和灵敏度用间接竞争抑制ELISA。结果免疫小鼠血清检测结果显示经过5次免疫后血清的效价稳定在1×10-6,经过4次亚克隆后建立4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株,获得腹水,纯化抗体,抗体亚类属于IgG2a类,轻链为κ,轻链和重链的相对分子质量分别是55000和32000,ELISA检测抗体特异性显示可与FB1发生特异性反应,采用此抗体建立间接竞争抑制ELISA方法的线性范围在2~500ng/ml。结论制备了特异性和灵敏度较高的抗FB1单克隆抗体,为建立伏马菌素免疫学检测方法打下良好基础。 展开更多
关键词 伏马菌素b1 杂交瘤细胞株 单克隆抗体
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中国HIV-1感染者中分离单克隆中和抗体的初步研究
11
作者 鞠斌 李丹 +5 位作者 任莉 郝彦玲 张蕾 王硕 魏民 邵一鸣 《中国病毒病杂志》 CAS 2017年第5期354-359,共6页
目的从中国人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者中分离单克隆中和抗体,并对其生物活性进行初步鉴定。方法采用抗原特异性单个B细胞分选和单克隆抗体表达技术从感染者中分离单克隆抗体,采用免疫遗传学数据... 目的从中国人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者中分离单克隆中和抗体,并对其生物活性进行初步鉴定。方法采用抗原特异性单个B细胞分选和单克隆抗体表达技术从感染者中分离单克隆抗体,采用免疫遗传学数据库(immunogenetics database,IMGT)分析抗体的可变区基因,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体的结合能力,采用TZM-bl/假病毒中和实验检测抗体的中和能力。结果从一个HIV-1CRF07_BC病毒感染者中分离到了两个单克隆抗体(A1和A6);两个抗体的重链来源于不同家系(IGHV5-51*01和IGHV4-59*01),轻链分别利用lambda链和kappa链,可变区基因的突变率较低;两个抗体与CRF01_AE、B亚型和CRF07_BC病毒的结合能力较强,可以中和Tier 1的SF162病毒(B亚型)和MW965病毒(C亚型),不能中和12个Tier 2的病毒(Global Panel)。结论本研究成功分离到了两个具有交叉反应性的单克隆中和抗体,丰富了HIV-1中和抗体的研究,也为艾滋病的抗原检测和治疗等应用领域提供备选的免疫制剂。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1(HIV-1) 单个b细胞分选 单克隆抗体 中和活性
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