为了研究蒙古马常规冷冻精液生产前后精子中蛋白质的表达变化,试验采用数据非依赖采集(data independent acquisition,DIA)定量蛋白质组学技术对3匹蒙古马精液常规冷冻前后(新鲜精液和冷冻精液)的总蛋白进行定量分析,并将总蛋白在碳水...为了研究蒙古马常规冷冻精液生产前后精子中蛋白质的表达变化,试验采用数据非依赖采集(data independent acquisition,DIA)定量蛋白质组学技术对3匹蒙古马精液常规冷冻前后(新鲜精液和冷冻精液)的总蛋白进行定量分析,并将总蛋白在碳水化合物酶(carbohydrate-active enzyme,CAZyme)、京都基因与基因百科全书同源性(Kyoto encyclopedia of proteins and genomes ortholog,KO)、基因本体论(gene ontology,GO)、真核生物同源类群(eukaryotic orthologous groups,KOG)数据库中注释;以lb(冷冻精液总蛋白的数量/新鲜精液总蛋白的数量)>2或<0.5、P<0.05筛选差异表达蛋白质(differentially expressed proteins,DEPs),对筛选到的DEPs进行GO富集分析和KEGG信号通路分析,最后对部分DEPs进行Western-blot验证。结果表明:共得到新鲜精液和冻精总蛋白数量为2429个,这些蛋白在CAZyme、KO、GO、KOG数据库分别注释到64,923,2028,1868个,分别占总蛋白数量的2.63%、38.00%、83.49%和76.90%;共筛选出1406个DEPs,其中下调DEPs为794个,上调DEPs为612个。在GO功能富集分析中,有369个下调DEPs参与了生物学进程中的生物调控,419个下调DEPs定位于细胞组分中的细胞外区域,631个下调DEPs参与到分子功能中分子功能中,31个上调DEPs参与了生物学进程中的精子发生,161个下调DEPs定位于细胞组分中的线粒体中。在KEGG通路富集分析中,有288个DEPs显著富集代谢通路中。DEPs中膜联蛋白(annexin,ANXA2)、微管蛋白α链(tubulin alpha chain,TUBA8)、精子尾部外致密纤维2(outer dense fiber of sperm tails 2,ODF2)和精子发生相关48(spermatogenesis associated 48,SPATA48)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90-alpha family class B member 1,HSP90AB1)等蛋白与精子密切相关;经Western-blot检测,HSP70和HSP90蛋白在冻精中的表达量极显著低于新鲜精液(P<0.01)。说明冻融过程严重影响了蒙古马精子中HSP70和HSP90蛋白的表达。展开更多
文摘为了研究蒙古马常规冷冻精液生产前后精子中蛋白质的表达变化,试验采用数据非依赖采集(data independent acquisition,DIA)定量蛋白质组学技术对3匹蒙古马精液常规冷冻前后(新鲜精液和冷冻精液)的总蛋白进行定量分析,并将总蛋白在碳水化合物酶(carbohydrate-active enzyme,CAZyme)、京都基因与基因百科全书同源性(Kyoto encyclopedia of proteins and genomes ortholog,KO)、基因本体论(gene ontology,GO)、真核生物同源类群(eukaryotic orthologous groups,KOG)数据库中注释;以lb(冷冻精液总蛋白的数量/新鲜精液总蛋白的数量)>2或<0.5、P<0.05筛选差异表达蛋白质(differentially expressed proteins,DEPs),对筛选到的DEPs进行GO富集分析和KEGG信号通路分析,最后对部分DEPs进行Western-blot验证。结果表明:共得到新鲜精液和冻精总蛋白数量为2429个,这些蛋白在CAZyme、KO、GO、KOG数据库分别注释到64,923,2028,1868个,分别占总蛋白数量的2.63%、38.00%、83.49%和76.90%;共筛选出1406个DEPs,其中下调DEPs为794个,上调DEPs为612个。在GO功能富集分析中,有369个下调DEPs参与了生物学进程中的生物调控,419个下调DEPs定位于细胞组分中的细胞外区域,631个下调DEPs参与到分子功能中分子功能中,31个上调DEPs参与了生物学进程中的精子发生,161个下调DEPs定位于细胞组分中的线粒体中。在KEGG通路富集分析中,有288个DEPs显著富集代谢通路中。DEPs中膜联蛋白(annexin,ANXA2)、微管蛋白α链(tubulin alpha chain,TUBA8)、精子尾部外致密纤维2(outer dense fiber of sperm tails 2,ODF2)和精子发生相关48(spermatogenesis associated 48,SPATA48)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90-alpha family class B member 1,HSP90AB1)等蛋白与精子密切相关;经Western-blot检测,HSP70和HSP90蛋白在冻精中的表达量极显著低于新鲜精液(P<0.01)。说明冻融过程严重影响了蒙古马精子中HSP70和HSP90蛋白的表达。
