人巨细胞病毒gB/AD1基因在CHO细胞中的表达和纯化

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在自然界中普遍存在,g B是该病毒表面的一种重要糖蛋白,其AD1序列是主要的中和抗体表位之一。首先以HCMV基因组为模板,通过PCR技术扩增出g B基因的一个片段,该片段删除了跨膜区和胞内区,仅保留AD1中和抗体表位,然后被连接到哺乳动物细胞表达质粒p SGHV0上,与dhfr基因通过电击转染至CHO/dhfr-细胞,继而用60 nmol/L MTX筛选稳定表达细胞株,用ELISA和Western blot检测AD1重组蛋白的表达,最后用Ni2+-NTA亲和层析进行纯化。获得了真核细胞表达的重组融合蛋白,表达量约为10 mg/L,蛋白纯度可达到80%以上,为HCMV表面糖蛋白g B功能的进一步研究以及基因工程疫苗的开发奠定了基础。