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Genomic location of Gb1, a unique gene conferring wheat resistance to greenbug biotype F
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作者 Xiangyang Xu Genqiao Li +4 位作者 Guihua Bai Brett FCarver Ruolin Bian Amy Bernardo JScott Armstrong 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2023年第5期1595-1599,共5页
Greenbug(Schizaphis graminum, Rondani) is a serious insect pest in many wheat growing regions and has been infesting cereal crops in the USA for over a century. Continuous occurrence of new greenbug biotypes makes it ... Greenbug(Schizaphis graminum, Rondani) is a serious insect pest in many wheat growing regions and has been infesting cereal crops in the USA for over a century. Continuous occurrence of new greenbug biotypes makes it essential to explore all greenbug resistant sources available to manage this pest. Gb1, a recessive greenbug resistance gene in DS28A, confers resistance to several economically important greenbug biotypes and is the only gene found to be resistant to greenbug biotype F. A set of 174 F_(2:3)lines from the cross DS28A × Custer was evaluated for resistance to greenbug biotype F in 2020 and 2022. Selective genotyping of the corresponding F_(2) population using single nucleotide polymorphism(SNP) markers generated by genotyping-by-sequencing(GBS) led to the identification of a candidate genomic region for Gb1. Thus, SSR markers previously mapped in this region were used to genotype the entire F2population,and kompetitive allele specific PCR(KASP) markers were also developed from SNPs in the target region.Gb1 was placed in the terminal region of the short arm of chromosome 1A, and its location was confirmed in a second population derived from the cross DS28A × PI 697274. The combined data analysis from the two mapping populations delimited Gb1 to a < 1 Mb interval between 13,328,200 and 14,241,426 bp on1AS. 展开更多
关键词 Wheat Greenbug resistance gene gb1 KASP markers Linkage analysis Genotyping-by-sequencing
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人巨细胞病毒gB/AD1基因在CHO细胞中的表达和纯化 被引量:1
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作者 董金蓉 毛树宝 +4 位作者 谢震渊 沈谊清 吴金妍 罗剑 方芳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第5期402-409,共8页
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在自然界中普遍存在,g B是该病毒表面的一种重要糖蛋白,其AD1序列是主要的中和抗体表位之一。首先以HCMV基因组为模板,通过PCR技术扩增出g B基因的一个片段,该片段删除了跨膜区和胞内区,仅保留... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在自然界中普遍存在,g B是该病毒表面的一种重要糖蛋白,其AD1序列是主要的中和抗体表位之一。首先以HCMV基因组为模板,通过PCR技术扩增出g B基因的一个片段,该片段删除了跨膜区和胞内区,仅保留AD1中和抗体表位,然后被连接到哺乳动物细胞表达质粒p SGHV0上,与dhfr基因通过电击转染至CHO/dhfr-细胞,继而用60 nmol/L MTX筛选稳定表达细胞株,用ELISA和Western blot检测AD1重组蛋白的表达,最后用Ni2+-NTA亲和层析进行纯化。获得了真核细胞表达的重组融合蛋白,表达量约为10 mg/L,蛋白纯度可达到80%以上,为HCMV表面糖蛋白g B功能的进一步研究以及基因工程疫苗的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 gb/ad1基因 CHO细胞 稳定表达 纯化
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人Wilms瘤基因1重组腺病毒Ad5/F35的制备及感染树突状细胞后的鉴定 被引量:1
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作者 张晓颖 金悦 +1 位作者 张斌 陈虎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期135-138,共4页
目的构建人Wilms瘤基因1(WT1)重组腺病毒载体Ad5/F35并鉴定。方法运用不同病毒滴度的Ad5-EGFP和Ad5/F35-EGFP感染黑素瘤患者外周血树突状细胞(DC),用荧光显微镜检测EGFP的表达,选择对DC感染率高的腺病毒;同源重组构建Ad5/F35-WT1腺病毒... 目的构建人Wilms瘤基因1(WT1)重组腺病毒载体Ad5/F35并鉴定。方法运用不同病毒滴度的Ad5-EGFP和Ad5/F35-EGFP感染黑素瘤患者外周血树突状细胞(DC),用荧光显微镜检测EGFP的表达,选择对DC感染率高的腺病毒;同源重组构建Ad5/F35-WT1腺病毒载体,用免疫细胞化学和流式细胞术(FCM)检测WT1的表达。结果在相同滴度下,腺病毒载体Ad5/F35的感染优于Ad5;成功构建了Ad5/F35-WT1重组腺病毒,免疫细胞化学染色和FCM证实该病毒能有效介导WT1在DC中的表达。结论 Ad5/F35-WT1重组腺病毒能将WT1基因成功导入DC并有效表达。 展开更多
关键词 WT1基因 树突状细胞 ad5 F35腺病毒 鸡尾酒
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银杏内酯B对阿尔茨海默病大鼠海马Synapsin-1、Beclin1和LC3表达的影响 被引量:4
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作者 田新红 郝莉 +2 位作者 游言文 徐玉英 于世奇 《中国中医基础医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1701-1704,1759,共5页
目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)大鼠海马Synapsin-1、Beclin1和LC3的影响。方法:将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、银杏内酯B低剂量组、中剂量组和高剂量组,采用Morris水迷宫... 目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)大鼠海马Synapsin-1、Beclin1和LC3的影响。方法:将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、银杏内酯B低剂量组、中剂量组和高剂量组,采用Morris水迷宫检测学习记忆,透射电镜观察自噬,免疫组织化学分析海马Synapsin-1、Beclin1和LC3阳性神经元光密度值,荧光定量PCR检测海马Synapsin-1、Beclin1和LC3-Ⅱ的mRNA水平。结果:中、高剂量银杏内酯B可缩短AD大鼠逃避潜伏期,增加穿越平台次数,减少自噬体,提高海马组织Synapsin-1,降低Beclin1 mRNA和蛋白表达,同时下调LC3-ⅡmRNA水平。结论:银杏内酯B可改善AD大鼠学习记忆能力,可能与海马突触相关蛋白Synapsin-1上调、自噬相关基因Beclin1和LC3水平下降有关。 展开更多
关键词 银杏内酯B(gb) 阿尔茨海默病(ad) Synapsin-1 BECLIN1 LC3
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牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的原核表达及产物的抗原性分析 被引量:2
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作者 吴春涛 王建华 +3 位作者 侯艳梅 赵祥平 霍蕾 董志珍 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期523-528,共6页
采用PCR方法,以牛疱疹病毒Ⅰ型基因组DNA为模板扩增gB基因,克隆至pGEM-T载体。将以克隆质粒pGEM-T-gB为模板扩增的gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段分别连接至原核表达载体pET32a。获得的重组质粒分别转化感受态细胞BL21(DE3),在IPTG诱导下表... 采用PCR方法,以牛疱疹病毒Ⅰ型基因组DNA为模板扩增gB基因,克隆至pGEM-T载体。将以克隆质粒pGEM-T-gB为模板扩增的gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段分别连接至原核表达载体pET32a。获得的重组质粒分别转化感受态细胞BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。经SDS-PAGE鉴定,gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中以融合蛋白形式获得了表达。以磁化组氨酸蛋白纯化系统对融合蛋白纯化后,Western-blotting和ELISA分析结果表明,这些融合蛋白均与BHV-1标准阳性血清反应,可作为抗原用于牛传染性鼻气管炎ELISA检测方法的建立。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 gb基因 原核表达 纯化 抗原性分析
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牛疱疹病毒Ⅰ型gB、gE基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 被引量:1
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作者 吴春涛 李艳梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期73-75,共3页
本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gB、gE基因片段,将其克隆到pGEM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBac... 本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gB、gE基因片段,将其克隆到pGEM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHTb连接,得到了重组质粒pFBHgB、pFBHgE。经酶切和测序鉴定后,将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性、蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到了含gB、gE基因的重组穿梭载体。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 gb、gE基因 杆状病毒表达系统 载体构建
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牛疱疹病毒I型gB基因原核表达载体的构建和高效表达
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作者 吴春涛 王建华 +3 位作者 侯相山 霍雷 侯艳梅 牛钟相 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期19-23,共5页
用PCR法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型B artha N u/67株gB基因,将其插入原核表达载体pBAD/TOPO中构建重组质粒pBAD-gB。将pBAD-gB质粒转化大肠杆菌TOP 10后进行了诱导表达,对表达产物进行了纯化和抗原性检测,并通过改变诱导剂L-A rab inose的浓... 用PCR法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型B artha N u/67株gB基因,将其插入原核表达载体pBAD/TOPO中构建重组质粒pBAD-gB。将pBAD-gB质粒转化大肠杆菌TOP 10后进行了诱导表达,对表达产物进行了纯化和抗原性检测,并通过改变诱导剂L-A rab inose的浓度和诱导时间对诱导表达条件进行了优化。结果表明,重组质粒pBAD-gB构建成功,gB蛋白获得了高效表达,并以包涵体形式存在,纯化后gB蛋白的纯度达90%以上,gB蛋白抗原性良好,最佳诱导表达条件:L-A rab inose终浓度为0.2 g/L,诱导时间为5 h。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 gb基因 原核表达
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Agrobacterium-mediated Transformation of Rice (Oryza sativa L.) with Atrazine Chlorohydrolase Gene (atzA) 被引量:2
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作者 WANGSong-wen SHILi-li +6 位作者 SUNZong-xiu CAIBao-li FUYa-ping WANGYang SIHua-min LIUXia ZHANGXin 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2005年第4期241-246,共6页
Atrazine chlorohydrolase gene (atzA) was cloned from Arthrobacter sp. AD1. A plant expression plasmid was constructed under the control of CaMV35s promoter and was used in rice transformation. The target gene was succ... Atrazine chlorohydrolase gene (atzA) was cloned from Arthrobacter sp. AD1. A plant expression plasmid was constructed under the control of CaMV35s promoter and was used in rice transformation. The target gene was successfully introduced into mature embryos of a japonica rice cultivar Jindao 107 by Agrobacterium- mediated transformation and hundreds of transgenic plants were obtained. The exogenous atzA gene in the transgenic plants that expressed atrazine resistance was confirmed by Southern blot hybridization. The resistance experiments by spraying transgenic rice plants with 0.133% atrazine shown that most of the transgenic rice plants exhibited the resistance to herbicide atrazine. The segregation of exogenous atzA gene in T1 progeny corresponded to the Mendelian ratio. 展开更多
关键词 Transgenic rice Arthrobacter sp. ad1 Atrazine chlorohydrolase gene
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Complexin-1/2过表达重组载体对阿尔茨海默病小鼠记忆损伤的实验研究
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作者 张艳玲 刘建军 +1 位作者 许华 杨细飞 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第2期191-197,共7页
目的构建Complexin-1/2(CPLX-1/2)基因的重组腺相关病毒过表达载体p AAV-CPLX-1/2并研究其在阿尔茨海默病记忆损伤中的作用。方法将用Oligo 7软件对Genbank上小鼠CPLX-1/2m RNA的CDS两端序列进行分析,合成CPLX-1/2基因,构建过表达载体... 目的构建Complexin-1/2(CPLX-1/2)基因的重组腺相关病毒过表达载体p AAV-CPLX-1/2并研究其在阿尔茨海默病记忆损伤中的作用。方法将用Oligo 7软件对Genbank上小鼠CPLX-1/2m RNA的CDS两端序列进行分析,合成CPLX-1/2基因,构建过表达载体并转化至大肠杆菌Top10;选取正确的克隆进行PCR和测序鉴定。重组腺相关病毒载体测序正确后,转染AAV293细胞,包装腺相关病毒。将重组腺相关病毒经脑立体定位注射到三转基因阿尔茨海默病(3XTg-AD)小鼠海马CA3区,经免疫组化和Western-Blot检测CPLX-1/2蛋白表达情况,水迷宫检测CPLX-1/2过表达对3XTg-AD小鼠记忆的影响。结果 PCR及测序结果表明成功构建了含小鼠CPLX-1/2基因的重组腺相关病毒表达载体。CPLX-1/2在海马CA3表达显著增加。CPLX-1/2过表达显著改善3XTg-AD小鼠的记忆损伤。结论本研究成功构建了CPLX-1/2重组腺相关病毒过表达载体并在整体动物水平成功高效表达;CPLX-1/2过表达可显著改善3XTg-AD小鼠空间记忆的损伤。为在整体动物水平深入研究CPLX-1/2的功能提供了新的手段;研究结果提示CPLX-1/2可能作为AD记忆损伤治疗的关键靶点。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Complexin-1/2 重组腺相关病毒载体 基因过表达
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袋鼠疱疹病毒1型实时荧光PCR方法的建立
10
作者 王建华 王玉玲 +4 位作者 柴铭骏 张俊哲 赵丹 王乃福 陈本龙 《中国动物检疫》 CAS 2019年第1期76-79,共4页
为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光PCR检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1 gB基因呈现特异性扩增,与禽... 为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光PCR检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1 gB基因呈现特异性扩增,与禽传染性喉气管炎病毒、伪狂犬病毒和牛传染性鼻气管炎病毒不发生交叉反应,对阳性标准质粒对照(pCR-MaHV-1-gB)的最低检测限为8个拷贝数/反应。该方法的组内和组间试验的Ct值变异系数介于0.17%~0.96%之间,具有良好的重现性。试验结果表明,本研究建立的实时荧光PCR方法可用于袋鼠MaHV-1的病原学检测。 展开更多
关键词 袋鼠疱疹病毒1 gb基因 荧光PCR方法
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外压圆筒设计中的弹、塑性失效界限 被引量:5
11
作者 丁伯民 《化工设备与管道》 CAS 2003年第2期5-10,共6页
本文据ASMEⅧ -1及其它有关规范的制订原理 ,对AD规范和ASMEⅧ -1的外压圆筒设计方法进行比较 ,并指出GB150-1998对厚。
关键词 设计 ASMEⅧ-1 ad gb150 外压圆筒 图解法 解析法 弹性失稳 塑性失稳 塑性失效 安全系数 化工设备 化工管道
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低成本SerDes在数据采集中的方案设计与应用 被引量:3
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作者 文科 朱正 马敏舒 《电子技术应用》 2020年第8期88-91,共4页
介绍了低成本的1 Gb/s源同步SerDes接口应用原理,并详细阐述了低端FPGA如何与高速数据接口以及如何实现对1 Gb/s数据的可靠采样的解决方案。该接口适用于AD9653等源同步SerDes接口的数据转换器。再配合Spartan-6系列等低端FPGA的应用,... 介绍了低成本的1 Gb/s源同步SerDes接口应用原理,并详细阐述了低端FPGA如何与高速数据接口以及如何实现对1 Gb/s数据的可靠采样的解决方案。该接口适用于AD9653等源同步SerDes接口的数据转换器。再配合Spartan-6系列等低端FPGA的应用,可以大大降低数据采集系统的成本、功耗和复杂度。 展开更多
关键词 1gb/s采样对准 ad9653 Spartan-6
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牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量:4
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作者 吴春涛 李艳梅 唐少刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1259-1264,共6页
采用PCR方法从牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)Bartha Nu/67株扩增出完整的gB基因编码区,将其克隆到pGEM-T Easy载体。根据抗原性将gB基因分成3段,分别克隆到原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS... 采用PCR方法从牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)Bartha Nu/67株扩增出完整的gB基因编码区,将其克隆到pGEM-T Easy载体。根据抗原性将gB基因分成3段,分别克隆到原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析。结果显示,目的蛋白均获得了高效表达,均以包涵体形式存在,纯化后目的蛋白的纯度在90%以上。Western-blot和ELISA分析表明,重组蛋白pET-gBⅢ的反应原性最好。以纯化的pET-gBⅢ为诊断抗原包被酶标板,建立了检测BHV-1抗体的间接ELISA方法。用该间接ELISA与法国IDEXX公司的IBR抗体检测试剂盒对临床样品进行平行检测,结果二者的总符合率为93.8%。表明建立的gBⅢELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 gb基因 原核表达 间接ELISA
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