基于核酸杂交反应的荧光生物传感器的制备及在黄曲霉毒素B_1检测中的应用

采用核酸适配体作为特异性识别元件,SYBR Green I(SGI)荧光染料为信号输出单元,构建了黄曲霉毒素B_1(AFB_1)生物传感器,并对试验条件进行了优化。优化的试验条件如下:适配体互补链与适配体的物质的量比为1.5,SGI加入量为10μL,适配体双链与SGI的作用时间为2 min,适配体与AFB_1作用时间为14 min。结果表明,在AFB_1质量浓度为0.1~1 000μg·L^(-1)时,荧光强度变化量与其质量浓度对数呈线性关系,检出限(3S/N)为0.081μg·L^(-1)。对实际玉米样品进行加标回收试验,回收率为95.2%~105%,测定值的相对标准偏差(n=7)均小于6.0%。与其他适配体传感器进行比较,该方法所构建的荧光适配体传感器对AFB_1的检测具有操作简便、检测范围宽、灵敏度高、特异性强、成本低廉等优点,适合现场快速测定。

2022—2023年合肥市市售花生黄曲霉毒素B_1污染状况及膳食暴露风险评估

目的了解合肥市市售花生中黄曲霉毒素B_1(aflatoxins B_1,AFT B_1)污染情况,进行相应的膳食暴露和健康风险评估,为相关防控措施的制定提供参考。方法2022—2023年通过随机抽样的方式采集合肥市9个县(市、区)中的花生样品,使用同位素稀释液相色谱-串联质谱法对样品中AFT B_1的含量进行测定;通过问卷调查的方式了解合肥市人群的坚果消费情况,以坚果消费量代替花生消费量。分析不同特征人群经花生AFT B_1暴露的情况,估算暴露限值(margin of exposure,MOE)和肝癌发病风险。结果2022—2023年共对合肥市79份花生样品开展AFT B_1检测,检出率为45.57%(36/79),超标率为13.92%(11/79)。男性、女性坚果消费量分别为(4.61±6.12)g/d和(5.21±6.44)g/d,差异无统计学意义(t=1.279,P>0.05);6~17岁、18~59岁以及≥60岁人群的坚果消费量分别为(4.90±6.28)g/d、(3.53±5.66)g/d和(3.90±6.14)g/d,差异有统计学意义(F=7.134,P<0.01)。6~17岁、18~59岁和≥60岁人群经花生的AFT B_1每日膳食暴露量分别为1.70、0.99和1.04 ng/(kg·d),MOE分别为236、403和385,引发的肝癌发病风险分别为每年0.04例/10万人、0.03例/10万人和0.03例/10万人;当严格执行AFT B_1限量标准后,MOE分别为7003、11961和11438,发病风险可分别降至每年0.0015例/10万人、0.0008例/10万人和0.0009例/10万人。结论合肥市售花生样品中AFT B_1检出率较高,建议对合肥市花生中AFT B_1污染水平开展更加全面和持续性的监测工作,并积极采取有效的控制措施,以保障居民的食品安全。

水稻维生素B_1合成相关基因OsTHIC的功能研究

【目的】维生素B_(1)(vitamin B_(1), VB_(1))是生物所必需的微量元素,其作为多个酶的辅因子,参与重要的细胞代谢途径,而水稻中维生素B_(1)合成途径还有待深入研究。本研究旨在解析水稻维生素B_(1)合成相关基因OsTHIC的生物学功能。【方法】综合运用诱变技术、色素测定、Mutmap+、基因编辑及非靶向代谢组分析等手段克隆目的基因并解析其功能。【结果】从EMS诱变的水稻突变体库中发现一个心叶白化致死突变体wll1(white leaf and lethal 1)。wll1从四叶期开始出现心叶白化表型,白化表型逐渐扩展到其他叶片并导致幼苗死亡。与野生型相比,wll1的叶绿素含量与类胡萝卜素含量显著降低。利用Mutmap+及基因编辑技术,确定目的基因为维生素B_(1)合成相关基因OsTHIC。OsTHIC在叶片具有较高表达量,OsTHIC蛋白定位于叶绿体。wll1及OsTHIC的敲除突变体中维生素B_(1)含量均显著低于野生型,外施维生素B_(1)可以恢复wll1的突变表型。外施维生素B_(1)及OsTHIC突变均会影响维生素B_(1)合成相关基因的表达。非靶向代谢组测序分析表明,野生型与wll1差异代谢物在氨基酸的生物合成、辅因子的生物合成、ABC转运器及氨酰基-tRNA的生物合成等方面显著富集。【结论】OsTHIC通过调控维生素B_(1)含量,参与氨基酸合成等代谢过程,在水稻生长发育过程中发挥重要作用。

基于适配体亲和磁珠的黄曲霉毒素B_1单样本前处理试剂盒的制备及应用

黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)适配体共价偶联于磁珠表面制备适配体亲和磁珠(aptamer affinity magnetic beads,AAMB),将AAMB、孵育液、洗涤液和洗脱液预封装于试剂条中开发了AFB_1单样本前处理试剂盒,借助真菌毒素全自动净化仪实现了AFB_1前处理的自动化,使用超高效液相色谱仪对洗脱液中AFB_1的含量进行测定。通过优化磁珠粒径、适配体间接臂长度、适配体亲和磁珠用量、孵育液体积确定了AAMB的制备条件以及AFB_1单样本前处理试剂盒的使用条件,对比了手动和自动两种前处理方式下AAMB回收率的差异。在优化条件下,AFB_1的检出限(limit of detection,LOD)为0.6 ng/mL,玉米和小麦中低、中、高三个水平的加标回收率在92.8%~110.1%之间,日内精密度的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于5.1%,日间精密度的RSD为6.7%,具有良好的灵敏度、准确性和重复性;粮油基质(玉米、糙米、花生油和花生酱)中AFB_1成分国家有证标准物质的测定结果在其扩展范围内,具有良好的基质适用性。开发的单样本前处理试剂盒借助真菌毒素全自动净化仪仅需一步操作即可在20 min内自动完成10个样品的前处理,具有时间短、通量高、批次间差异小的优点,在真菌毒素定量检测方面具有良好的应用前景,为开发针对其它靶标的自动化前处理方法奠定了基础。

基于复合纳米材料比色/荧光双信号的黄曲霉毒素B_1检测

以黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)为检测目标物,使用二氧化硅纳米颗粒为载体富集谷胱甘肽和黄曲霉毒素适配体制备识别探针,二氧化锰纳米颗粒与石墨烯量子点偶联的复合纳米材料为底物,通过谷胱甘肽与底物的反应构建了一种比色和荧光双模信号输出的高灵敏便携式检测平台。在优化条件下,对本方法的检测性能及特异性进行研究,得到比色信号的回归方程为ΔA=-0.275-0.021lg C,检出限为2.732×10^(-12) g/m L;荧光信号的回归方程为ΔF=928.733+71.779lg C,检出限为1.667×10^(-12) g/m L,两种方法都具备良好检测特异性。将该方法用于牛奶、大米、麦片、酱油和白醋5种实际样品中AFB_1的检测,并与传统方法进行对比,本方法结果具有较高的准确度。

伏马菌素B_(1)脱毒研究进展

伏马菌素B_(1)(FB_(1))是由镰刀菌产生的水溶性代谢产物,存在于镰刀菌污染了的谷物、油料作物、坚果、饲草和饲料中,是常见的真菌毒素之一。FB_(1)会对神经系统、呼吸系统、消化系统和生殖系统产生不同毒性作用,给农牧业造成不可估量的经济损失。如何对FB_(1)进行脱毒,以降低其毒性作用,是目前研究的热点。因此,本文对FB_(1)的物理脱毒、化学脱毒、生物脱毒及其应用进行综述,重点对常用于FB_(1)生物脱毒的菌株和酶及其脱毒效果、脱毒机制进行了深入探讨,以期为提高FB_(1)脱毒效率和开发新的FB_(1)脱毒方法提供参考和思路。

维生素B_(6)对动脉粥样硬化小鼠血管内皮损伤的影响及作用机制

目的探讨维生素B_(6)(VB_(6))对动脉粥样硬化(AS)小鼠血管内皮损伤的影响及作用机制。方法将36只ApoE-/-小鼠随机分为对照组、AS组、VB_(6)组、AS+LiCl组、AS+VB_(6)组和AS+VB_(6)+LiCl组,每组6只。AS组、AS+LiCl组、AS+VB_(6)组和AS+VB_(6)+LiCl组小鼠高脂饮食12周建立AS模型;对照组和VB_(6)组小鼠常规饮食、正常饮水12周。12周后,对照组小鼠常规饮食,每日给予和VB_(6)组等体积的生理盐水灌胃;VB_(6)组小鼠常规饮食,每日灌胃给予VB_(6)(50 mg·kg^(-1));AS+LiCl组小鼠继续给予高脂饮食,每日灌胃给予LiCl(1 mg·kg^(-1));AS+VB_(6)组小鼠继续给予高脂饮食,每日灌胃给予VB_(6)(50 mg·kg^(-1));AS+VB_(6)+LiCl组小鼠继续给予高脂饮食,每日灌胃给予VB_(6)(50 mg·kg^(-1))和LiCl(1 mg·kg^(-1));6组小鼠均干预4周。干预结束后,采用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性。苏木精-伊红染色观察各组小鼠胸主动脉组织形态,并计算AS斑块面积占血管总面积的百分比。离体血管环实验检测胸主动脉舒张率。免疫组织化学法检测胸主动脉中钠氢交换蛋白1(NHE1)表达。结果与对照组相比,AS组小鼠血清中NO水平和SOD活性显著下降,MDA水平显著升高(P<0.05);VB_(6)组与对照组小鼠血清中NO、MDA水平和SOD活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与AS组相比,AS+VB_(6)组小鼠血清中NO水平和SOD活性显著上升,MDA水平显著下降(P<0.05);AS+LiCl组、AS+VB_(6)+LiCl组与AS组小鼠血清中NO、MDA水平和SOD活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与AS+VB_(6)组相比,AS+VB_(6)+LiCl组小鼠血清中NO水平和SOD活性显著下降,MDA水平显著升高(P<0.05)。AS组小鼠AS斑块面积占血管总面积的百分比显著高于对照组(P<0.05);VB_(6)组与对照组小鼠AS斑块面积占血管总面积的百分比比较差异无统计学意义(P<0.05)。AS+VB_(6)组小鼠斑块面积占血管总面积的百分比显著低于AS组(P<0.05);AS+LiCl组、AS+VB_(6)+LiCl组与AS组小鼠AS斑块面积占血管总面积的百分比比较差异无统计学意义(P<0.05)。AS+VB_(6)+LiCl组小鼠AS斑块面积占血管总面积的百分比显著高于AS+VB_(6)组(P<0.05)。对照组小鼠血管内皮光滑平整,细胞排列整齐有序;AS组、AS+LiCl组和AS+VB_(6)+LiCl组小鼠的血管组织结构紊乱、血管内皮粗糙;VB_(6)组和AS+VB_(6)组小鼠的血管壁结构正常、血管内皮光滑、细胞排列有序。AS组小鼠乙酰胆碱(Ach)诱导的胸主动脉舒张率显著低于对照组(P<0.05);VB_(6)组与对照组小鼠Ach诱导的胸主动脉舒张率比较差异无统计学意义(P>0.05)。AS+VB_(6)组小鼠Ach诱导的胸主动脉舒张率显著低于AS组(P<0.05);AS+LiCl组、AS+VB_(6)+LiCl组与AS组小鼠Ach诱导的胸主动脉舒张率比较差异无统计学意义(P>0.05)。AS+VB_(6)+LiCl组小鼠Ach诱导的胸主动脉舒张率显著高于AS+VB_(6)组(P<0.05)。6组小鼠硝普钠诱导的胸主动脉舒张率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。AS组小鼠胸主动脉中NHE1蛋白表达量百分比显著高于对照组(P<0.05);VB_(6)组与对照组小鼠胸主动脉中NHE1蛋白表达量百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。AS+VB_(6)组小鼠胸主动脉中NHE1蛋白表达量百分比显著低于AS组(P<0.05);AS+LiCl组、AS+VB_(6)+LiCl组与AS组小鼠胸主动脉中NHE1蛋白表达量百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。AS+VB_(6)+LiCl组小鼠胸主动脉中NHE1蛋白表达量百分比显著高于AS+VB_(6)组(P<0.05)。结论VB_(6)可通过抑制NHE1蛋白的表达来改善AS小鼠的血管内皮损伤。

微嗜酸寡养单胞菌A2对摄食AFB_(1)污染日粮鹌鹑的保护效果

为研究微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)A2对采食AFB_(1)日本鹌鹑的保护效果,本研究在含黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))(95.34±2.62)μg/kg日粮中添加不同浓度(1 kg/t和2 kg/t)A2菌剂,饲喂30 d,通过检测鹌鹑的生产性能、器官指数、血清生化、肝肾抗氧化性能、蛋品质以及肝脏和蛋中的AFB_(1)含量等,评定A2对AFB_(1)造成危害的保护作用。结果表明:添加A2菌剂显著降低了AFB_(1)导致的鹌鹑料蛋比、肝脏和脾脏指数、血清中碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、总甘油三酯(TG)等指标升高的负面影响;A2菌剂显著提高了AFB_(1)导致鹌鹑肝肾组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)水平降低的现象;A2菌剂显著提高了AFB_(1)导致的蛋壳重量、蛋壳强度和蛋形指数降低的负面影响;A2菌剂减少了肝脏和蛋中AFB_(1)的残留。且随着A2浓度增加,改善效果越明显。综上,S.acidaminiphila A2对AFB_(1)造成鹌鹑的负面影响有一定的改善作用。

以“维生素B_(1)质量分析”为例探索药物分析实验教学改革

以药物分析综合性实验《维生素B_(1)原料药及片剂的质量研究》为例,将新教学模式应用于药物分析综合实验项目,参照药物质量控制研究岗位的工作特点把项目培养方案与该岗位的职业需求相对接,设置岗位情景、明确岗位目标、增加岗位实例。最终提高学生的岗位适应能力和职业技能。以此,培养具备专业基础扎实、严格控制药品质量、具有良好药学职业道德的综合型药学人才。

同时测定复方四维女贞子胶囊中维生素B_(1)和维生素B_(6)的含量

目的:建立高效液相色谱法测定复方四维女贞子胶囊中维生素B_(1)和维生素B_(6)的含量。方法:采用C 18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-庚烷磺酸钠溶液(0.32 g庚烷磺酸钠,加水800 mL溶解,加三乙胺2 mL,冰醋酸10 mL,加水稀释至1000 mL)(体积比7∶93)为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长:274 nm,柱温为40℃,进样体积10μL。结果:维生素B_(1)在0.4988~99.76μg范围内线性关系良好,回归方程Y=12976x-2190.4(R 2=1);维生素B_(6)在0.4822~96.44μg范围内线性关系良好,回归方程Y=11071x+1567(R 2=1);维生素B_(1)回收率为100.76%(n=9),RSD为0.7%;维生素B_(6)回收率为99.51%(n=9),RSD为0.8%。结论:该方法简便、快速、准确,为复方四维女贞子胶囊中维生素B_(1)和维生素B_(6)的含量测定提供了科学的测定方法。

基于纳米抗体的可再生免疫亲和柱结合高效液相色谱-串联质谱法测定玉米中的黄曲霉毒素B_(1)

目的研究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxinB_(1),AFB_(1))纳米抗体的表达产量的影响因素,开发具有可再生性的AFB_(1)免疫亲和柱,构建免疫亲和处理-高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定玉米中AFB_(1)污染的分析方法。方法研究诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等对AFB_(1)纳米抗体表达量的影响,比对验证AFB_(1)纳米抗体可再生免疫亲和柱的耐受性和可再生使用次数。使用70%甲醇水溶液提取玉米样品中AFB_(1),提取液通过免疫亲和柱净化富集后进行HPLC-MS/MS检测,最后进行方法学验证并应用到实际样品检测。结果诱导AFB_(1)纳米抗体表达的最优条件分别为诱导温度16℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷浓度0.5 mmol/L、诱导时间14 h,在最优条件下产量可达7.8 mg/L。AFB_(1)纳米抗体具有良好灵敏度、亲和性、特异性和甲醇耐受性,制备的AFB_(1)免疫亲和柱具有极好的可再生性,重复使用150次以上,对AFB_(1)回收率仍可达80%以上。同时,建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS,在0.1~100.0μg/L范围内呈现良好的线性关系,检出限为0.014μg/L,定量限为0.047μg/L。在3个不同加标浓度下,回收率在92.0%~104.1%,变异系数小于3.9%。结论本研究开发的AFB_(1)纳米抗体免疫亲和柱表现出优秀的再生性和高特异性,节约了检测成本,建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS检测方法操作简便、回收率高、结果准确,适用于实际玉米样品中AFB_(1)的含量测定。

黄曲霉毒素B_(1)降解菌株的分离鉴定、发酵条件的优化及活性组分分析

为筛选出一株高效降解黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))的菌株,选取土壤为菌株来源,进行富集培养,经过以香豆素为唯一碳源的初筛和添加AFB_(1)的复筛后,对筛选得到的各菌株进行16S rDNA鉴定,比对其测序结果,选取降解AFB_(1)最高的菌株,探究发酵时间、发酵温度、初始pH、接种量、培养基对菌株降解AFB_(1)的影响规律,通过正交试验优化发酵条件,并对降解方式进行初步探索。结果表明:经过初筛和复筛得到7株能够降解AFB_(1)的菌株,经鉴定均为伯克霍尔德菌属,其中Burkholderiasp.D6的AFB_(1)降解率最高;最优发酵条件为以LB培养基为发酵培养基、发酵时间84h、发酵温度37℃、初始pH 7.0、接种量10%,在此条件下Burkholderiasp.D6对AFB_(1)的降解率为(87.91±2.32)%;初步判断降解AFB_(1)的活性组分是蛋白质或者酶。综上,通过筛选得到了一种能够高效降解AFB_(1)的菌株,蛋白质或酶参与了AFB_(1)的降解。

益生菌对黄曲霉毒素B_(1)的降解作用及其在家禽生产上的应用

黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)主要存在于污染粮油及其制品中,常见的有AFB_(1)、AFB_(2)、AFG_(1)和AFG_(2)四种类型,以黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))毒性最强,对全球农业和食品安全造成极大危害。目前,常用的缓解AFB_(1)毒性的方法包括物理法、化学法和生物法,其中生物脱毒法中,益生菌作为绿色无污染的添加剂成为研究的热点。本文综述了黄曲霉毒素对家禽的危害,列举了对黄曲霉毒素具有降解作用的益生菌,阐述了益生菌的解毒机制以及在禽类生产中的应用,以期为利用益生菌降解AFB_(1)的研究及应用提供借鉴和指导。

植物维生素B_(1)生物合成及生物强化的研究进展

维生素B_(1)是所有生物所必需的微量元素,其作为多个酶的辅因子,参与重要的细胞代谢途径。人体缺乏维生素B_(1)会增加罹患心血管及神经失调性疾病的风险。与植物和微生物不同,人类和其他动物不能从头合成维生素B_(1),必须从饮食中获取。因此,研究植物中维生素的生物合成途径,并在此基础上对植物中的维生素B_(1)含量进行生物强化具有重要意义。维生素B_(1)合成途径中有许多酶的参与,如嘧啶合成酶(THIC)、噻唑合成酶(THI1)、硫胺素磷酸合成酶(TH1)、硫胺素单磷酸酶(TH2)和硫胺素焦磷酸激酶(TPK)等。结合相关研究,对维生素B_(1)在植物中的生物学功能、生物合成途径及合成相关基因的功能进行总结,并介绍了通过代谢工程实现生物强化的研究进展,以期为进一步提高植物中维生素B_(1)含量提供参考。

姜黄素在肉鸡生产中的研究与应用

姜黄素(CUR)是一种天然化合物,具有抗癌、抗炎、抗氧化、抗菌、降脂和调节免疫等多种药理作用,可以作为一种新型的饲料添加剂在畜禽饲料中应用。在饲粮中添加适量CUR可以提高肉鸡的生产性能,增强免疫力,改善畜产品品质,减轻黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))导致的肉鸡肝毒性。文章就CUR的生理功能以及其对肉鸡生产性能、肉品质、免疫功能、抗氧化能力、脂质代谢和AFB_(1)干预的影响进行阐述,以期为CUR作为新型饲料添加剂在肉鸡生产中的推广及合理应用提供参考。

利用时间分辨荧光免疫层析法同时定量检测玉米中的伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)

建立了一种可同时定量检测玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的时间分辨荧光免疫层析方法。利用活化酯法制备时间分辨荧光微球和伏马毒素抗体的偶联物,将伏马毒素抗原包被到硝酸纤维素膜上作为T线,通过优化不同T线包被条数,最终建立伏马毒素竞争性免疫层析方法。并对所建立方法的灵敏度、特异性、准确度、精密度和与国标方法分析结果的相关性进行评价。包被两条T线建立的检测方法检出限为107.68~168.28μg/kg,定量限为283.46~444.63μg/kg;与伏马毒素B_(1)、伏马毒素B_(2)和伏马毒素B_(3)的交叉反应率分别为100%、85.59%和72.72%,与其它5种常见的真菌毒素均无明显交叉;加标回收率范围88.37%~117.42%,变异系数小于10%;该方法与国标方法GB 5009.240-2016中规定的免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)检测结果的符合度在92.17%~107.21%之间。建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法能满足对玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的现场快速定量检测。

桦褐孔菌提取物对黄曲霉素B_(1)暴露小鼠肝损伤的缓解作用

[目的]探究桦褐孔菌提取物(IOE)对黄曲霉毒素B1(AFB_(1))暴露小鼠肝损伤的保护作用及机制。[方法]选取30只6周龄、体重相近的SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,对照组连续灌胃蒸馏水10 d;AFB_(1)组第1~7天连续灌胃蒸馏水,第8~10天连续灌胃2 mg/kg AFB_(1);不同浓度IOE组第1~7天分别连续灌胃25、50和100 mg/kg IOE,第8~10天各组均连续灌胃2 mg/kg AFB_(1),灌胃剂量均为0.2 mL,每天1次。试验结束后对小鼠称重并采集血液、肝脏组织,统计肝脏指数;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;利用流式细胞仪分析肝脏细胞凋亡情况。通过细胞毒性试验,筛选AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件,并以此建立肝损伤模型,给予不同浓度IOE进行干预,利用CCK-8法测定细胞活力,确定IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的剂量范围。使用ELISA法检测血清和细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测肝脏和AML12细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达量;采用Western blotting检测肝脏和AML12细胞中NLRP3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。[结果]与对照组相比,AFB_(1)组肝细胞排列紊乱、细胞肿胀,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01);血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均极显著升高(P<0.01);肝脏中TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因表达量均极显著升高,Bcl-2基因表达量极显著降低(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平极显著升高,Bcl-2蛋白水平极显著降低(P<0.01)。与AFB_(1)组相比,不同浓度IOE组小鼠炎性细胞浸润减少,细胞排列整齐,细胞凋亡率极显著降低(P<0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量极显著降低(P<0.01);肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因mRNA表达量极显著降低,Bcl-2基因表达量极显著升高(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平均极显著降低,Bcl-2蛋白水平极显著升高(P<0.01)。细胞毒性试验结果显示,AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件为10μg/mL AFB_(1)作用24 h, IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的浓度梯度为1.5、3、6μg/mL。体外试验结果显示,AML12细胞中各炎性因子分泌、凋亡相关基因及蛋白表达量变化趋势与体内试验结果均一致。[结论]IOE可通过调节NLRP3、Bax和Bcl-2表达抑制炎性因子分泌,降低细胞凋亡,进而缓解AFB_(1)暴露引起的小鼠肝脏损伤。

白藜芦醇对黄曲霉毒素B_(1)致兔肾脏损伤的保护作用

【目的】探究白藜芦醇(resveratrol,Res)对黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))致兔肾脏损伤的保护作用。【方法】将21只40日龄的家兔随机分为3组,每组7只,分别为对照组、AFB_(1)组和AFB_(1)+Res组,其中对照组饲喂基础饲粮,AFB_(1)组饲喂含0.3 mg/kg BW AFB_(1)的基础饲粮、AFB_(1)+Res组饲喂含0.3 mg/kg BW AFB_(1)和30 mg/kg BW Res的基础饲粮,试验期21 d。试验结束后观察家兔肾脏组织病理变化,检测血清中肌酐(creatinine,CRE)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA)含量,检测肾脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量/活性。【结果】与对照组相比,AFB_(1)组家兔肾脏可见肾小囊腔扩张、肾小管上皮细胞排列紊乱、细胞核模糊和脱落,且肾脏中糖原沉积增多;血清中CRE、BUN和UA含量均显著升高(P<0.05);肾脏组织中GSH-Px、SOD活性和T-AOC均显著降低(P<0.05),MDA含量显著升高(P<0.05)。与AFB_(1)组相比,AFB_(1)+Res组家兔肾脏组织结构损伤得到缓解,且糖原沉积减少;血清中CRE、BUN和UA含量均显著降低(P<0.05);肾脏组织中GSH-Px、SOD活性和T-AOC均显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。【结论】饲料中添加Res可以通过提高兔肾脏抗氧化能力、调节氧化应激水平而有效缓解AFB_(1)引起的兔肾脏损伤。

伏马毒素B_(1)对棉铃虫生长发育、解毒酶系和抗氧化酶系的影响

玉米耕作模式的转变,使伏马毒素B_(1)成为棉铃虫需要面对的新环境因素。为明确棉铃虫对这种新环境因素的适应机制,本研究测定了饲喂伏马毒素B_(1)后棉铃虫的生长发育情况及体内解毒酶、抗氧化酶活性。自棉铃虫3龄幼虫连续摄入伏马毒素B_(1)后,幼虫期7 d体质量增长量、产卵量及孵化率较对照组有不同程度的降低,棉铃虫化蛹之前的发育历期较对照组缩短,而蛹期却延长。不同浓度的伏马毒素B_(1)胁迫不同时间后棉铃虫体内酯酶的活性均显著升高,细胞色素P450和谷胱甘肽S-转移酶的活性有不同程度的变化;抗氧化酶系中,过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性在伏马毒素B_(1)胁迫1 d时较对照组均显著升高,过氧化物酶活性仅在高剂量处理5 d时显著升高。棉铃虫伏马毒素B_(1)耐受品系中羧酸酯酶、过氧化氢酶、过氧化物酶活性较敏感品系显著升高,分别上升75.40%、50.74%、117.21%。综上,摄入伏马毒素B_(1)后棉铃虫的生长发育受到影响,棉铃虫通过激活酯酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等应对伏马毒素B1的胁迫。

硒代蛋氨酸对黄曲霉毒素B_(1)致兔脾脏损伤的保护作用

【目的】旨在探究硒代蛋氨酸(selenomethionine,SeMet)对黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))致家兔脾脏损伤的保护作用。【方法】选取50只35日龄家兔,随机分为5组,每组10只,分别为对照组(基础饲粮)、模型组(0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮)、Se-1组(0.2 mg/kg SeMet+0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮)、Se-2组(0.4 mg/kg SeMet+0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮)、Se-3组(0.6 mg/kg SeMet+0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮),试验期共21 d。试验结束后取脾脏,通过HE染色观察脾脏组织形态学变化、免疫组化染色观察PCNA蛋白表达量和TUNEL染色观察细胞凋亡率,并检测脾脏组织中氧化应激水平和炎性因子的含量。【结果】与对照组相比,模型组家兔脾脏可见红髓与白髓排列紊乱,淋巴细胞数量明显减少,PCNA蛋白的表达降低并出现大量凋亡细胞。与模型组相比,饲料中添加SeMet可明显改善家兔AFB_(1)中毒引起的脾脏病理损伤;同时提高了脾脏组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性(P<0.01),降低了丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β含量(P<0.01),有效缓解了AFB_(1)中毒引起的氧化应激和炎症反应。【结论】饲料中添加SeMet可以通过提高抗氧化酶的活性,降低炎性因子的表达,有效改善AFB_(1)引起的家兔脾脏损伤。其中以0.2 mg/kg SeMet的缓解效果最佳。